【摘要】 目的 探讨中期因子（midkine，mk）蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组织化学sp法检测88例胃癌及其相应癌旁组织中的mk表达情况，并结合临床病理进行统计学分析。结果 mk在胃癌组织中高表达（表达率为77.3%），且明显高于癌旁组织。mk的表达与肿瘤分化程度、浸润深度及临床分期具有统计学意义上的相关性，与胃癌肿瘤的大小、淋巴结转移无统计学意义上的相关性。结论 ｍk可能与胃癌的发生、发展有关，能反映出胃癌组织的恶性程度及侵袭能力。
【关键词】 胃癌 免疫组织化学
中期因子（midkine，mk）是一种新的肝素结合性生长分化因子。有研究表明，mk在多种人类恶性肿瘤中过度表达，并与肿瘤的发生、发展密切相关[1，2]。mk在胃癌表达情况的研究国内鲜有报道，国外报道也不多，我们采用免疫组织化学法对88例胃癌进行研究，探讨mk的表达与胃癌生物学行为之间的关系。
1 资料与方法
1.1 资料
胃癌组织及其癌旁组织取自我院2005年4月～2006年2月行胃癌根治术切除的88例标本，所有病例均具有完整临床病理资料，且无术前放疗、化疗及其他抗癌治疗史，并经术前胃镜活检及术后病理证实。WWw.11665.CoM其中男性61例，女性27例，年龄29～86岁（平均57.8岁）。病理组织类型：管状腺癌39例，乳头状腺癌1例，粘液腺癌7例，印戒细胞癌12例，低分化腺癌26例，类癌3例。肿瘤分化程度：高、中分化腺癌43例，低分化腺癌45例。临床分期（tnm），ⅰ～ⅱ期39例，ⅲ～ⅳ期49例。肿瘤大小：≤5厘米49例，＞5厘米39例。浸润深度t19例，t235例，t334例，t410例。伴有淋巴结转移者53例，无淋巴结转移者35例。肿瘤标本取自原发灶，相应癌旁组织取自距肿瘤边缘1～2厘米附近的胃组织，经福尔马林固定，石蜡包埋。
1.2 方法
将病理常规石蜡包埋的蜡块作4μm切片，每例作连续切片2张，分别作he染色，mk免疫组织化学sp法染色。羊抗人mk多克隆抗体购于美国santa cruz公司，各组织切片常规脱蜡及水化后，依次按试剂盒说明书进行，所有切片均在同一实验室，由同一技术人员使用同一批号试剂完成免疫组织化学染色。用已知阳性对照片作阳性对照，用pbs代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定
以肿瘤细胞胞质内出现清晰棕黄色颗粒为mk阳性，结果以阳性细胞所占百分比来表示： mk抗体免疫反应细胞数＜5%为阴性（-），5%～15%为弱阳性（＋），＞15%为强阳性（＋＋）。在高倍镜下（×400）随机选取5个有代表性的视野，每个视野计数50个细胞。阳性率（%）=（弱阳性例数+强阳性例数）÷总例数×100%。
1.4 统计学处理
各组间差异显著性用χ2检验进行分析，p＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 免疫组织化学染色结果
mk在胃癌组织为高表达，68例表达阳性，其中32例弱阳性，36例强阳性，表达率为77.3%， 88例癌旁组织中仅有16例mk表达阳性，其中14例弱阳性，2例强阳性，阳性表达率为10.2%，见表1。mk染色主要位于细胞质，见图１～4。表1 mk在胃癌组织及癌旁组织的表达情况
2.2 mk蛋白表达与胃癌患者临床病理的关系
mk蛋白的表达与胃癌分化程度、临床分期（tnm）相关，高、中分化腺癌与低分化腺癌组间，以及ⅰ～ⅱ期与ⅲ～ⅳ期组间mk阳性表达率差异有统计学意义（p＜0.05）；与浸润深度密切相关； t1、t2、t3、t4组间mk阳性表达率有统计学意义（p＜0.01)，与性别及肿瘤的大小、淋巴结有无转移无相关性，男女组间，肿瘤最大径≤5厘米与＞5厘米组间，以及有无淋巴结转移组间mk阳性表达率差异无统计学意义（p＞0.05)，见表2。表2 mk表达与胃癌患者的临床病理关系
临床特征例数mk蛋白-+++阳性
率%χ2p分化程度 高、中分化303101790.0 低分化5817221970.74.198＜0.05浸润深度 t1953144.4 t2351215865.7＜0.01 t3342122094.1 t41012790.014.518临床分期 ⅰ～ⅱ3813141165.8 ⅲ～ⅳ507182586.05.022＜0.05肿瘤大小 ≤5厘米4914191671.4 ＞5厘米396132084.62.150＞0.05淋巴结转移 有5311202279.2 无359121474.20.295＞0.05性别 男6112252480.3 女27871270.41.057＞0.05
3 讨论
中期因子是日本学者kadomatsu等[3]于1988年在视黄酸诱导的小鼠胚胎肿瘤细胞系hm1细胞cdna文库中发现的一种新基因，属于肝素结合因子的一种多肽，是一种对细胞的生长和分化起重要作用的细胞因子。相对分子量为1.3×104,富含碱性氨基酸和半胱氨酸[3，4]。人mk基因染色体11p11.2,包括5个外显子：一个非编码和4个编码的外显子[5]。在小鼠胚胎形成中期，mk mrna高度表达于多种组织，所以认为其功能涉及器官形成的调节，成年后除肾脏组织外，其他正常组织几乎测不出mk mrna表达[6]。早期研究认为，mk的生物学功能主要表现为神经营养作用，认为其可能是中枢神经系统发育过程中内源性轴突生长因子，可以促进和影响神经元的存活和分化，随着研究深入，发现mk具有诱导细胞转化、促有丝分裂、血管生成、抗细胞凋亡及增强纤维蛋白溶解等多种生物学功能[7]，mk mrna在多种人类恶性肿瘤中都有过度表达，可能与肿瘤的发生和生长有密切关系。
我们采用免疫组织化学方法，检测了mk在胃癌组织及癌旁组织中的表达，结果发现mk在癌旁组织中低表达，表达率为18.2%(16/88)，而在癌组织中高表达，表达率为77.3%（68/88），两组间差异有统计学意义，这在一定程度上显示mk在胃癌的发生和（或）发展中起作用，提示mk可能作为胃癌的一个诊断指标。
本研究发现，mk的表达与肿瘤的分化程度有关，在高、中分化腺癌中阳性率为90.0%，而在低分化腺癌中阳性率为70.7%，两组之间差异有统计学意义（p＜0.05），这与aridome等报道一致[8]。在食管癌中mk的表达也出现类似情况[9，10]。鼠胚胎在妊娠的第11～13天的胃肠道上皮细胞强烈表达mk[11]，这些胚胎上皮细胞活跃增殖，但仍然保留有紧密细胞间连接的上皮细胞形态，这些胚胎性上皮细胞的特性同分化型胃癌一样，强烈地表达mk。但这并不是必然地意味着在组织类型和mk表达程度之间有某种联系，这还需要进一步的研究来确认。
本组研究还发现，mk表达与浸润深度和临床分期有关，t1、t2、t3、t4阳性率分别为44.4%、65.7%、94.1%和90.0%，mk阳性表达率有随着浸润深度的增加而逐渐增高的趋势，组间阳性表达率差异有统计学意义（p＜0.01），说明mk可能促进胃癌组织的侵袭。这与rha sy等[12]的研究结果相吻合，他们用软琼脂中集落形成胃转移实验研究发现，mk表达阳性的胃癌细胞侵袭能力强于表达阴性的细胞。与在ⅰ～ⅱ期胃癌的表达率相比（表达率65.8%），mk在ⅲ～ⅳ期胃癌中表达率增高（表达率86.0%），也提示mk有可能作为判断胃癌预后的一个参考指标。近年来，mk血清学检测已逐渐成为研究热点，由于mk前体n末端有信号肽，是一种分泌性碱性肝素结合蛋白，当组织中有mk产生且达到一定量时，血清mk水平就会升高 [13，14]。有研究发现在早期和进展期胃癌中的mk浓度是不同的，而且临床分期对mk浓度的影响要比分化程度的影响大得多，mk表达在判断预后方面也许能够成为更有用的指标[15]。ikematsu等[16]通过elisa方法研究发现，70%的恶性肿瘤患者的尿液中mk水平明显升高，因为尿液检测比血液检测更方便易行，将十分有利于肿瘤的早期诊断。
本组研究显示mk表达与胃癌淋巴结转移无相关性，提示mk可能没有直接参与癌组织的转移，当然也不排除与病例间病程及组织类型不同，淋巴结转移发生率也有所不同等因素有关。mk与肿瘤大小也没有相关性，我们认为这同样主要与病程长短不一有关，也正是如此，肿瘤大小并不能准确反应出癌组织的恶性程度及侵袭能力。mk与性别也没有相关性，这与大多数肿瘤是一致的。
上述研究表明：ｍk可能与胃癌的发生、发展有关，并能反映出胃癌组织的恶性程度及侵袭能力，提示可作为胃癌早期诊断及预后分析的指标之一。
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