作者：曾维诚 张艺 段承刚 何涛 刘佳佳
【摘要】 目的 观察槲皮素对卵巢癌细胞生长的影响，为寻找治疗卵巢癌的新药物提供实验依据。方法 运用细胞培养、光镜观察及mtt法测定细胞活性等方法，对比卵巢癌细胞在槲皮素作用不同时间后的生长情况和细胞活性，探讨槲皮素对卵巢癌细胞生长的影响。结果 加入50μmol/l槲皮素后，卵巢癌细胞的生长受到明显的抑制，且呈时间依赖性。结论 槲皮素能够抑制卵巢癌细胞的生长。
【关键词】 槲皮素 卵巢癌细胞 抑制
槲皮素（quercetin, que）是一类广泛分布于被子植物的花叶部分的黄酮类化合物，研究发现槲皮素具有扩张冠脉、降血脂、清除自由基、抗炎、抗过敏、调节免疫及抗肿瘤的作用[1]。wwW.11665.com而卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，早期诊断困难，化疗药物治疗副作用大、疗效差，因此寻找价格低廉，副作用小，疗效好的药物成为卵巢癌治疗的一个重要突破口。本实验拟通过观察槲皮素对卵巢癌细胞株skov3生长的影响，为槲皮素应用于卵巢癌的临床治疗提供实验资料和理论依据。
1.材料和方法
1.1 试剂和器材
卵巢癌细胞株由四川大学华西医院妇产科惠赠；槲皮素购自sigma公司；rpmi-1640，胎牛血清（fcs）购自gibco公司；mtt购自北京华瑞生物公司。其它试剂均为国产分析纯。
c-2323型co2培养箱为美国slshelab公司产品；maximasc型超纯水仪为英国eega demon公司产品； exl-800型酶标仪为美国bio-tek公司产品；xds-1b型倒置相差显微镜为重庆光学仪器厂产品。
1.2 实验方法
1.2.1 细胞培养 将卵巢癌细胞株培养于含10％胎牛血清的rpmi-1640培养基中，于37℃，co2含量5％，湿度90％的co2培养箱中培养。至对数生长期时观察细胞形态并离心收集细胞，待用。
1.2.2 细胞分组 将上述细胞按5×104个细胞/ml的浓度重悬于rpmi-1640培养基中，接种于96孔培养板，并将细胞随机分为空白对照组（以生理盐水代替槲皮素），槲皮素组（槲皮素终浓度为50μmol/l），每组设5个复孔，分别培养12h、24h、36h和48h。培养过程中采用倒置相差显微镜观察细胞形态并拍照。
1.2.3 细胞活性检测 依据参考文献[2]，采用四氮唑盐（mtt）还原法检测细胞活性。分别于加入药物12h、24h、36h和48h后再加入mtt溶液（5mg/ml）20ul，继续培养4小时，吸出培养液，每孔加入200ul二甲亚砜震荡10min后，用全自动酶标仪490nm波长下测定各孔的吸光度（a值），并计算细胞生长抑制率。
细胞生长抑制率(％)＝1－(实验组a值÷空白孔a值)×100％。
1.2.4 实验数据处理 所得结果以均值±标准差表示，组间和组内比较采用f+q检验，p＜0.05为差异有显著性。所有处理均在spss15.0 for windows统计软件包中进行。
2. 实验结果
2.1 形态学观察
倒置显微镜下，空白对照组skov3细胞呈单层生长，多角形或短梭形，胞核圆形或椭圆形，胞浆透亮，部分细胞内可见分泌颗粒；槲皮素组细胞胞体变长，胞浆透明度下降，细胞膜皱缩，细胞边界模糊，颗粒感增强，部分细胞胞突回缩变圆，脱落呈悬浮状，可见细胞碎片。
2.2 细胞活性检测
mtt法检测细胞活性。槲皮素作用于卵巢癌细胞后，各组细胞的吸光度值（a值）随时间的延长而逐渐降低，生长抑制率则逐渐升高，表明槲皮素对skov3的生长有抑制作用，且具有时间依赖性。
3．讨论
卵巢癌是女性生殖器官常见的肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位。但因卵巢癌致死者，却占各类妇科肿瘤的首位，对妇女生命造成严重威胁。其原因在于卵巢癌临床无症状，鉴别其组织类型及良、恶性困难，在治疗上主要采用顺铂、阿霉素等化疗药物，这些药物在杀伤肿瘤细胞的同时，也会影响正常细胞的代谢，因此寻找副作用小，疗效好，价格低廉的药物成为卵巢癌治疗中的一个重要突破口。
槲皮素是一种具有多种生物学活性的黄酮类化合物，广泛分布于被子植物的花叶部分，资源丰富，无毒无味。研究发现槲皮素具有多种药理作用，能抑制人肝癌细胞、人淋巴瘤细胞、人白血病细胞、人宫颈癌细胞等多种肿瘤细胞的增殖生长[3]，但尚无槲皮素对卵巢癌细胞系作用的相关研究。本课题在前期研究的基础上[4]，用浓度为50μmol/l的槲皮素作用于卵巢癌细胞株，结果表明槲皮素对卵巢癌细胞株skov3的生长具有抑制作用，且其作用强度与作用时间成正比。根据相关文献，槲皮素可能通过以下作用机制发挥其抗癌作用[5、6]：1、通过抗氧化及清除自由基等机制抑制致癌、促癌剂；2、通过作用于肿瘤细胞中信号传递过程中的一些激酶发挥抗癌作用；3、诱导肿瘤细胞凋亡；4、抑制rna聚合酶活性；5、影响细胞周期。槲皮素是否也通过上述机制抑制卵巢癌细胞的生长尚有待于在本实验的基础上进一步深入研究。
本研究建立了槲皮素抑制卵巢癌细胞生长的细胞模型，为槲皮素应用于卵巢癌的临床治疗提供了实验资料和理论依据，通过深入研究和进行相关临床实验，有望为卵巢癌治疗寻找一类新药物。
参 考 文 献
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[2]吴尚辉，邓朝晖，罗学滨，等.卵巢癌细胞mtt法快速药物敏感实验[j].中国医师杂志，2004，6（8）：1139－1140.
[3]翟莺莺，周蕾，赖永红等.槲皮素抗肿瘤作用的研究[j].现代临床医学生物工程学杂志，2005，11（1）：18－20.
[4]宋传旺，刘佳佳,段承刚等.槲皮素对lps延迟中性粒细胞自发性凋亡效应的抑制作用[j].中国免疫学杂志，2005，21（1）：13－16.
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[6]kim sh, yeo gs, lim ys, et al. suppression of multidrug resistant via inhibition of heat shock factor by quercetin in mdr cell[j]. exp mol mnd, 1998,30(2):87-90.
