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中药及中药血清指纹图谱研究进展
中药是一种多组分的复杂体系，化学成分众多，单单测定少数几种有效成分并不足以确保药材的质量。对传统中药及复方进行研究通过分步提取、药效追踪，所确定的成分是否是药效的代表性成分还尚待商榷；而且多数中药或复方现行质量标准中所谈及或测定的所谓“有效成分”多为主要药物的主要成分或指标成分，也并无充分依据证明其为有效成分［1］，和中医理论的特殊性一样是导致中药药效成分不明确、作用机制不清晰的关键原因。
中药指纹图谱凭借所提供信息的丰富性，反映所含成分的全面性和体现中药成分的整体性，在评价中药质量方面发挥了重要作用。目前，中药指纹图谱虽然可以较好地解决中药质量不稳定、药效成分复杂的问题，但仍不能有效表征中药在体内的生物活性及其作用机制，而中药血清药理学和中药血清药物化学可以解决主要药效活性成分在体内的代谢及变化的问题，可获得确切的疗效信息。因此，将指纹图谱技术和中药血清药理学、中药血清药物化学相结合有助于推动中医药学向中药成分明确化、作用机制清晰化的方向发展。本文就近8年来中药及中药血清指纹图谱的研究进展作一综述。
1 中药指纹图谱的研究进展
中药指纹图谱是指中药材或中成药经适当的处理之后，采用现代的分析手段，得到能够标示该中药材或中成药特征的色谱或光谱图。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的技术手段，是当前符合中药特色的评价中药真实性、稳定性和一致性的质量控制模式之一。
目前中药指纹图谱的建立方法主要有:高效液相色谱法（hplc）、气相色谱法（gc）、高效毛细管电泳法（hpce）、红外光谱（ir）、紫外光谱（uv）、x射线衍射法、核磁共振法等\[2-8\]。www.11665.Com其中,高效液相色谱法为主流方法,是目前研究中药化学指纹图谱优先考虑的方法。解析指纹图谱的方法有相似度评价法［9］、模糊聚类分析［10］、人工神经网络法［11］、主成分分析法［12］等。
1.1 中药指纹图谱在单味药中研究进展
刘艳娥等［13］确定了金银花药材的hplc谱中有11个共有峰。杨雪平等［14］建立了山东平邑、河北、河南3个不同产地金银花药材的hplc指纹图谱，采用相似度分析法，结果表明3个不同产地金银花相似度在95%以上。不同产地穿心莲药材的hplc谱中有9个共有峰［15］，但其峰面积比值不尽相同。郭丁丁等［16］对不同产地白芷的hplc指纹图谱研究，结果表明白芷指纹图谱差异较大。
此外，还有学者对桔梗［17］、急性子［18］、葛根［19］、藁本［20］、川芎［21］、赤芍［22］等中药的hplc研究表明中药指纹图谱重现性好、可行性强，可为控制中药材质量提供一定的实验依据。
1.2 中药指纹图谱在复方中研究进展
孙国祥等［23］运用中药指纹图谱技术结合双定性双定量相似度评价法对复方丹参片化学成分的数量、种类和各成分的含量进行准确控制，实现从宏观和整体角度全面控制复方丹参片质量，缩小药品批间质量差异。黄月纯等［24］根据四物汤药味所含成分理化性质的差异，采用两种检测波长对四物汤进行指纹图谱分析，结果表明230nm检测波长下10样品的相似度在0.914～0.991之间，290nm检测波长下10样品的相似度在0.942～0.999之间。这为四物汤物质基础研究提供一定参考。丁国瑜等［25］采用反相高效液相色谱法建立了逍遥丸数字化指纹图谱,对不同生产厂家13批逍遥丸进行整体定性和定量评价,为逍遥丸质量控制提供新方法。
朱砂安神丸hplc数字化指纹图谱研究［26］结果表明以盐酸小檗碱为参照物峰,确定57个共有指纹峰,获得判别其质量的重要数字化信息,所建立的zsasw-hplc数字化指纹图谱可清晰反映zsasw的局部和整体指纹的质量变异,表明了用数字化指纹图谱控制中药质量准确可行。
另外对三七配方颗粒［27］，黄连和吴茱萸配伍［28］，冠心苏合丸［29］，双黄连粉针剂［30］等也进行了中药复方配伍研究，结果表明将中药指纹图谱应用于中药复方的研究，能更好的为复方的临床应用提供有力的保障。
2 中药血清指纹图谱的研究进展
中药虽含众多成分，但除肠道直接起作用及外用药外，只有被吸收入血的成分才能产生作用。传统中药多口服给药，口服给药后药物成分或经消化道直接吸收入血；或经消化液、消化酶及肠内菌群的作用分解成次生代谢产物被吸收入血；或经肝微粒体酶代谢成有活性的代谢产物。无论经过上述何种途径，其有效物质论文联盟http://必须以血液为介质输送到靶点，从而产生作用。因而给药后的血清才是真正起作用的“制剂”，血清中含有的成分才是中药的体内直接作用物质。中药血清指纹图谱是指中药经口服给药后一定时间采血,分离血清,用含药血清代替中药,经适当处理,采用现代分析手段,得到能够标志该中药药效成分特征的色谱或光谱图。即对中药、空白血清、含药血清3组指纹图谱进行比较,得到活性成分在体内的变化情况。
2．1 中药血清指纹图谱在中药血清化学中的应用
2.1.1 中药血清化学的含义 中药血清药物化学是以传统药物化学方法为基础，综合应用多种现代技术，分析鉴定口服中药后血清中移行成分，研究其药效相关性，确定中药药效物质基础的应用学科。其研究方法为：在建立中药色谱指纹图谱的基础上，用血清药物化学方法，通过比较药材各提取部位、含药血清及来给药供试动物血清(空白血清)的指纹图谱，筛选、研究中药的活性成分及其作用机理。 转贴于论文联盟 http://
2.1.2 在单味药和复方血清化学研究方面的应用 唐私皓等［31］通过比较分析空白血清、含药血清和水提醇沉液hplc指纹图谱的差异，对单味土茯苓的活性成分进行筛选和分析。结果显示，给药血清有一明显能在不同条件下重复出现的特征峰，与水提醇沉液的指纹图谱对照后发现在相应保留时间出峰。陈平平等［32］通过hplc图分析比较空白血清、含药血清和水煎液的成分异同，确定了黄芩给药后血中出现了15个移行成分，且有12个成分与水煎液的hplc图在相同保留时间出峰，其他成分可能为代谢产物。邓翀等［33］采用hplc-ms指纹图谱确定了灌服黄连水煎液后，血中出现了10个移行成分，均为原型成分。洪燕龙等［34］采用hplc－ｕｖ和 hplc-dad-ms发现大川芎方效应组分给药后血中出现了4个移行成分：来自于川芎的阿魏酸、洋川芎内酯i和来自于天麻的天麻素、巴利森苷。
此外，对补骨脂［35］，大青叶［36］，当归［37］，地黄［38］，葛根［39］，大承气汤［40］，复方丹参片［41］等的血清药源性成分研究初步明确了药材中众多化学组分在体内的吸收情况为中药的药效物质基础研究奠定了一定的基础。
2.2 中药血清指纹图谱在中药血清药理学中的应用
中药具有纵多药理作用如抗炎、镇痛、抗氧化等，但各药理作用的作用机制并不相同，中药血清指纹图谱将中药指纹图谱从质量控制层面提升到生物活性表达的层面，因而有可能建立起一个能反映成分与药效之间联系的数学模型,进而结合药效和临床观察,通过图谱与药效的联系,建立疗效与化学成分的相关性,从色谱的整体特征考虑“谱效关系”,对图谱进行“解码”,阐明色谱中群体指纹峰与整体疗效的关系,将传统中药指纹图谱的“色谱化学特征”推进到“色谱药效特征”,进而达到“谱效结合”,可望从细胞分子水平揭示色谱中群体指纹峰与整体疗效的作用机制,从根本上揭示中药特定的药理作用机制,创新药效研究体系。
有文献报道采用hplc-dad-dpph方法，评价不同产地补骨脂药材的抗氧化活性和明确抗氧化活性成分的贡献率，从而确定补骨脂酚为最主要的抗氧化活性成分［42］。邓翀等［43］比较大黄抗内毒素有效组分体内外化学成分。对大黄药材与大黄游离型、结合型蒽醌提取物体内外化学成分进行hplc比较分析，对其中的主要色谱峰进行归属，表征大黄药材、大黄游离型蒽醌与结合型蒽醌提取物中所包含的化合物化学结构特征，结果大黄药材共有22个成分入血，其中大黄酸含量最高，其它蒽醌类成分量较低。大黄入血后约有5个代谢成分；无论给大鼠的灌胃样品是大黄游离蒽醌提取物还是大黄结合蒽醌提取物，存在于大鼠血清中化学成分是相似的，以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚为主。有学者［44］甲醛所致的伤害性疼痛模型大鼠探讨白芷挥发油及水煎液的镇痛效应物质基础。结果发现白芷挥发油、水煎液各剂量组对甲醛致大鼠疼痛均有显著的抑制作用，白芷挥发油和水煎液共有的入血成分主要是水合氧化前胡素、佛手柑内酯。这两者可能是白芷镇痛的效应物质基础。
3 结 语
目前，血清药理学和中药血清药物化学是阐明中药药效物质基础的方法之一。血清药理学和中药血清药物化学这两种方法都是建立在“只有入血成分才可能是药效成分”的假说基础之上，通过分析给药后血清中成分，确定中药及复方在体内的直接作用物质，但是也有一些局限性，如很难确定血清中检测到的“成分”是无效物质还是有效物质的代谢产物，而且，血清中化学成分含量甚微，给结构鉴定带来了巨大的困难。
结合指纹图谱技术和中药血清药理学、中药血清药物化学研究，在充分利用中医药理论并以临床为中心的基础上，还将有助于中医证候动物模型的建立。而且越来越多的新兴方法和技术应用于中药血清指纹图谱的研究，将有助于解决血清中成分含量甚微等问题。最后不仅可以丰富现代医学对疾病发病机制中整体与局部之间关系的认识，而且将进一步深化对传统中医辨证治疗理论的理解和发展，为中药的国际化和现代化奠定坚实的基础。转贴于论文联盟 http://
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