【摘要】  目的 检测孕妇血清中乙型肝炎病毒(hbv)dna的含量，研究母婴传播与hbv-dna含量的关系。找出可致胎儿宫内感染的孕妇血清hbv-dna临界值，以指导临床。方法 选择来我院产检的孕妇，应用elisa法检测hbvm 5项指标，选择hbsag阳性病例再用fq-pcr技术进行hbv-dna定量检测。选出了137例研究对象。同样对137例新生儿的脐血、静脉血分别进行上述两项检测。结果 （1）hbeag阳性组血清hbv-dna含量明显高于hbeag阴性组，差异有显著性（p<0.05），说明hbv-dna含量与hbeag的存在有明显的关系;（2）孕妇血清hbv-dna含量与新生儿静脉血hbv-dna含量呈正相关;（3）当孕妇血清hbv-dna含量>105 copies/ml时，其宫内感染率明显高于含量<105 copies/ml组，hbv母婴传播率差异有显著性(p<0.05)。结论 （1）孕妇血清hbv-dna含量的高低反映hbv垂直感染的强弱，新生儿脐血、外周血中hbv-dna含量与母血含量呈正相关;（2）孕妇血清hbv-dna含量存在影响hbv母婴传播的浓度界面；（3）孕妇血清hbv-dna含量>105 copies/ml时，其宫内感染率明显增高，可以作为hbv母婴传播的预测指标指导临床。

【关键词】  肝炎病毒 乙型 疾病传播 宫内感染 定量测定

    relationship between intrauterine infection and serum hbv-dna concentration in pregnant women

    lin jian-chun，wang xue-li，huang qiu-qun.boai hospital of shilong in dongguan,guangdong 523325，china

    ［abstract］  objective  to investigate the relationship between serum hbv-dna content in pregnant women and intrauterine infection of their fetuses.methods  hbvm was detected by elisa when pregnant women was examined in my hospital，hbv-dna was detected by fq-pcr in hbsag(+) pregnant women，newborn’s cord blood and serum hbv-dna was detected by fq-pcr in 137 hbv-dna(+) pregnant women too.results  （1）the contents of hbv-dna in hbeag positive groups were obviously higher than in the hbeag negative groups（p<0.05）.（2）the hbv-dna contents of cord blood and serum were positively correlated to those of maternal blood.（3）the intrauterine infection rate in the pregnant women whose hbv-dna contents were more than 105 copies/ml was significantly higher than that whose were less than 105 copies/ml (p<0.05).conclusion  （1）the hbv-dna contents of cord blood and serum are positively correlated to those of maternal blood.（2）it seems that the maternal serum critical hbv-dna levels may influence the mother-infant hbv transmission rate.（3）the intrauterine infection rate in the pregnant women whose hbv-dna contents are more than 105 copies/ml is significantly higher than that whose are less than 105 copies/ml.

    ［key words］  hepatitis b virus;disease transmission;intrauterine infection；quantitative determination

    乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病，流行病学已证实围生期感染的婴儿，85%～90%转为慢性病毒携带者［1］。wWw.11665.com国内外诸多研究已经证明，孕妇血hbv-dna阳性可以导致胎儿宫内感染，感染的风险随母体血清hbv-dna含量的升高而增高［2~5］。因此，通过监测孕妇血清hbv-dna浓度、降低其含量以减少hbv母婴传播，成为一个引人关注的问题［6］。本研究以hbv-dna阳性孕妇为研究对象，应用荧光定量聚合酶链反应(fq-pcr)技术检测孕妇血清及配对新生儿血清、脐血的hbv-dna含量，探讨孕妇血清hbv-dna含量对hbv母婴传播的影响。

　　1  资料与方法

    1.1  一般资料  对2003年7月~2006年7月在来我院门诊产前检查孕妇，进行hbvm 5项指标检测，对hbsag阳性者进行hbv-dna测定，以hbv-dna阳性者为研究对象。产后留脐血5 ml及婴儿股静脉血3 ml，分离血清后放-70 ℃冰箱保存。先对新生儿脐血hbv-dna进行定量检测。阳性再定量检测外周血hbv-dna，若仍为阳性，则判为宫内感染。

    1.2  试验方法

    1.2.1  血清免疫学标志物检测  应用elisa检测hbsag、hbsab、hbeag、hbeab、hbcab，乙肝elisa试剂盒由中山生物工程公司生产，按说明书操作。

    1.2.2  hbv-dna定量检测  荧光定量pcr检测法，采用ag-9600 amplisensor荧光定量系统(美国biotrom icstechnologies corp提供)测定。试剂由深圳匹基生物工程公司生产，按说明书操作。

    1.2.3  结果  表达hbv-dna定量结果以指数形式表示，测定范围为103～1010 copies/ml。

    1.3  统计分析方法  全部数据用spss 10.0统计软件处理。采用χ2检验，p<0.05为差异有显著性。

    2  结果

    见表1、表2。表1  孕妇不同水平hbv-dna与新生儿脐血、外周血hbv-dna阳性例数的关系表2  137例孕妇血清hbv-dna水平与hbeag的关系注：χ2=28.06，p<0.05

    2.1  宫内感染的发生情况  137例hbv-dna阳性孕妇所分娩的新生儿，有70例血清hbv-dna检测阳性，宫内感染率为51.1%(表1)。这与文献［7］的记载基本一致。

    2.2  妇孕血清hbv-dna的水平与宫内感染的关系  本文所检测的情况表明脐血、血清中的hbv-dna量与产妇中的hbv-dna也存在一个正相关性［8］，孕妇血中hbv-dna值越高，新生儿脐血、外周血中的hbv-dna拷贝数越多。随着孕妇血清hbv-dna含量的增高，胎儿发生宫内传染的危险性也增高。由表1可见105~106与106~107和108~109与>109两个相邻浓度界面间宫内感染差异无显著(p>0.05)，另三个相邻浓度界面间宫内感染差异具有显著性(p<0.05)，当孕妇血清hbv-dna含量>105 copies/ml时，其宫内感染率明显高于含量<105 copies/ml组(p<0.05)［9］。根据孕妇hbv-dna测定值，分别向下累计和向上累计婴儿hbv感染率，以分析孕妇不同hbv-dna浓度界面对hbv母婴传播的影响(表1)。本组资料向下累计和向上累计划分出5个孕妇血hbv-dna测定值界面，hbv-dna测定值在5个界面中hbv母婴传播率的差值差异均有显著性(p<0.05)。平均差值达50%以上。

    2.3  新生儿脐血与血清hbv-dna的阳性率关系  新生儿脐血与血清之间hbv-dna的阳性率差异无显著性（p>0.05）。但脐血中hbv-dna的阳性率比血清高，这是由于脐血样本易受母血污染，出现假阳性的几率大，所以不受母血污染的婴儿外周血才是确诊胎儿宫内感染hbv的依据［10，11］。

    2.4  孕妇血清hbv-dna的水平与hbeag的关系  137例hbv-dna阳性血清中hbeag阳性率高达76.4%且hbv-dna的含量有宫内感染率均比hbeag阴性者高，两者含量差异具有显著性(p<0.05)。说明这两种血清学标志模式组具有很强的传染性［9］。

    3  讨论

    孕妇血清中hbv-dna是反映hbv宿主传染性直接指标［12］，本研究采用荧光定量pcr技术，配对检测137对孕妇与婴儿hbv-dna含量，不仅显示胎儿脐血、外周血hbv-dna测定值与孕妇hbv-dna测定值呈正相关，亦证明了hbv宫内感染的风险随孕妇hbv-dna测定值增高而上升的观点［2~5］，那么，随着孕妇hbv-dna含量的变化，是否存在一个影响hbv母婴传播的浓度界面呢?即孕妇在某一血清hbv-dna水平上下，hbv母婴传播率存在明显差异。由表1可见在105~106与106~107之间，和108~109与>109之间，两个相邻浓度界面间宫内感染差异无显著（p>0.05）。由本组资料向下累计和向上累计可以看出，当孕妇血清中hbv-dna浓度，在<105与>105之间，到<109与>109之间的每一个浓度界面时，宫内感染率差异有显著性，其差值均数为50%以上。说明孕妇hbv-dna含量存在影响hbv母婴传播浓度界面［6］。

    hbv易母婴传播，而且多数发生在无症状hbv携带者，由本组资料可见：（1）当孕妇血清hbv-dna含量>105 copies/ml时，其宫内感染率明显高于<105 copies/ml组，而含量<105 copies/ml时，宫内感染率仅为5%以下。因此可将105 copies/ml作为hbv传播浓度临界值，用于预测hbv母婴传播概率。在孕妇妊娠期做血清学及hbv-dna定量监测，当孕妇血清hbv-dna含量>105 copies/ml时，积极进行免疫防护，可极大地降低宫内感染的发生率［9］。（2）当母血hbv-dna>108 copies/ml时，宫内感染率高达97.4%，据报道即使及时注射高效免疫球蛋白(hbig)仍可能有高达43%的宫内感染率［13］，据此应加强宣传，提高婚检率，孕前力争使hbv-dna至少降至这一水平以下，最好能降至105这一水平以下，hbv母婴传播的机会将会大大减少，目前迅速降低血清hbv-dna含量已有所突破［14］。随着抗病毒药物的研究进展，拉米呋啶(lamivudine)已显示能有效地抑制hbv在体内的复制［15］，这使孕前迅速降低血清hbv-dna含量、减少hbv母婴传播成为可能。

【参考文献】
  1 乐杰.妇产科学.北京:人民卫生出版社，2001，171-175.

2 burk rd，huang ly，ho gy，et al.outcome of perinatal b virus exposure is dependent on maternal virus load.j infect dis，1994，170(6):1418-1423.

3 叶庆华.乙肝病毒宫内感染的研究.国外医学·妇产科学分册，2002，29（1）：18-20.

4 刘志华，徐德忠，闫永平，等.孕妇血清中乙型肝炎病毒dna含量与胎儿宫内感染的关系.中华妇产科杂志，1999，34 :133-134.

5 lin j，liao s，han jl，et al.correlation between neonatal hepatitis b and maternal serum hepatitis b virus dna copies.pediatr res，2000，47 :342.

6 林坚，廖莳，郭广洲，等.乙型肝炎病毒dna定量在母婴传播中的意义.中华儿科杂志，2002，40（2）：84-87.

7 叶维法，钟振义.肝炎学大典.天津: 天津科学技术出版社，1996，298-314.

8 武四云，郭婧婧，陈远林，等.孕妇血清中乙型肝炎病毒复制水平与胎儿宫内感染的关系.中国现代医学杂志，2007，17（3）：360-364.

9 高艳杰.母婴血清hbv-dna定量分析及其相关意义.中国医药导报，2007，4（6）：16-17.

10 chen yl，tao gs，jiang cj，et al.laboratory study on intrauterine infection of hepatitis b virus.china journal of modem medicine，2004，14(6): 37-40.chinese

11 刘颖琳，邝健全，张睿，等.胎儿感染乙型肝炎病毒的临床研究.中华妇产科杂志，2002，37：465-468.

12 samazaki ar，mitz m，wolf h，et al.detection of hepatitis b virus using amplification of viral dna by means of polymerase chain reaction.j med virol，1989，27 :304-308.

13 李小毛，施敏凤，杨越波，等.孕妇注射乙肝免疫球蛋白阻断宫内传播的研究.中国优生与遗传杂志，2002，10(1) :63-66.

14 de2man ra，heiftink ra，niesters hg，et al.new developments in antiviral therapy for chronic hepatitis b infection.scand j gastroenterol sappl，1995，212 : 100-104.

15 lai cl，chien rn，leung nw，et al.a one2year trial of lamivudine for chronic hepatitis b.asia hepatitis lamivudine study group.n engl j med，1998，339:61-68.