益气化痰祛瘀方对冠心病模型大鼠pai1、tpa表达的影响
【关键词】 益气化痰祛瘀方;冠心病;纤溶酶原激活物;纤溶酶原激活物抑制物
【摘要】 目的 观察益气化痰祛瘀方对冠心病大鼠心肌及主动脉组织pai1、tpa表达的影响及作用机制。方法 采用高脂饲料、脑垂体后叶素腹腔注射建立大鼠冠心病模型，分为正常组、模型组、复方丹参滴丸对照组、益气化痰祛瘀方高、低剂量组，采用免疫组化法检测大鼠心肌和主动脉组织pai1、tpa的表达。结果 模型组大鼠心肌和主动脉组织pai1表达增强，tpa表达减弱(p<0.01);给药后各用药组pai1的表达减弱，tpa的表达增强(p<0.01);高、低剂量组均优于对照组(p<0.05或p<0.01)，高、低剂量组间无明显差异(p>0.05)。结论 益气化痰祛瘀方可通过调节心肌和主动脉组织pai1、tpa的表达，以达到治疗冠心病的目的。
【关键词】 益气化痰祛瘀方;冠心病;纤溶酶原激活物;纤溶酶原激活物抑制物
【abstract】 objective to observe the effects of prescription yiqi huatan quyu on the pai1 and tpa expression in the myocardial and aortic organization of the chd rats and explore the possible mechanism of prescription yiqi huatan quyu in the therapy of chd.methods the model of chd rats was established by feeding high fat forage and injecting pituitrin in the abdominal cavity. then these rats were divided into normal control, model control, compound danshen drop pill(control)，high dose,low dose groups. then the pai1 and tpa expression in the myocardial and aortic organization of the all groups laboratory rats were measured by immunohistochemistry method. results the pai1 expression in the myocardial and aortic organization of the model group were increased (p<0.01). the tpa expression in the myocardial and aortic organization of the model group were reduced (p<0.01). the pai1 expression reduced (p<0.01) and the tpa expression increased (p<0.01) of each treatment group.the high dose group and low dose group were more better than those of compound danshen drop pill control group(p<0.05 or p<0.01). but it had no obvious difference between high and low dose group (p>0.05).conclusions prescription yiqi huatan quyu has the effect of adjusting pai1 and tpa expression in the myocardial and aortic organization.
【key words】 prescription yiqi huatan quyu;chd;pai1;tpa
冠心病(chd)是由冠状动脉粥样硬化导致冠脉管腔狭窄和冠脉痉挛性改变，引起冠状动脉供血相对不足，致使心肌缺血、缺氧所引起的心脏疾病。WWw.11665.CoM益气化痰祛瘀方为治疗chd的效方，经多年临床应用疗效显著，但其作用机制尚不清楚。研究发现，chd的发生、发展与纤溶系统异常有着密切的关系，表现为组织型纤溶酶原激物(tpa)活性降低，tpa抑制物(pai1)活性升高〔1〕。本研究旨在通过动物实验观察：益气化痰祛瘀方对chd大鼠心肌和主动脉组织pai1、tpa表达的影响，以探讨其治疗chd的相关作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药物及组成
益气化痰祛瘀方由黄芪、桂枝、瓜蒌、薤白、半夏、川芎、赤芍、三七等组成，由河北医科大学中医学院中药制剂室制备。复方丹参滴丸，天津天士力制药股份有限公司出品。垂体后叶素注射液，南京新百药业有限公司生产。
1.1.2 仪器与试剂
bl420e+生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司)、半自动生化分析仪(德国毫迈克公司)、pm10ad光学显微镜(日本olympus)、motic6.0数码医学图像分析系统 (厦门麦克奥迪仪器仪表有限公司);总胆固醇(tc)和甘油三酯(tg)试剂盒购自保定长城临床试剂有限公司。pai1、tpa免疫组化试剂盒购于武汉博士德生物公司。
1.2 方法
1.2.1 动物分组、模型建立及给药方法
健康雄性sd大鼠60只(河北医科大学动物实验中心提供，合格证号：810054)，体重(170±10)g，随机分为正常对照组(正常组)、模型对照组(模型组)、益气化痰祛瘀方高剂量组(高剂量组)、益气化痰祛瘀方低剂量组(低剂量组)、复方丹参滴丸对照组(对照组)，每组12只;除正常组外，参考文献〔2，3〕建立大鼠chd模型，喂饲高脂饲料(2%胆固醇、10%猪油、0.2%丙基硫氧嘧啶、0.5%胆酸钠、87.3%基础饲料)6 w，同时灌服药物，高剂量组予益气化痰祛瘀方药22.28 g/kg(含生药量)、低剂量组予益气化痰祛瘀方药11.14 g/kg(含生药量)，对照组予复方丹参滴丸0.17 g/kg，正常组和模型组予等体积蒸馏水灌胃，1次/d。于末次灌胃前72 h，每次灌胃30 min后，腹腔注射垂体后叶素30 u/kg，连续3 d，1次/d。
1.2.2 检测指标
1.2.2.1 心电图检测
于造模前和末次腹腔注射垂体后叶素12 h后，20%乌拉坦腹腔注射麻醉，连接bl420e+生物机能实验系统，记录ⅱ导联心电图。
1.2.2.2 血清tc、tg的检测
末次给药后禁食24 h，麻醉下股动脉取血，分离血清，采用酶法测定血清tc、tg含量(严格按照试剂盒说明书操作)。
1.2.2.3 心肌和主动脉组织pai1、tpa表达的检测
剖取心脏和升主动脉，在心尖部取适量的心肌组织，滤纸吸干，4%多聚甲醛固定，采用免疫组织化学染色(sp)法检测心肌和主动脉组织pai1、tpa表达，每张切片选择5个高倍视野，连接motic med 6.0数码医学图像分析系统检测阳性细胞光密度值，取其均值。
1.3 统计学分析
运用spss13.0统计软件，数据用x±s表示，采用单因素方差分析和lsd检验进行组间比较。
2 结 果
2.1 益气化痰祛瘀方对chd大鼠血清tc和tg含量的影响
模型组大鼠血清tc和tg的含量较正常组明显升高(p<0.01);各用药组均能明显降低大鼠血清tc、tg含量(p<0.01);高、低剂量组大鼠血清tc含量低于对照组(p<0.05)，高、低剂量组间无明显差异(p>0.05);高剂量组大鼠血清tg含量低于低剂量组和对照组(p<0.01)，而低剂量组和对照组之间无明显差异(p>0.05)。见表1。
2.2 益气化痰祛瘀方对chd大鼠心电图st段的影响
模型组大鼠心电图st段的变化值明显高于正常组(p<0.01);给药后，各用药组大鼠心电图st段的变化值均明显低于模型组(p<0.01);各治疗组之间比较无统计学意义(p>0.05)。表1 各组大鼠血清tg、tc的含量及心电图st的变化情况
2.3 益气化痰祛瘀方对chd大鼠心肌、主动脉组织pai1、tpa表达的影响
模型组大鼠心肌和主动脉组织pai1表达增强(p<0.01)，tpa表达减弱(p<0.01);各用药组大鼠心肌和主动脉组织pai1表达均减弱(p<0.01)， tpa表达均增强(p<0.01);且高、低剂量组优于对照组(p<0.05或p<0.01)，但高、低剂量组间无明显差异(p>0.05)。见表2。表2 各组大鼠心肌、主动脉组织pai1、tpa的表达情况
3 讨 论
chd在中医学中无独立的病名，根据其病因、病机及证候，属于中医学“胸痹”、“心痛”范畴。其发病主要是由于高年体虚或中年过劳，损伤正气，脏腑功能损伤，阴阳气血失调，加之七情内伤、饮食不节、寒冷刺激、劳逸失度等因素的影响，导致气滞血瘀，胸阳不振，痰浊内生，痰瘀痹阻于心脉而致病。本病是 “本虚标实”、“虚实夹杂”的复杂过程。本虚是指气、血、阴、阳的亏损或不足，标实是指“阴寒、痰浊、血瘀”而言，尤以阳气不足，痰瘀互结最为常见。据此，课题组精选益气温阳，化瘀祛痰中药组成益气化痰祛瘀方，经临床应用疗效显著。方中黄芪、桂枝益气温阳，瓜蒌、薤白、半夏化痰宽胸，通阳散结;川芎、三七、赤芍活血化瘀，行气止痛，诸药合用共奏益气温阳，化痰祛瘀，通脉止痛之功。
现代研究提示，导致chd发生的危险因素可能通过影响tpa及pai1的活性导致机体纤溶能力降低，加速动脉粥样硬化的形成和发展。纤溶系统主要由纤溶酶原、纤溶酶、纤溶酶原激活物(pa)和pai组成。其中pa有两种类型：组织型(tpa)和尿激酶型(upa)，pa可激活纤溶酶原，降解纤维蛋白、细胞外基质和黏附蛋白;pai有四种类型：内皮细胞型pai (pai1)、胎盘型pai (pai2)、尿型pai(api3)和连接蛋白酶1(protease nexin1)，其中起重要作用的是pai1，具有灭活tpa作用。研究亦表明：血栓的形成与chd的发生、发展密切相关〔4，5〕，而纤溶系统的异常是导致血栓形成的重要原因之一。tpa和pai1是一对在维持机体纤溶系统活性起关键性调节作用的物质〔6〕，tpa可加速纤维蛋白溶解，防止血栓形成;而paii可对抗tpa，抑制纤维蛋白溶解，促进血栓形成和止血。可见pai1在chd的病理生理环节上起着关键作用〔7〕，且其高表达亦可促进巨噬细胞和平滑肌的迁徙，加速动脉硬化。因此，纤溶系统中tpa和paii平衡破坏及活性异常可能是chd发生的直接原因。
本研究结果显示：益气化痰祛瘀方可降低血清tg、tc含量，下调心肌和主动脉组织pai1受体表达，增强tpa受体表达，其疗效优于复方丹参滴丸。推测益气化痰祛瘀方治疗chd，可能是通过调节脂质代谢及纤溶系统，阻止冠状动脉粥样硬化和血栓形成，增加冠脉血流量，改善心肌供血，达到治疗chd的目的。
【参考文献】
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