[摘要] 目的：通过观测正常人及脑梗死患者血清一氧化氮（no）和一氧化氮合成酶（nos）水平，no、nos与脑梗死的关系探讨。方法：用硝酸还原酶法测定血清no。用nos催化l-arg和分子氧反应生成no，no与亲核性物质生成有色化合物后，再采用比色的方法测定血清nos。测定42例脑梗死患者及18例健康人血清no、tnos和inos含量，分析上述指标的变化情况。结果：与健康对照组比较，脑梗死组no含量明显降低（p0.05）。结论：血清no、tnos和inos参与了脑梗死的病理生理过程，其测定有助于对脑梗死患者的诊断及康复治疗。
　　[关键词] 脑梗死；一氧化氮（no）；一氧化氮合成酶（nos） 　
　　determination of serum nitric oxide (no) and nitric oxide synthesis (tnos, inos) in the patients with cerebral infarction
　　wu xiaohua, yan jinhui, yang xiaohui
　　(changzhou medical college, hebei province, changzhou 061001, china)
　　[abstract] objective: by observing serum nitric oxide (no) and nitric oxide synthesis (nos) levels of normal subjects and patients with cerebral infarction, to explore the relationship between no, nos and cerebral infarction. methods: the levels of serum no were determined by nitrate reductase. and with nos catalytic l-arg and molecular oxygen response to generate no, no and pro-nuclear substances to conduct a colored compound, then with colorimetric method determination of serum nos. in 42 patients with cerebral infarction and 18 healthy volunteers, serum no, tnos and inos contents were determined and analysis of changes in these indicators. results: compared with the healthy control group, the serum no decreased significantly in infarction group (p0.05). conclusion: serum no, tnos and inos have involved in the pathophysiology of cerebral infarction, the determination could help the diagnosis of cerebral infarction and rehabilitation.
　　[key words] cerebral infarction; nitric oxide (no); nitric oxide synthesis (nos)
　　
　　脑梗死发病与多种因素有关，由于缺血缺氧，脑组织产生一系列病理改变，引发“瀑布式”自由基连锁反应，产生大量自由基，造成广泛且严重的生物膜脂质过氧化，使膜通透性增加，结构遭到破坏，导致神经细胞、胶质细胞和血管内皮细胞损伤。wWw.11665.cOm目前认为自由基是参与脑缺血性损害发生的重要因素之一[1]。血管内皮功能障碍是多种心脑血管疾病的共同病理机制，其突出表现为内皮依赖性血管舒张功能障碍，主要由no减少及氧自由基增加所致[2]。本文中笔者检测急性脑梗死患者血浆一氧化氮（no）及一氧化氮合成酶（nos）含量的变化，进一步了解no及其合成酶在脑梗死急性期的变化规律，探讨其对脑梗死发病过程的病理生理意义，有助于对脑梗死患者的诊断及康复治疗。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　本组患者均来自于河北省沧州市人民医院神经内科2009年3月4日～2010年2月2日的住院患者，且所有病例均经过头颅ct或mri检查确诊，诊断符合全国第四次脑血管病会议标准。其中，脑梗死组患者42例，男28例，女14例；年龄最大78岁，最小45岁，平均（67±8）岁。对照组18例均为血站健康献血员，其中，男7例，女11例；平均年龄（59±8）岁。所有脑梗死组患者的采血时间，最早为患者入院后第1天，最晚为入院后第24天，且均于清晨卧位时空腹抽取静脉血2 ml，于24 h内通过抗凝、3 000 r/min离心机离心15 min后提取血清，将每例患者血清均分装于4个ep离心管中，封存于-80℃冰箱中成批备用。
　　1.2 方法
　　1.2.1 仪器和试剂 采用上海7200型可见光分光光度计。no和nos试剂测定盒购于南京建成生物工程研究所。
　　1.2.2 检测方法 严格按照试剂盒说明书中的操作程序进行，为了避免反复冻融影响标本质量，笔者将no、tnos及inos所有指标统一测定，并且采用编号双盲的方法检测所有标本。按照试剂盒标注方法配制各种试剂，配置及测定步骤严格按照操作规程完成，应用分光光度仪550 nm，0.5 cm光径，采用分光光度仪比色法检测各管吸光度值。
　　1.2.3 计算方法根据各测试管所测吸光度值，按说明书给出的计算公式计算no、tnos及inos的含量，结果分别以μmol/l、u/ml和u/ml表示。
　　1.3 统计学处理
　　数据以均数±标准差（x±s）表示，配对比较采用t、t′检验和方差分析。
　　2 结果
　　脑梗死患者血清no、nos含量变化，见表1。与健康对照组比较，脑梗死组no含量明显降低（p0.05）。
　　
　　表1 脑梗死患者血清no、nos含量变化（x±s）
　　tab.1 change of no, nos of the serum in the patients
　　with cerebral infarction (x±s) 

　　与健康对照组比较，★p＜0.05，*p＞0.05但有降低趋势，△p＞0.05但有上升趋势
　　3 讨论
　　自从no被认识以来，其在脑血管病发病中所起的作用一直是研究的重点。近来研究的结果有分歧，研究较为一致的观点认为no是由nos催化l-精氨酸生成的一种含氮化合物，可以使血管平滑肌松弛，且能抑制血小板聚集。大量研究表明，内皮细胞可以在生理条件下不断合成基础量的no，并不断释放以抑制血管对收缩因子的反应，抑制血小板聚积和黏附，从而维持血管的舒张状态，保持生理水平所需的脑血流量[3]，但产生过多或过少的no都将导致脑组织的病理性损伤[4]。
　　nos是合成no的关键因素，在脑缺血中发挥神经元保护和神经毒性的双重作用[5]。它有三种亚型，神经元型（nnos）、内皮型（enos）、诱导型（inos）， 均已在中枢神经系统中得到实验证实，神经元型（nnos）和内皮细胞型（enos）在生理状态下即有表达，统称为原生型酶（cnos）。有多种细胞可产生nos。在脑缺血时enos 活性升高，从而引起no生成增多，致缺血区脑血管扩张，改善缺血区血供，对缺血脑组织起到保护作用。相反nnos、inos在脑缺血后起损害作用，nnos在脑缺血较早阶段起损害作用，inos的损害作用发生在脑缺血稍后阶段[6]。

　脑梗死患者血清no含量的改变，国内报道不一。有研究表明，脑血管病急性期，脑组织缺血后可同时诱导内皮性nos和神经元性nos的表达及活性上调，并合成释放大量的no，致脑梗死急性期no升高[7]。也有研究报道，脑梗死组患者血浆no含量较健康对照组显著降低， 尤其在伴有高血压的脑梗死患者中更为明显[8]。本实验研究显示，脑梗死患者的血清no含量显著降低。急性脑血管病患者均具有不同程度的脑动脉血管硬化，其中部分患者还合并有高血压疾病，这些患者的动脉内皮细胞受到损伤，合成和释放的no减少[9]。当脑梗死急性发作时，大脑局部的组织出现缺血、缺氧及细胞肿胀，进一步加重了颅内血管内皮细胞的损伤，而缺氧不仅可直接抑制内皮细胞释放no，还可产生超氧化物等自由基使no灭亡，从而导致no的合成和释放更进一步减少，导致血管痉挛，加重了脑梗死。
　　本实验显示nos含量变化不显著，但是tnos有降低趋势、inos有上升趋势。有报道提示，广泛分布于脑组织中的nos受到no的负反馈调节[10]。当no含量降低时反馈性导致nos的降低减缓或使其有所升高，但也有研究发现，在脑缺血亚急性期出现的炎性浸润等改变可以激活inos，而产生大量的no，并且可促使非毒性刺激因素（感染、血压波动、脱水等）进一步加重脑组织损伤[11]，而通过应用inos抑制剂可阻断no介导的毒副作用。本研究显示 nos含量变化不明显，也可能是因为观察例数、时间限制所致。
　　有研究人员通过动物实验发现，no含量于脑缺血病灶处显著增多，而多数报道表明，脑梗死患者脑脊液中的no含量增多，血清中的no含量减少[12]。本实验结果提示，急性脑梗死患者的血清no含量下降，可能是由于脑梗死发生时血管内皮细胞受到损伤，致cnos的活力下降，导致no生成和释放减少。脑梗死形成过程中产生的大量氧自由基及超氧阴离子可与no反应，生成过氧亚硝酸阴离子，从而缩短no的半衰期[4]，致使no含量下降。
　　本实验结果显示，脑梗死患者血清no含量明显降低，nos虽无显著性改变，但tnos有降低趋势、inos有上升趋势，提示no及其酶含量的改变参与了脑梗死的病理生理改变过程，促进了疾病的发生和发展。如果能把不同时期的含量变化规律进一步明确，并分期研究，且采取不同措施给予治疗，将会带来重要的临床意义。例如，已证实体内no生成不足或no信号的传导异常与脑血管等多种疾病的形成和发展关系密切，临床就可以开展并设计no供体型药物的新药研究[13]。其重要的临床意义有待深入研究。
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