作者：王祥培，许士娜，吴红梅，王婷婷
【摘要】 目的对天胡荽药材中槲皮素进行薄层鉴别，并建立天胡荽药材中槲皮素的含量测定方法。方法采用薄层色谱法对天胡荽药材中槲皮素进行鉴别。并采用高效液相色谱法进行含量测定，色谱柱为dikma公司diamonsil c18（250 mm×4.6 mm，5μｍ）；流动相为乙腈- 0.1%磷酸（45∶55）；流速0.8 ml/min。检测波长370 nm，柱温25℃。结果薄层色谱可鉴别槲皮素。槲皮素在0.010 88～0.108 8μg范围内线性关系良好，r=0.999 8，平均回收率为97.77%，rsd=1.00%。结论此法简便、准确，可用于天胡荽药材的质量控制。
【关键词】 天胡荽；槲皮素；薄层色谱法；高效液相色谱法
天胡荽为伞形科植物天胡荽hydrocotyle sibthorpioides lam.或破铜钱hydrocotyle sibthorpioides lam.var.batrachium（hance）hand.-mazz.ex shan的干燥全草，具有清热解毒、利湿之功效，用于黄疸型肝炎、胆结石、目翳［1］治疗。wwW.11665.cOM天胡荽含槲皮素（quercetin）、槲皮素-3-半乳糖苷（quercetin-3-galactoside）等黄酮类化合物［2］，其中槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突变等多种功能［3］，是天胡荽药材的有效成分之一。本实验采用薄层色谱及高效液相色谱对天胡荽药材中槲皮素进行定性与定量研究，为控制天胡荽药材的质量提供简便、有效的方法。
1 仪器与试药
agilent1100型高效液相色谱仪(自动进样品)，二极管阵列检测器(dad)； ab104-n型电子天平(德国mettler-toledo group公司)；薄层色谱硅胶g（青岛海洋化工有限公司）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸镏水；槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100081-200406）；10批天胡荽药材样品采自贵州各地，经笔者鉴定为伞形科植物天胡荽hydrocotyle sibthorpioides lam.和破铜钱hydrocotyle sibthorpioides lam.var.batrachium（hance）hand.-mazz.ex shan的干燥全草。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别
2.1.1 供试品溶液的制备
取干燥至恒重的天胡荽药材粉末约3 g，精密称重，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)提取液75 ml，置水浴中加热回流1 h，滤过，将滤液水浴蒸干，用适量蒸馏水溶解，移至分液漏斗中，加醋酸乙酯30 ml（10，10，10 ml）萃取，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇3ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。
2.1.2 对照品溶液的制备
精密称取槲皮素对照品13.6 mg，置50 ml的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.1.3 薄层色谱法［4］
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及槲皮素对照品溶液各10 μl分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶g薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）为展开剂，置盐酸蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.2 hplc测定
2.2.1 色谱条件
色谱柱为dikma公司diamonsil c18（250 mm×4.6 mm，5 μｍ）；流动相为乙腈- 0.1%磷酸（45∶55）；流速0.8 ml/min。检测波长370 nm，柱温25℃。进样量10 μl。理论塔板数按槲皮素计算，应不低于5 000。在此色谱条件下，槲皮素对照品、天胡荽药材的hplc图谱见图1～2。
2.2.2 对照品溶液的制备
精密吸取“2.1.2”项下的槲皮素对照品溶液1ml，置25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备
取干燥至恒重的天胡荽药材粉末约0.5 g，精密称重，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)提取液25 ml，称定重量，置水浴中加热回流1 h，放冷，称重，用提取液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5 ml至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm) 滤过，取续滤液,即得供试品溶液。
2.2.4 线性关系考察
精密吸取槲皮素对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μl，进样，测定峰面积，以色谱峰面积为纵坐标， 槲皮素进样量为横坐标，进行线性回归分析，线性回归方程: y=6 442.9x-1.491 5，r=0.999 8，结果表明槲皮素在0.010 88～0.108 8 μg进样量与峰面积的线性关系良好。
2.2.5 精密度实验吸取
对照品溶液10 μl，连续进样5次，记录色谱图，结果槲皮素峰面积的rsd为0.19%。
2.2.6 稳定性实验
取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10 h进样，记录色谱图，结果槲皮素峰面积的rsd为1.15%。表明供试品溶液在10 h内稳定。
2.2.7 重复性实验
取同批药材5份，精密称定，按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法制备并测定，槲皮素平均含量为0.11%，rsd为0.96%。
2.2.8 加样回收率实验
取已知含量天胡荽粉末5份，每份约0.25 g，精密称定，分别精密加入一定量的槲皮素对照品溶液，按“2.2.3”项下方法制备并测定，结果回收率平均值为97.77%，rsd为1.00%。
2.2.9 样品含量测定
精密吸取对照品溶液与10批天胡荽药材供试品溶液各10 μl，按上述色谱条件测定，测定峰面积积分值,按外标法计算槲皮素的含量。结果见表1。表1 样品中槲皮素的含量（略）
3 讨论
通过实验发现，在槽内先加入展开剂，再在展开缸内用小烧杯盛上盐酸，然后进行薄层板预饱和30min，再展开，其色谱斑点圆而集中，分离度较好。
天胡荽药材除了含有槲皮素外，还有多种黄酮苷，本文以盐酸和硫酸作为水解酸进行了比较，还对水解酸的浓度、溶剂和提取时间进行了考察。结果本文所用的条件较好。
曾对甲醇-水（50∶50）、甲醇-0.1%磷酸（50∶50）、乙腈- 水（45∶55）等流动相进行考察，发现上述条件不够理想。采用乙腈- 0.1%磷酸（45∶55）作为流动相，槲皮素色谱峰能够达到基线分离，峰形对称、尖锐。
1990年版《广西中药材标准》收载天胡荽和破铜钱为天胡荽药材的来源品种，而2003年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》只收载天胡荽为天胡荽药材的来源品种，同时槲皮素的含量测定结果表明，天胡荽和破铜钱两种植物在成分含量上有明显的差异。因此，天胡荽和破铜钱两种植物的干燥全草能否同时作为天胡荽药材使用有待商榷。
在《广西中药材标准》1990年版与《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版中［1，5］，只对药材性状与粉末鉴别作了规定，本实验首次对天胡荽药材中槲皮素进行薄层鉴定与含量测定，可作为天胡荽药材质量控制的有效方法。
【参考文献】
1］广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准（1990版）［s］.南宁：广西科学技术出版社，1992，27:152.
［2］张兰，张德志.天胡荽的研究进展［j］.现代食品与药品杂志，2007，17(1):15.
［3］俞一心，戈升荣,王桂珍.槲皮素及其衍生物的药理作用研究进展［j］.中药材， 2003，26(l2):902.
［4］国家药典委员会.中国药典，一部［s］.北京：化学工业出版社，2005：附录vib.
［5］贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准［s］.贵阳:贵州科技出版社，2003:69.
