甲状腺髓样癌中NFκB、MMP9的表达的论文_肿瘤论文

【摘要】 目的探讨核因子κb和mmp9在甲状腺髓样癌(mtc)中的表达及其与预后的关系。方法免疫组化法检测33例mtc组织标本中nfκb、mmp9的表达，并行生存分析。结果本组32例获得随访，随访率为96.97%。nfκb核表达、mmp9胞浆表达阳性率均为87.9%。两者表达均与临床分期有关(p<0.05)，mmp9表达还与年龄、远处转移有关(p<0.05)。单因素分析年龄、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期、根治性切除、mmp9胞浆表达与预后有关；多因素分析仅年龄、根治性切除、mmp9胞浆表达为预后独立风险因子。结论在mtc中存在着nfκb、mmp9的高表达，但仅mmp9的胞浆表达为预后独立风险因子。

【关键词】 髓样甲状腺癌；核因子κb；基质金属蛋白酶9；预后

expression and clinical significance of nfκb and mmp9 in medullary thyroid cancer

hu chaoli,jin hongyi,qiu xinguang,wang qingzhao,lu xiubo

1.department of general surgery,the first people's hospital of zhu madian,zhumadia 463000,china;2.department of thyroid surgery,the first affiliated hospital of zhengzhou university

corresponding author: qiu xinguang,email:[email protected]：objective to investigate the expression of nuclear factorkappa b(nfκb)and matrixmetalloproteinase9 (mmp9) in medullary thyroid carcinoma tissue and evaluate their clinical implications.methodsthe expression of nfκb, mmp9 in 33 mtc samples were detected by immunohistochemistry staining.long term followup information was collected from patients and their survival time data was analyzed.resultsafter surgery operation the followedup rate of 32 patients was 96.97%.the positive rates of nfκb and mmp9 were 87.9% in all mtc. the expression of mmp9 is correlated with age, clinical stage and distant metastasis, whereas nfκb is only closely related to clinical stages. based on the univariate analysis, age, lymph node invasion, distant metastasis, tumor stage, radical resection by surgery and the expression of mmp9 were prognostic factors. in the multivariate analysis, however, only age, radical resection and the expression of mmp9 were found to be statistically significant factors.conclusionboth nfκb and mmp9 were expressed in mtc tissues, but only the expression of mmp9 in kytoplasm is an independent prognostic risk factor.

key words：medullary thyroid carcinoma; nuclear factorκb; matrix metalloproteinase9; prognosis
1资料与方法

1.1临床资料收集我院1991年1月～2004年12月mtc手术切除标本中诊断明确、临床资料、随访资料齐全的33例,另取20例甲状腺腺瘤瘤旁正常甲状腺组织作为对照。WWW.11665.COm33例均为散发型mtc患者。男13例，女20例。年龄37～68岁，平均51岁。伴颈部淋巴结转移者20例。按1987年国际抗癌协会（uicc）公布的临床分期标准：ⅰ期0例，ⅱ期13例，ⅲ期

16例，ⅳ期4例。行甲状腺髓样癌根治术（甲状腺全或近全切除并区域性颈淋巴结清扫术）14例，非根治术（达不到前述标准者）19例。全部病例均经he染色复诊及降钙素免疫组织化学染色证实。

1.2试剂及方法标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片。采用sp法进行nfκb p65、mmp9(工作液浓度分别为1/100、1/ 50)免疫组化标记（北京中杉金桥公司产品），按说明书进行操作。用已知的乳腺癌标本作阳性对照，pbs代替一抗做阴性对照。

1.3结果判断 nfκb以胞核内出现棕黄色颗粒的细胞数≥10%定为激活型表达。阳性瘤细胞表达数<10%为()，10%～30%为(+)，31%～50%为(++)，≥50%(+++)。mmp9阳性表达以胞浆染色程度和面积进行半定量结果判定：不着色0分，淡1分，中等2分，深3分；阳性着色面积<1/3记1分，1/3～2/3记2分，≥2/3记3分。两项得分乘积作为最后结果：0分()，1～3分(+)，4～6分(++)，7～9分(+++)。所有免疫组化染色结果均用双盲法测定。

1.4随访所有患者术后均进行随访，追踪观察3～15年，平均随访5.8年。首次手术日作为观察起点。观察终点：（1)死于本病变；（2)存活。生存时间按月计算，以手术日至死亡时间或末次随访所得时间为准，死于其他病者归于失访。所有病例采用电话、信访或者门诊随访观察。

1.5统计学方法采用spss10.0软件。mannwhitney u或kruskalwallis h检验分析数据。生存时间用kaplanmeier统计，生存曲线用log rank检验，cox模型回归分析。以p<0.05为有统计学意义。失访病例按截尾数据处理。

2结果

2.1nfκb p65和mmp9在mtc组织中的表达nfκb p65主要在癌细胞胞质和胞核中表达。33例mtc中nfκb p65胞核表达29例阳性，阳性率为87.9%，高于正常甲状腺组织中的表达60.0%(p<0.05)。mmp 9主要在癌细胞胞浆表达。在33例mtc中29例阳性，阳性率87.9%，显著高于正常甲状腺组织中的表达20.0%(p<0.01)，见图1、2。图1mtc中nfκb胞核阳性表达(sp×400)

　　2.2nfκb p65、mmp9表达与临床病理因素的关系在mtc组织中，nfκb、mmp9在不同临床分期中阳性表达率差异均有统计学意义，mmp9阳性表达还与年龄、是否伴有远处转移有关。两者表达与患者性别、肿瘤大小、包膜侵犯、淋巴结转移均无关系，见表1。

2.3mtc中nfκb和mmp9表达的相关性nfκb与mmp9两者均阳性表达27例，nfκb阳性mmp9阴性2例，mmp9阳性nfκb阴性2例，两者均阴性表达2例，经spearman相关分析两者呈正相关关系。

2.4影响生存率的预后因素本组33例，随访到32例，随访率为96.97%。总的5年生存率为63.03%，中位生存时间68月。根治性切除者5年生存率为71.43%；非根治切除者图3不同年龄组的生存率曲线(a); 不同术式的生存率曲线(b);表1mtc中nfκb、mmp9表达与临床病理参数的关系

　　伴有远处转移者，无5年生存。单因素生存分析表明：年龄、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期、根治性切除、mmp9胞浆表达等6项指标与预后有关，见图3。多因素cox模型回归分析，排除多重共线性的影响后，年龄、根治性切除、mmp9胞浆表达等因素进入模型，与术后生存率明显相关。其中mmp9胞浆表达因素风险度为3.014，表明其为本组mtc患者术后的独立性预后因子，见表2。表2mtc多因素回归cox模型分析结果

　　3讨论

　　治疗后复发转移是影响mtc预后的重要原因，同时它也是一个癌基因激活、抑癌基因失活、调控因子失常的复杂过程。nfκb是重要的转录调控因子，参与免疫应激、细胞增殖、生长分化、细胞周期及凋亡。活化的nfκb调节多种肿瘤相关基因的转录表达，抑制肿瘤细胞凋亡、促进血管生成和局部浸润。mmp9的主要功能是降解破坏细胞膜基质中最主要的组份——ⅳ、ⅴ型胶原和明胶。mmp9在多种肿瘤组织中表达增加，被认为在恶性肿瘤的浸润和转移中扮演着重要角色。本组资料表明：nfκb在mtc中高表达，其表达与mtc的临床分期密切相关，提示nfκb不仅参与了甲状腺髓样癌的发生而且与其恶性行为密切相关。mmp9在正常甲状腺组织中呈阴性或弱阳性表达，在甲状腺髓样癌组织中多呈阳性表达，且与临床分期、远处转移相关，与lin等[23]的报道一致，表明mmp9的表达在甲状腺髓样癌的侵袭和转移中起重要作用。目前对mmp9转录激活机制研究较多。有研究[4]认为mmp9 的表达依赖于nfκb。张克君等[5]在实验中证明：nfκb表达水平与肝癌细胞的侵润转移能力有关，mmp9可能参与了这一过程。andela等[6]研究认为，阻断nfκb信号通路可下调mmp9及上调基质金属蛋白酶组织抑制剂1、2及血浆酶原激活抑制剂2的表达，而不影响肿瘤细胞的增殖，但却可以抑制肿瘤细胞的转移。本研究结果表明，nfκb与mmp9表达呈正相关关系，提示在mtc中mmp9的高表达可能与nfκb有关。推测，在mtc的发展过程中，当nfκb激活后，发挥基因调控作用，增强了mmp9基因的转录活性，使mmp9表达上调，导致癌细胞的侵袭转移。mtc的预后介于分化型甲状腺癌和未分化甲状腺癌之间，然而mtc发生率低，临床表现多样性，生存期多变，预后影响因素文献报道不尽相同。国内外对mtc预后的判断指标一般包括病因学、生化学、临床病理、分子生物学指标等，目前，尚无一致公认的mtc预后判断指标。大量的研究证明：在乳腺癌、卵巢癌、胃肠癌、头颈鳞癌[711]等许多肿瘤中mmp9不同程度表达并与肿瘤的预后密切关联。本组资料表明：不同年龄组中，老龄组生存期短于年轻组；手术根治性切除越彻底，平均生存期越长；mmp9胞浆表达阳性率越高，平均生存期越短。多因素分析表明三者均为本组mtc术后的独立性预后因子，与上述文献报道相一致。

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