【摘要】 目的 研究甲基莲心碱(nef)纳米脂质体(nefnl)对小鼠脑缺氧及脑栓塞的 治疗 作用。方法 用亚硝酸钠制造小鼠脑缺氧模型，诱导剂制造小鼠脑栓塞模型。观察nefnl对这两种小鼠病模的治疗效果，并与生理盐水组、同剂量nef注射液组、普通nef脂质体组进行比较。结果 与生理盐水组相比，nef 3种制剂均能显著延长小鼠亚硝酸钠中毒后的存活时间，提高小鼠对抗脑栓塞的能力(p<0.05);与nef注射液组、普通nef脂质体组相比，nefnl的治疗效果均有明显提高(p<0.05)。结论 nefnl对小鼠脑缺氧以及脑栓塞有明显的预防保护作用。
【关键词】 甲基莲心碱;纳米脂质体;小鼠;脑缺氧;脑栓塞;疗效
(department of pharmacy,renmin hospital of wuhan university,wuhan,hubei 430060,china)abstract:objective to study the effects of neferine nanoliposomes (nefnl) on cerebral anoxia and cerebral embolism in mice.methods nano2 was used to induce cerebral anoxia in mice. cerebral embolism in mice was induced by the revulsant. the effects of nefnl was observed compared with physiological saline (negative control group),nef injection and the common nef liposomes at the same concentration (positive control groups).results compared with the negative control group,all the three nef preparations had significant effects on the two mice models.compared with the two positive control groups,nefnl could enhance the effects significantly. conclusion nefnl had promising preventative effects on cerebral anoxia and cerebral embolism in mice.
key words:nerefine; nanoliposomes; mice; cerebral anoxia; cerebral embolism; effects
甲基莲心碱(neferine,nef)是从莲子心中提取的双苄基异喹啉类生物碱，具有心血管保护、中枢保护、解毒等诸多药理活性。www.11665.COm其中，nef能够重活化有机磷中毒小鼠被抑制的脑胆碱酯酶，可能与其能通过血脑屏障(bbb)在脑内分布有关[1]。而理想的脑靶向制剂应具有的性质之一为粒子粒径≤100 nm[2]。为进一步提高nef的脑靶向性，本实验研制了nef的纳米脂质体(nefnl)，并探讨其对小鼠急性脑缺血以及脑栓塞的影响，为脑靶向性研究提供实验依据。
1 试药与动物
1.1 试药
nef纯品(武汉大学人民 医院 中药制剂实验室自制，质量分数经归一化法测定>98%);卵磷脂(sigma公司);胆固醇(上海政翔化学试剂研究所);α生育酚(sigma公司);海藻糖(南宁中诺生物工程有限责任公司);亚硝酸钠(天津市博迪化工有限公司，批号：20070216);脑栓塞诱导剂(自制，含胶原蛋白和肾上腺素，批号：20100318);其他试剂为分析纯。
1.2 动物
昆明种小鼠，体质量18～22 g，雌雄各半，武汉大学中南医院实验动物中心提供，合格证号：scxk(鄂)20080001。
广东药学院学报 第26卷 第4期 谈弋，等.甲基莲心碱纳米脂质体对小鼠脑缺氧以及脑栓塞的疗效观察
2 方法与结果
2.1 nef各种制剂的制备
2.1.1 nef注射液的制备 称取nef原料，用0.5 mol/l的hcl溶解， 0.5 mol/l的naoh调ph至6.0，加蒸馏水至足量，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，115 ℃高压灭菌30 min即得。
2.1.2 nef普通脂质体的制备 根据预试验结果及 参考 文献 [3]，拟定最佳处方工艺组合为卵磷脂∶胆固醇为5∶1(质量比)，药物∶类脂为1∶251(质量比)，药物质量浓度为0.4 mg/ml，水化介质为ph 6.5 pbs。采用薄膜分散法制备nef脂质体粗悬液。称取磷脂与胆固醇(总类脂为100 mg)，溶解于适量含α生育酚(ρ=1 mg/ml) 的三氯甲烷溶液中，加入nef甲醇溶液，搅拌均匀后转移至250 ml茄形瓶中，40 ℃恒温水浴，旋转减压蒸馏除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀类脂薄膜，继续旋转30 min后，以溶解有冻干保护剂(海藻糖)的水化介质(40 ℃)水化类脂薄膜，形成粗悬液，旋涡轻轻振摇2 h，超声2 min。
2.1.3 nefnl的制备 按“2.1.2”项下操作，最后将脂质体初悬液经高压均质机在20 kpsi( 1.4 × 106 kpa )压力下经50 nm膜挤压乳匀5～8次，直至脂质体粗悬液由浑浊变为较澄清的微带蓝色乳光的纳米脂质体悬液。
2.2 亚硝酸钠所致小鼠脑缺氧实验[4]
取小鼠40只，随机分为4组，每组10只。分别为生理盐水阴性对照组、nef注射液阳性对照组、普通nef脂质体阳性对照组、nefnl组。于实验前3 d开始，每天尾静脉注射给药1次，给药剂量为30 mg/kg，第4天最后1次给药15 min后,腹腔注射nano2溶液(质量浓度25%)250 mg/kg。记录从注射亚硝酸钠开始至死亡时间，记为小鼠存活时间。结果见表1。表1可见，与生理盐水组相比，3种nef制剂均可显著延长小鼠亚硝酸钠中毒后的存活时间(p<0.05);而与nef注射液组相比，普通nef脂质体组的存活时间差异无显著性，而nefnl组能显著延长小鼠存活时间(p<0.05)。表1 各种nef制剂对亚硝酸钠所致小鼠脑缺氧后存活时间的影响
2.3 小鼠脑栓塞实验[5]
取小鼠40只，随机分为4组，每组10只。分组方法及前3 d给药方法同“2.2”，第4天最后1次给药15 min后，尾静脉注射诱导剂(胶原蛋白225 μg /只;肾上腺素9 μg/只)0.1 ml/10 g，以诱发动物急性脑栓塞形成。观察每组动物给予诱导剂后15 min内出现偏瘫、死亡及15 min内偏瘫后恢复正常的动物数， 计算 保护率(保护率=恢复数/10)。结果见表2。用简化直接概率法[4]进行统计比较，与生理盐水组相比，3种nef制剂均能显著提高小鼠对抗脑栓塞的能力(p<0.05);与nef注射液组相比，普通nef脂质体组的保护率差异无显著性，而nefnl组能显著提高小鼠保护率(p<0.05)。表2 各种nef制剂对诱导剂致小鼠脑栓塞的影响
3 讨论
一种药物只有通过bbb并在中枢保持有效浓度，才能在中枢发挥药效。nef注射液已被证实能够通过小鼠bbb进入脑组织，且在脑组织中的浓度随给药剂量的增加而增加[1]。为进一步增加nef的脑靶向性，本研究利用纳米脂质体为载体，制备nefnl，通过其对两种小鼠脑部病模的疗效，初步判断其脑靶向性。
本研究结果表明，与生理盐水组相比，3种nef制剂均可显著延长小鼠给予亚硝酸钠后的存活时间，并能提高诱导剂所致小鼠脑栓塞的保护率(p<0.05)，提示nef本身的心血管活性显著，可提高机体的血氧利用率，增加脑血流量，增加氧气供应，从而改善机体缺氧状态，并通过扩张脑血管，有效抑制脑血栓的形成[6]。同时，与同剂量nef注射液及普通脂质体相比，nefnl可显著延长小鼠给予亚硝酸钠后的存活时间，并能提高诱导剂所致小鼠脑栓塞的保护率(p<0.05)。说明纳米脂质体作为nef的载体，可进一步增加nef在小鼠脑部的浓集，疗效显著增加。这是由于纳米脂质体的粒径在100 nm以下，这种微粒系统更容易使包封的药物进入bbb，从而提高疗效。关于nefnl的脑靶向性研究正在进行中。
【 参考 文献 】
[1] 张会杰，熊玉卿.甲基莲心碱小鼠脑内分布的研究[j].
