【摘要】 目的 研究鳖甲多糖对s180荷瘤小鼠抗肿瘤的免疫调节作用。方法 制备s180荷瘤小鼠动物模型，随机分为荷瘤对照组(ⅰ)、低剂量组(ⅱ)、中剂量组(ⅲ)、高剂量组(ⅳ);通过测定荷瘤小鼠的瘤重、抑瘤率及瘤体比观察鳖甲多糖对肿瘤生长的影响;通过检测脾细胞的增殖分化、nk细胞的活性以及腹腔巨噬细胞的吞噬功能，研究鳖甲多糖对荷瘤小鼠非特异性免疫和细胞免疫功能的影响。结果 鳖甲多糖能明显减小s180荷瘤小鼠的瘤重和瘤体比(p<0.05)，能明显抑制肿瘤的生长(p<0.05)，ⅱ、ⅲ、ⅳ组的平均抑瘤率分别为30%、37%、45%;鳖甲多糖能明显增强s180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能(p<0.05);鳖甲多糖能明显提高s180荷瘤小鼠脾细胞的转化功能和nk细胞的活性(p<0.05)。结论 鳖甲多糖能明显抑制s180荷瘤小鼠肿瘤的生长，其作用机制可能是通过增强荷瘤小鼠的非特异性免疫功能和细胞免疫功能。
关键词 鳖甲多糖 肿瘤 小鼠 免疫
肿瘤是严重危害人类健康与生命的疾病之一。癌症患者本身机体抵抗力就低，经过放疗和(或)化疗以后机体抵抗力就更低，影响到患者的康复和预后。中药鳖甲具有抗肿瘤作用[1]，本文探讨了鳖甲中的有效成分――鳖甲多糖对s180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料 (1)鳖甲多糖[2，3]：自行提取淡棕色粉末，纯度87%;(2)动物：balb/c小鼠，雌性，体重18～22g，由浙江大学医学院动物实验中心提供;(3)瘤株s180：由中国科学院上海药物研究所提供。WwW.11665.coM
1.2 方法
1.2.1 s180荷瘤小鼠动物模型的制备与分组[4] 取balb/c小鼠30只(共2组),其中24只右前腋下皮下接种s180细胞悬液(5×106/ml)0.2ml，次日称重编号，随机分组，每组6只。荷瘤对照组(ⅰ)用蒸馏水灌胃;低剂量组(ⅱ)、中剂量组(ⅲ)、高剂量组(ⅳ)分别灌以100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg的鳖甲多糖;未接种瘤株的6只小鼠作为正常对照组(ⅴ)。
1.2.2 鳖甲多糖对荷瘤小鼠非特异性免疫功能的影响采用测定腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数的方法 小鼠连续给药10天，停药次日，小鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液1.0ml，30min后颈椎脱臼处死小鼠，立即经腹腔注入生理盐水3.0ml，转动鼠体1min后用针筒吸出腹腔洗液1.0ml，平均分滴于2片载玻片上，并放入37℃孵箱中培养3h，用生理盐水漂洗并且晾干，用1：1丙酮甲醇溶液固定，4% giemsa磷酸缓冲液染色3min，用蒸馏水漂洗晾干后在显微镜下记数巨噬细胞，计算其吞噬百分率和吞噬指数[3]。
1.2.3 鳖甲多糖对荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响采用检测脾细胞的增殖分化和nk细胞活性的方法[5]小鼠停药次日颈椎脱臼处死后，无菌操作取脾脏，制备、分离脾细胞，观察脾细胞的增殖分化和nk细胞的活性。
1.3 统计学方法 用spss软件进行统计分析，对各组数据进行t检验，显著性界值定为0.05。所有数据以均数±标准差(±s)表示。
2 结果
2.1 鳖甲多糖对荷瘤小鼠瘤重、瘤体比及抑瘤率的影响 见表1。由表1可见，三种剂量的鳖甲多糖都有明显抑制肿瘤生长的作用,与荷瘤对照组(ⅰ)比较ⅱ、ⅲ、ⅳ组的瘤重、瘤体比均明显减小，在统计学上均差异有显著性(p<0.05);高剂量组(ⅳ)与低剂量组(ⅱ)比较，其抑瘤率在统计学上差异有显著性(p<0.05)。
表1 鳖甲多糖对s180荷瘤小鼠瘤重、瘤体比及抑瘤率的影响 (略)
注：与荷瘤对照组(ⅰ)比较，*p<0.05;与低剂量组(ⅱ)比较，#p<0.05
2.2 鳖甲多糖对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数的影响 见表2。由表2可见，s180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数均明显比正常对照组(ⅴ)低(p<0.05);3种剂量的鳖甲多糖都能明显改善荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数(p<0.05)，但是ⅱ、ⅲ、ⅳ组之间的差异无显著性(p>0.05)。
表2 鳖甲多糖对s180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数的影响 (略)
注：与荷瘤对照组(ⅰ)比较，* p<0.05;与正常对照组(ⅴ)比较，#p<0.05
2.3 鳖甲多糖对荷瘤小鼠脾细胞的增殖分化和nk细胞的活性的影响 见表3。由表3可见，s180荷瘤小鼠脾细胞的转化功能和nk细胞的活性均明显比正常对照组(ⅴ)低(p<0.05);3种剂量的鳖甲多糖都能明显增强荷瘤小鼠脾细胞的转化功能和nk细胞的活性(p<0.05)，但是ⅱ、ⅲ、ⅳ组之间的差异无显著性(p>0.05)。
表3 鳖甲多糖对s180荷瘤小鼠脾细胞的转化功能和nk细胞活性的影响 (略)
注：与荷瘤对照组(ⅰ)比较，*p<0.05;与正常对照组(ⅴ)比较，#p<0.05
3 讨论
研究结果表明：鳖甲多糖对s180荷瘤小鼠有明显抑制肿瘤生长的作用,s180荷瘤小鼠分别饲以100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg 3种剂量鳖甲多糖的ⅱ、ⅲ、ⅳ组与荷瘤对照组(ⅰ)比较在统计学上差异均有显著性(p<0.05)。随着鳖甲多糖剂量的增大，其瘤重、瘤体比均逐渐减小，抑瘤率逐渐增大，其中高剂量组(ⅳ)与低剂量组(ⅱ)比较，其抑瘤率在统计学上差异有显著性(p<0.05)。
荷瘤小鼠机体非特异性免疫功能降低，其腹腔巨噬细胞吞噬肌红细胞百分率和吞噬指数均比正常对照组低(p<0.05)，鳖甲多糖能明显提高s180荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数，饲以鳖甲多糖的3个组ⅱ、ⅲ、ⅳ与荷瘤对照组(ⅰ)比较在统计学上均差异有显著性(p<0.05)，表明鳖甲多糖对荷瘤小鼠的非特异性免疫功能有明显的提高作用。但是与正常对照组(ⅴ)比较差异仍有显著性(p>0.05)，说明鳖甲多糖尚不能使荷瘤小鼠巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数完全恢复到正常水平。3种剂量改善荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数作用的差异在统计学上无显著性意义，鳖甲多糖的作用没有表现出明显的剂量效应。
荷瘤小鼠的细胞免疫功能也降低，s180荷瘤小鼠脾细胞的转化功能和nk细胞的活性均明显比正常对照组低(p<0.05)。鳖甲多糖能明显增强荷瘤小鼠脾细胞的转化功能和nk细胞的活性，饲以鳖甲多糖的3个组ⅱ、ⅲ、ⅳ与荷瘤对照组(ⅰ)比较在统计学上差异均有显著性(p<0.05)，表明鳖甲多糖能明显提高荷瘤小鼠的细胞免疫功能。但3种剂量之间这种作用的差异在统计学上无显著性意义，鳖甲多糖的作用同样没有表现出明显的剂量效应。
综上所述，鳖甲多糖能明显抑制s180荷瘤小鼠肿瘤的生长;s180荷瘤小鼠的非特异性免疫功能和细胞免疫功能都降低，鳖甲多糖能明显提高s180荷瘤小鼠的非特异性免疫功能和细胞免疫功能。
参考文献
1 赵长琦，许有玲，王亚洲.抗肿瘤植物药及其有效成分.北京：中国医药科技出版社，1997，138-146.
2 akira s.mammalian toll-like receptors.current opinion in immunology，2003，15:5-11.
3 王慧铭，黄素霞，潘宏铭.鳖甲多糖对荷瘤小鼠免疫调节作用的研究.中华现代中西医杂志，2005，3：22-25.
4 michelsen ks.the roll of toll-like receptors in bacteria-induced maturation of murine dendritic cells.j biol chem，2001，276(28):25680-25686.
