【摘要】 目的 探讨核苷酸剪切修复基因(xpd)单核苷酸多态性与非霍奇金淋巴瘤(nhl)发病风险的关系。方法 以309例nhl患者和305例健康对照者为研究对象，采用pcrrflp技术检测xpd g23591a、a35931c位点的基因多态。结果 初步分析xpd g23591a和a35931c基因多态性与总的nhl无显著相关。对nhl亚类分析显示，在滤泡性淋巴瘤(fl)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、其他b细胞nhl和t细胞nhl中，xpd 23591位点ga+aa型频率分别为16.3%、18.0%、10.5%、18.4%，对照组为12.5%，or值分别为1.43、1.58、0.89和1.50，差异无统计学意义(p>0.05);xpd35931位点ac+cc型频率分别为15.2%、15.8%、18.4%、12.5%，对照组为11.5%，or值分别为1.41、1.48、1.75和1.12，差异亦无统计学意义(p>0.05)。结论 山东地区汉族人群xpd g23591a、g23591a位点多态性与非霍奇金淋巴瘤发病无关。
【关键词】 非霍奇金淋巴瘤;xpd;多态现象;单核苷酸
relationship between xpd genetic polymorphism and risk of nonhodgkin's lymphoma
liu jie1，zhu jingyan2, song bao1, wang zhehai1, shi yan3 ,lv liyan1
1. medical oncology, shandong tumor hospital, ji′nan 250117，china; 2. medical oncology, weifang hospital of traditional chinese medicine;3.department of hemotology, qilu hospital,shandong universityabstract：objective to explore the relationship between the single nucleotide polymorphisms of xpd (g23591a、a35931c) and individual susceptibility to nonhodgkin’s lymphoma(nhl).methods xpd g23591a and a35931c genotypes in 309 nhl cases and 305 healthy controls were detected using pcrrestriction fragment length polymorphism assay.results no significant association between the g23591a, a35931c polymorphisms and the risk of whole nhl was shown. nhl cases were subsetted into four groups: follicular lymphoma group, diffuse large bcell lymphoma group, tcell lymphoma group and other bcell lymphoma group. xpd 23591ga+aa frequencies were 16.3%, 18.0%, 10.5% and 18.4% in each group, while 12.5% in controls, the ors were 1.43, 1.58, 0.89 and 1.50, respectively. but no statistically significant difference was shown(p>0.05); xpd 35931ac+cc frequencies were 15.2%, 15.8%, 18.4% and 12.5% in each group, while 11.5% in controls, the ors were 1.41, 1.48, 1.75 and 1.12, respectively. but no statistically significant difference was shown (p>0.05).conclusion the xpd genotypes may do not contribute to the risk of developing nhl in shandong area populations.
key words：nonhodgkin lymphomas; xeroderma pigmenting group d (xpd); polymorphism; single nucleotide
非霍奇金淋巴瘤是一种常见的血液系统恶性肿瘤，近几年来发病率呈上升趋势。wwW.11665.cOm病毒感染、大剂量辐射、接触氯酚、农药、服用免疫抑制剂等是其致病因素[1]，然而机体内在遗传因素也在其发病中起了一定作用。研究表明机体内dna修复酶类可以防御致癌物的侵袭，个体dna修复功能低下者罹患肿瘤危险性增加。xpd是dna修复系统的重要成员，国内外有报道该基因多态与肺癌、皮肤癌等多种肿瘤相关[2, 3]，但有关该基因多态与非霍杰金淋巴瘤(nhl)的研究报道较少。我们以病例对照方法，采用限制性片段长度多态分析，初步探讨山东地区汉族人群xpd基因多态分布及其与nhl患病风险的关系。1 资料和方法
1.1 临床资料
2002年7月～2005年6月在山东省肿瘤医院、山东大学齐鲁医院住院治疗的nhl患者309例，其中男性173例、女性136例，均为汉族。按照淋巴组织肿瘤who新分类标准(2001)对所有病例进行分类。其中弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)139例，滤泡性淋巴瘤(fl)92例，小淋巴细胞淋巴瘤15例，套淋巴细胞淋巴瘤10例，淋巴浆细胞淋巴瘤11例，周围t细胞淋巴瘤16例，间变性大细胞淋巴瘤12例，其余类型共计14例。对照组305例由同期在上述医院查体中体检健康者组成，与nhl患者的年龄、性别分布差异无统计学意义，均为汉族。所有研究对象均知情同意和自愿参加。
1.2 实验方法
1.2.1 外周血基因组dna的提取
两组均取外周静脉血1ml，edta抗凝，应用omega公司血标本dna提取试剂盒按照操作步骤提取dna。于-20℃冰箱中保存。
1.2.2 pcrrflp检测
引物参照文献[4]由上海生工合成，xpd g23591a位点的引物为，上游5′ctgttggtgg gtgcccgtatctgttggtct3′，下游5′taatatcggggctcaccctgcagcacttcct3′,产物大小751 bp;xpd a35931c位点的引物为，上游5′gcccgctctggattatacg3′，下游5′ctatcatctcctggccccc3′,产物大小436 bp。pcr条件为94℃ 5 min;95℃ 30 s、60℃ 30 s(xpd g23591a)或61℃ 45 s(xpd g35931a)、72℃ 5 min 35个循环;72℃ 10 min。取5 μl pcr产物加入含5 u限制性内切酶的20 μl酶切反应体系中,37 ℃消化8 h , 3%琼脂糖凝胶电泳检测结果。应用styⅰ酶切g23591a位点，产生507和244 bp 2个片段的为gg型;产生474、244和33 bp 3个片段的为aa型;产生507、474、244和33 bp 4个片段的为ga型。应用pstⅰ酶切a35931c位点，产生290和146 bp 2个片段的为aa型;产生227、146和63 bp 3个片段的为cc型;产生290、227、146和63 bp 4个片段的为ac型。
1.2.3 统计学方法
分别计算nhl组和对照组xpd基因位点各基因型发生频数，以χ2 检验确定各基因型频率在病例组和对照组间差异的统计学意义。采用比值比(or值)及95%可信区间(95%ci)估计相对危险度。所有统计分析应用spss10.0软件完成。
2 结果
2.1 xpd基因g23591a、a35931c位点pcrrflp电泳图谱，见图1。
2.2 xpd基因型分布与nhl发病风险的关系
经检验病例组与对照组人群xpd多态位点的基因型分布频率符合hardyweinberg平衡定律，确定两组样本具有群体代表性。xpd g23591a位点gg、ga、aa基因型频率在对照组与nhl组中分别为87.5%、11.5%、1.0%和83.4%、15.3%、1.3%，ga、aa型者发生nhl的危险度(or值)分别为1.430(95%ci：0.891～2.295)、1.429(95%ci：0.316～6.468),差异无统计学意义(p>0.05)。xpd a35931c位点ac、cc基因型频率在对照组与nhl组中分别为88.5%、10.5%、1.0%和84.5%、13.9%、1.6%。ac、cc型者发生nhl的危险度分别为1.402(95%ci：0.860～2.288)和1.795(95%ci：0.423～7.608),差异无统计学意义(p>0.05)，见表1。表1 xpd 23591,35931位点基因型在病例组与对照组中频率分布
*or经性别年龄调整 xpd g23591a:有2例对照和2例病例未扩增出2.3 xpd基因型分布与各种类型nhl发病风险的关系
进一步将nhl分为滤泡性淋巴瘤(fl)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、t细胞nhl和其他b细胞类型nhl四大类，在nhl亚组中，xpd 23591位点ga+aa型频率分别为16.3%、18.0%、10.5%、18.4%，对照组为12.5%，ga+aa表2 xpd 23591,35931位点基因型在不同类型nhl组与对照组中频率分布*or值经性别年龄校正型者患各类nhl风险分别约为1.43、1.58、0.89和1.50倍，各病例组与对照组间差异无统计学意义(p>0.05);xpd35931位点ac+cc型频率分别为15.2%、15.8%、18.4%、12.5%,对照组为11.5%，ac+cc基因型者患病风险分别为1.41、1.48、1.75和1.12倍,差异无统计学意义(p>0.05)，见表2。
3 讨论
xpd位于19号染色体长臂, 编码依赖atp的5′3′dna解旋酶,是ⅱ型转录因子h(tfⅱh)复合体的重要组成部分，参与核苷酸切除修复，并可识别和修复大范围dna损伤，如大的加合物和胸腺嘧啶二聚体等[4]。xpd基因g23591a和a35913c位点基因多态可能导致相应的氨基酸改变，引起个体dna修复能力的差异，并可能在某些肿瘤发病中起一定作用。hu等[2]对3 725名肺癌meta分析显示23591aa和(或)35913cc基因型者肺癌危险性增加;tomescu等[3]报道35913a等位基因者色素瘤发病率增加;邢德印等[5]报道xpd 23591a等位基因型且重度吸烟者罹患肺鳞癌危险性增加, 但并未增加食管癌发病风险。本研究以309例nhl患者和305例健康对照者为研究对象，分析了xpd23591、35913位点基因多态性与nhl发病的关系。初步分析显示xpd基因多态与总的nhl发病无明显相关。nhl是一类高度异质性肿瘤，按照who标准划分为几十种不同亚型，fl和dlbcl分别占30%和45%左右。我们进一步将nhl分为四大亚类：fl组、dlbcl组、其他b细胞nhl组和t细胞nhl组，经分析显示，xpd各基因型分布频率在nhl亚类和对照组之间差异无统计学意义。本研究结果表明xpd基因多态性没有在非霍奇金淋巴瘤癌变过程中发挥作用。
本研究还显示山东地区汉族人群中xpd 23591a、35913c等位基因频率分别为6.25%和5.75%，与yu等[6]报道中国人群、park等[7]报道韩国人群研究结果相似，但与欧洲及北美白种人群(约50%)差别较大[3,8]，说明不同地域和人种存在遗传差异。我们推测由于中国人群xpd多态发生率较低，对该基因功能影响较小，因此在非霍奇金淋巴瘤发病中没有起到主导地位。然而，我们不排除其他dna修复基因如xrcc1、xrcc3、xpa、xpc、xpe、xpf等在非霍奇金淋巴瘤发病中起作用。
【参考文献】
[1] mills pk, yang r, riordan d. lymphohematopoietic cancers in the united farm workers of america (ufw)，19982001[j].cancer causes control, 2005,16(7):823830.
[2] hu z, wei q, wang x, et al. dna repair gene xpd polymorphism and lung cancer risk: a metaanalysis[j].lung cancer, 2004, 46(1):110.
[3] tomescu d, kavanagh g, ha t, et al. nucleotide excision repair gene xpd polymorphisms and genetic predisposition to melanoma[j].carcinogenesis, 2001,22(3):403408.
[4] lunn rm, helzlsouer kj, parshad r,et al. xpd polymorphisms: effects on dna repair proficiency[j].carcinogenesis, 2000,21(4):551555.
[5] 邢德印，齐军，谭文，等.北京地区汉族人群dna修复基因xpd单核苷酸多态性与肺癌及食管癌风险的研究[j].中华医学遗传学杂志,2003,20(1):3538.
[6] yu hp, wang xl, sun x,et al. polymorphisms in the dna repair gene xpd and susceptibility to esophageal squamous cell carcinoma[j].cancer genet cytogenet, 2004, 154(1):1015.
[7] park jy, lee sy, jeon hs, et al. lys751gln polymorphism in the dna repair gene xpd and risk of primary lung cancer[j]. lung cancer, 2002, 36(1):1516.
