【摘要】 目的 探讨食管癌组织dna含量（di）、合成期细胞比例（spf）、增殖指数（pi）与临床病理特征间的关系。方法 应用流式细胞仪测定98例新鲜食管癌组织细胞的di、spf、pi值，研究其和食管癌临床病理的关系。结果 （1）异倍体率、di、spf、pi等指标在以患者性别、肿瘤大体类型、分化程度、tnm分期等病理特征为分组对象的各组间没有发现差异有统计学意义；（2）食管组织淋巴结阳性组的spf明显大于淋巴结阴性组（p＝0.03）。结论 （1）食管组织一旦癌变后其细胞dna的改变和临床分期等病理指标没有明显关系；（2）食管癌淋巴结转移和食管癌组织合成期细胞比例（spf）有关。
【关键词】 食管癌 流式细胞术 dna倍体 增殖活性 病理
我们采用流式细胞术（fcm）测定98例食管癌新鲜组织细胞dna含量、肿瘤增殖活性，探讨它们和病理学特征之间的关系以及食管癌细胞生物学特点。
1 资料与方法
1.1 病例资料
选取2005年7～9月间在我科手术治疗的食管癌病人98例，其中男68例，女30例，年龄40～79岁，平均58.83岁。Www.11665.CoM病理组织类型均为鳞状细胞癌；病理大体分型：溃疡型50例，髓质型24例，蕈伞型7例，缩窄型2例，糜烂型1例，斑块型1例，未分型13例。
1.2 方法
1.2.1 制备单细胞悬液 取新鲜组织块（0.5×0.5cm肿瘤组织）放入平皿，pbs冲洗,剪除无用组织。组织块放入试管内，加组织裂解液5ml，然后用眼科剪将组织块剪碎至匀浆状，用吸管吸取组织匀浆，用500目的铜网过滤入试管。离心沉淀（1500r/min，10min）。用pbs洗3次，每次（500～800r/min）8min，除去细胞碎片。以350目的尼龙网过滤，除去凝聚的细胞团块。收集细胞悬液，加入70%冷乙醇固定，置4℃冰箱备用。
1.2.2 dna染色 取出冷乙醇固定好的标本，加入pbs漂洗，离心弃上清，加pi染液，4℃冰箱孵育20min，350目尼龙网过滤后上机分析。
1.2.3 dna含量测定 全部样品采用美国couter 公司epics xl型流式细胞仪测定，测定前用健康人的淋巴细胞对仪器进行校准。multicycle分析软件分析结果。
1.2.4 计算di、spf、pi
以dna指数(di)表示dna含量, di＝肿瘤细胞峰（g0／g1）的均道值／正常细胞峰（g0／g1）的均道值。di在0.90～1.10为二倍体,其余为异倍体。细胞增殖活性以合成期细胞百分比(spf)和增殖指数(pi)表示。spf＝s／（g0／g1＋s＋g2／m）×100％，pi＝（s＋g2／m）／（g0／g1＋s＋g2／m）。
1.3 统计学分析
应用spss12.0统计学软件，组间率的比较采用四格表χ2检验，两组之间均值比较采用t检验,多组之间比较采用单因素方差分析。
2 结果
2.1 dna含量、合成期比例和性别的关系
不同性别组之间食管癌组织细胞dna含量（di）、异倍体率、合成期细胞百分比（spf）、增殖指数（pi）未见显著性差异，见表1。
2.2 dna含量、合成期比例和食管癌大体病理类型的关系
各大体病理类型组之间食管癌组织细胞dna含量（di）、异倍体率、合成期细胞百分比（spf）、增殖指数（pi）未见显著性差异，见表2。
2.3 dna含量、合成期比例和肿瘤分化程度的关系
不同肿瘤分化程度组之间食管癌组织细胞dna含量（di）、异倍体率、合成期细胞百分比（spf）、增殖指数（pi）未见显著性差异，见表3。
2.4 dna含量、合成期比例和淋巴结转移的关系
淋巴结转移阴性组和阳性组之间食管癌组织细胞dna含量（di）、异倍体率、增殖指数（pi）未见显著性差异；而淋巴结转移阳性组的合成期细胞百分比（spf）明显高于淋巴结转移阴性组（p＝0.03），见表4。
2.5 dna含量、合成期比例和tnm分期的关系
tnm分期各组之间食管癌组织细胞dna含量（di）、异倍体率、合成期细胞百分比（spf）、增殖指数（pi）未见显著性差异，见表5。表1 食管癌dna异倍体率、spf、pi和性别的关系表2 食管癌dna异倍体率、spf、pi和肿瘤大体形态的关系*：包括糜烂型1例及斑块型1例表3 食管癌dna异倍体率、spf、pi和肿瘤分化程度的关系
分化程度例数二倍体数异倍体数异倍体率dispfpi高分化2381565.2%1.19±0.230.19±0.150.29±0.16中分化47202757.4%1.26±0.250.20±0.120.28±0.14低分化2451979.2%1.42±0.370.25±0.140.33±0.15p0.230.070.280.43
4例未注明分化程度表4 食管癌dna异倍体率、spf、pi和淋巴结转移的关系
淋巴结转移例数二倍体数异倍体数异倍体率dispfpi阴性60223863.3％1.31±0.310.20±0.130.29±0.13阳性3792875.7％1.34±0.290.27±0.160.35±0.17p0.210.650.03＊0.09
1例半量放疗后，放疗反应3级，无法确切分期；＊p＜0.05表5 食管癌dna异倍体率、spf、pi和临床分期的关系
1例半量放疗后，放疗反应3级，无法确切分期
3 讨论
应用流式细胞技术研究肿瘤细胞的细胞学特性是目前肿瘤研究的一个热点。大量研究表明肿瘤细胞流式学参数和临床分期、预后等临床指标有密切关系[1,2]。
食管癌dan倍体和临床病理特征的关系仍有争论。多数学者认为异倍体食管癌和性别、年龄、肿瘤部位无关[35]，在其和分化程度、临床分期的关系上存在争议，yu jm等[3]认为异倍体分化程度较二倍体差，并且临床分期也较二倍体晚，而 robeycafferty等[4] 和k y lam等 [5]研究显示异倍体和肿瘤分化程度、临床分期无关。
本研究食管癌异倍体率为67.3％，和blant sa等[6]研究结果近似。异倍体率、di、spf、pi等流式指标和患者性别、肿瘤大体类型、分化程度、tnm分期没有明显相关，说明在食管癌癌变早期处于原位癌甚至不典型增生阶段即已经出现dna水平的改变[7]，ottesen gl等[8]对乳腺癌的研究也支持这一点，原位癌阶段已有大于80%的异倍体率，和晚期乳腺癌差别不大。以上结果都说明：食管癌dna类型在早期已经建立，一旦建立以后虽然病程进展，肿瘤细胞dna类型、含量并没有明显改变。
淋巴结转移是食管癌的主要转移途径，是否有淋巴结转移、转移淋巴结的数量对食管癌的治疗及预后有显著意义，是一个非常重要的侵袭性指标。本研究显示：在食管癌淋巴结阴性组和阳性组中，异倍体率、di、pi 没有发现明显差异，而淋巴结阳性的食管癌组织spf明显大于淋巴结阴性组（p＝0.03），说明食管癌组织侵袭性和dna倍体类型关系不大，而和肿瘤组织中s期细胞所占的比例有关，s期细胞比例越大，肿瘤的侵袭性就越强。
【参考文献】
［1］ satya n das, pratima khare, asawari patil，et al. association of dna pattern of metastatic lymph node with disease free survival in patients with intraoral squamous cell carcinoma[j]. indian j med res,2005, 122(3):216223.
[2] sinicrope fa, rego rl, halling kc,et al.prognostic impact of microsatellite instability and dna ploidy in human colon carcinoma patients[j]. gastroenterology,2006,131(3):729737.
[3]yu jm, yang lh, guo q, et al.flow cytometric analysis dna content in oesophageal carcinoma: correlation with histologic and clinical features[j]. cancer,1989,64(1):8082.
[4] robeycafferty ss, elnaggar ak, sahin aa,et al. prognostic factors in oesophageal squamous carcinoma: a study of histologic features, blood group expression, and dna ploidy[j]. am j clin pathol,1991,95(6):844849.
[5] ky lam, lily ma, simon y k law,et al. use of flow cytometry in the analysis of stage iii squamous cell carcinoma of the oesophagus and its association with mib1[j]. j clin pathol,1996,49(12):975978.
[6]blant sa, ballini jp, caron ct,et al. evolution of dna ploidy during squamous cell carcinogenesis in the esophagus[j]. dis esophagus,2001,14(34):178184.
[7] gimenez a,minguela a, de haro lm,et al. dna ploidy status and proliferative activity as markers of malignant potential in barrett's esophagus: flow cytometric study using routinely paraffinembedded tissue[j]. world j surg,2000,24(1):7277.
[8] ottesen gl. carcinoma in situ of the female breast. a clinicopathological, immunohistological, and dna ploidy study[j]. apmis suppl,2003,(108): 167.
