【摘要】 目的 观察麻红止哮合剂对与哮喘气道重塑密切相关的血管内皮生长因子(vegf)与碱性成纤维细胞生长因子(b-fgf)的影响,探讨其治疗哮喘慢性持续期的作用途径。方法 sd大鼠40只,随机分为正常组、造模组、激素组和中药组。以腹腔注射100 g/l卵蛋白(ova) 1 ml和10 g/l 的ova吸入激发制成支气管哮喘模型。激素组和中药组在每次雾化前20 min给予强的松或中药干预。空白组和造模组在每次雾化前20 min给予2 ml生理盐水。用elisa法测定血清vegf与b-fgf浓度。结果 造模组血清vegf与b-fgf浓度较正常组、激素组和中药组明显增加(p<0.05)。正常组、激素组和中药组组间比较,血清vegf浓度有显著差异(p<0.05)；正常组、激素组和中药组组间比较,血清b-fgf浓度无显著性差异(p>0.05)。结论 麻红止哮合剂治疗哮喘慢性持续期的作用途径,可能有一部分是通过降低血清vegf、b-fgf浓度来延缓支气管哮喘气道重塑的形成,具有和强的松相似的效果。
【关键词】 支气管哮喘；气道重塑；血管内皮生长因子；碱性成纤维细胞生长因子；大鼠
abstract：objective to investigate the effect of mahong decoction on serum vegf and b-fgf of rat model bronchus asthma airway remolding. method forty sd rats randomly divided into four groups： blank group, asthma group, hormone group, chinese medicine group. the asthmatic model was established by sensitization and challenge with ovalbumin, and the rats in the hormone group and chinese medicine group conferred hormone and chinese medicine before the challenge. elisa was used to measure the level of serum vegf and b-fgf. results the serum vegf and b-fgf in asthma group was higher than in other groups (p<0.05). the level of serum vegf in blank group, hormone group, chinese medicine group were different (p<0.05). the level of serum b-fgf in blank group, hormone group, chinese medicine group were similar (p>0.05). conclusion mahong decoction may control the level of serum vegf and b-fgf of rat model of bronchus asthma airway remolding, which has the similar result with hormone.
key words：bronchus asthma；airway remolding；vegf；b-fgf；rat
麻红止哮合剂是本院呼吸科治疗支气管哮喘的常用方剂,在临床上取得了较好的疗效。WWw.11665.Com我们建立了大鼠支气管哮喘模型(以下简称哮喘模型),以观察其气道重塑的改变,通过麻红止哮合剂对其干预,初步探讨其治疗哮喘慢性持续期的作用途径,观察其对与哮喘气道重塑密切相关的血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,vegf)与碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b-fgf)的影响,为临床应用提供可靠的理论依据。
1 实验材料
1.1 动物
健康雄性sd大鼠40只,体重(200±10)g,北京维通利华实验动物技术有限公司提供[许可证号：scxk(京)2002－0003]。
1.2 药物
卵蛋白(ovalbumin,ova)gradeⅱ,购于sigma公司。灭活百日咳杆菌苗,购于北京生物制品研究所。氢氧化铝,购于北京市化学试剂公司,批号20050412。3.5%水合氯醛,批号 20060315,西苑医院制剂室提供。强的松,购于天津力生制药股份有限公司,批号0512056。血清vegf试剂盒、血清b-fgf试剂盒,购于北京金鑫然医药有限责任公司,批号20050615。麻红止哮合剂(炙麻黄、红景天、白果、生地黄、穿山龙、川芎、黄芩等),中国中医科学院西苑医院制剂室(批号 20060321), 1 ml药液相当于4 g原药材,再根据实验要求进行稀释。
1.3 主要仪器和设备
402型医用雾化器,上海合力医疗器械厂生产；80-2台式离心机,上海医疗器械厂生产。
1.4 大鼠分组及哮喘模型的建立
参考文献[1-3]方法制作哮喘模型。配置成每1 ml含ova 100 mg、氢氧化铝100 mg、灭活百日咳杆菌约6×109个的溶液。第1天每只大鼠腹腔注射以上溶液1 ml,第8天重复腹腔注射1 ml。第15天将致敏大鼠置于密闭喷雾箱,给予10 g/l的ova生理盐水溶液,超声雾化,每天激发20 min,连续14 d,制成支气管哮喘模型。
40只大鼠随机分为4组,每组10只,中国中医科学院西苑医院二级动物室[饲养设施合格证号syxk(京)2003－0008]适应性喂养1周后开始实验。正常对照组(正常组)：腹腔注射及雾化均用生理盐水,每天雾化吸入前20 min用2 ml生理盐水灌胃；空白造模对照组(造模组)：ova造模后,每天激发前20 min用2 ml生理盐水灌胃；激素对照组(激素组)：ova造模后,每天激发前20 min用2 ml强的松溶液灌胃(每日强的松0.3 mg/100 g体重)；中药实验组(中药组)：ova造模后,每天激发前20 min用2 ml麻红止哮合剂灌胃(每日1.8 g/100 g体重)。
1.5 标本的采集
各组大鼠在末次激发后24 h内收集标本,用3.5%水合氯醛(1 ml/100 g体重)腹腔注射麻醉大鼠,腹主动脉取血,静置1 h后,2 500 r/min离心15 min,分离血清,分别用血清vegf试剂盒、血清b-fgf试剂盒,采用elisa方法测定vegf、b-fgf浓度。
1.6 统计学方法
统计分析采用spss10.0软件进行计算,数据以x±s表示,两两比较采用t检验,组间比较采用方差分析。
2 结果
2.1 体征观察
正常组大鼠呼吸平稳,行动灵活,反应灵敏,体重稳定增长,毛色光泽。造模组出现呼吸急促,轻度紫绀,行动迟滞或俯伏不动,反应迟钝,体重减轻,毛色失去光泽。激素组、中药组大鼠体重增长低于正常组,其它体征变化不明显。
2.2 elisa方法测定血清vegf、b-fgf
(见表1)表1 各组大鼠血清vegf、b-fgf水平变化(略) 注：与模型组比较,＃p<0.05；与正常组比较,*p<0.05。
3 讨论
麻红止哮合剂是我们应用多年的有效方药,方中麻黄辛、微苦、温,归肺、胃、膀胱经,具有宣肺平喘之功,研究表明,麻黄除具有平喘镇咳作用外还具有抗急性血瘀证形成作用[4]；红景天味甘、涩、性平,归肺经,具有清肺止咳之功,研究表明,红景天能够解除支气管平滑肌痉挛,抑制兔缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖,增加血液的载氧能力。两药共为君药。穿山龙甘、苦、温,归肝、肺经,具有祛痰通络之功；川芎辛、温,入肝、胆经,为血中气药,能够行气开郁、祛风燥湿。两药共为臣药,助麻黄、红景天宣肺定喘,祛痰通络。再加白果祛痰止咳平喘、生地黄补肺益肾平喘、黄芩清热化痰平喘为佐药,诸药合用,使肺络得通,痰瘀得清,气机通畅,喘哮自平。
本研究发现,哮喘造模组的血清vegf、b-fgf浓度明显高于正常组、激素组、中药组,说明支气管哮喘确实存在血清vegf、b-fgf浓度的增高。糖皮质激素是最有效的治疗哮喘的药物,有文献报道[4],糖皮质激素能够降低哮喘大鼠气道中的vegf表达。本实验也证实糖皮质激素的干预能降低血清vegf、b-fgf浓度。麻红止哮合剂具有与其相似的效果。
【参考文献】
[1] temelkovski j,hogan sp,shepherd dp,et al.an improved murine model of asthma：selective airway inflammation,epithelial lesions and increased methacholine responsiveness following chronic exposure to aerosolized allergen[j].thorax,1998,53：849－856.
[2] 邹 晖,徐永键,朱朝霞,等.vegf与其受体2在哮喘大鼠气道中表达变化及其对气道平滑肌细胞增殖的影响[j].中国组织化学与细胞化学杂志,2005,24(3)：267－272.
[3] 王文建,杨 莉,王西华,等.川芎嗪对大鼠支气管哮喘模型气道重塑的影响及机制[j].中华结核和呼吸杂志,2004,27(12)：833－836.
[4] 陈文梅,何基渊.中药麻黄、夏枯草、乌贼骨对抗急性血瘀症形成的实验研究[j].北京中医药大学学报,1997,20(3)：39－41.
