作者：陈艺文,李先荣,倪 艳,卢方晋
【摘要】 目的 建立测定木樨科苦丁茶中槲皮素的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为hypersil ods2 (4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-0.4%磷酸(47∶53)为流动相,流速为1 ml/min,检测波长为360 nm。结果 槲皮素的线性范围为0.050 4～1.008 0 μg,r＝0.999 99；平均回收率为101.61%,rsd＝1.75%(n＝5)。结论 该方法简便、准确,可以作为木樨科苦丁茶的质量控制依据。
【关键词】 木樨科苦丁茶；槲皮素；高效液相色谱法；含量测定
abstract：objective to set up the determining method of quercetinum in kuding cha of ligustrum by hplc. method hypersil ods2 chromatographic column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was adopted. methanol- 0.4% phosphoric acid (47∶53) was used as mobile phase, the flow rate was 1 ml/min, and the detecting wavelength was 360 nm. result the linear range of quercetinum was 0.050 4～1.008 0 μg, r＝0.999 99, and the average recovery was 101.61% (rsd＝1.75%, n＝5). conclusion the method is convenient and accurate, and can used be as basis of quality control for kuding cha of ligustrum.
key words：kuding cha of ligustrum；quercetinum；hplc；content determination
苦丁茶具有清热解毒、杀菌消炎、健胃消积、止咳化痰、生津止渴、提神醒脑的功效。wWW.11665.Com随着对苦丁茶木樨科女贞属植物药理作用研究的深入,发现女贞属植物具有多种生理活性,它们的根、叶、果实大多具有清热、解毒、止痛、止血、止咳、抑菌及降压作用。为控制其质量,我们采用高效液相色谱法测定了其主要化学成分槲皮素的含量,现报道如下。
1 仪器与试药
样品药材由山西省中医药研究院中药房提供,经鉴定为木樨科女贞属变紫女贞的干燥叶。槲皮素对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号081-9304)。agilent 1100高效液相色谱仪。甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱为hypersil ods2(4.6 mm×250 mm,5 μm)；甲醇-0.4%磷酸(47∶53)为流动相；检测波长360 nm,柱温30 ℃,理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于4 000。色谱图见图1。
2.2 供试品溶液的制备
取本品粉末(过3号筛)约1.0 g, 精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加80%甲醇25 ml,密塞,称定重量,加热回流1 h,放冷,再称定重量,用80%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10 ml,加入盐酸1 ml,置90 ℃水浴锅中加热回流1 h,取出,立即冷却,转移至25 ml量瓶中,加80%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取槲皮素对照品2.52 mg,置50 ml量瓶中,加80%甲醇至刻度,摇匀,即得每1 ml含50.4 μg的溶液。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取槲皮素对照品溶液(50.4 μg/ml)1、2.5、5、10、15、20 μl进样,按上述色谱条件测定。以峰面积(积分值)为纵坐标,进样量(μg)为横坐标做图,计算回归方程。回归方程为：y＝3 675x＋0.283 1,r＝0.999 99,结果表明,槲皮素进样量在0.050 4～1.008 0 μg范围内呈良好线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取槲皮素对照品溶液(50.4 μg/ml)10 μl,重复进样5次,结果峰面积的平均值为1840.8,rsd＝0.86%。
2.6 稳定性试验
取同一供试品溶液,在0、2、4、6、8 h分别进样10 μl,测得样品中槲皮素峰面积值rsd＝1.91%,结果表明,供试品溶液在8 h内稳定性良好。
2.7 重复性试验
按拟定的含量测定方法,对同一批样品分别制备5份供试品溶液,精密吸取10 μl,进样,测得槲皮素的平均含量为0.408 6 mg/g,rsd＝2.86%。结果表明,本法重复性较好。
2.8 加样回收率试验
取已测知含量样品0.5 g,研细,精密称取5份,精密加入槲皮素对照品0.20 mg,按《中华人民共和国药典》“含量测定”[1]项下方法测定,计算回收率,结果见表1。 表1 加样回收率试验结果（略）
2.9 样品含量测定
(见表2)表2 样品中槲皮素含量测定结果（略）
3 讨论
苦丁茶的原植物来源较为复杂,据调查,全国共有5科(木樨科、冬青科、金丝桃科、紫草科、马鞭草科)16变种[2],目前对冬青科冬青属苦丁茶已建立了较为完善的质量控制体系,而对木樨科女贞属苦丁茶研究较少,对其化学成分所知仍不全面。本试验只是对其主要化学成分槲皮素进行含量测定以建立质量标准,其他成分有待于进一步研究。
在流动相的选择中,试验了甲醇-0.4%磷酸(47∶53)、甲醇-0.4%磷酸(50∶50)等不同流动相系统,结果采用甲醇- 0.4%磷酸(47∶53)为流动相时,不仅分离情况好,而且保留时间短。在供试品溶液制备方法选择中,分别考察了80%甲醇、甲醇、乙醇3种不同提取溶剂,结果选择80%甲醇为提取溶剂,回流提取1 h,对苦丁茶中槲皮素提取效果好而且方法的精密度、回收率等均可以达到测定标准。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.147.
[2] 张灿坤.苦丁茶的原植物及商品调查[j].中药材,1994,17(3)：14.
