【摘要】 目的 用正交试验法优选淡竹叶中总黄酮的提取工艺。方法 以20 g原药材的总黄酮提取量为评价指标,选择乙醇用量(倍)、提取时间(h)、提取次数(次)为考察因素,采用正交试验法l9(34)确定醇提取淡竹叶中总黄酮的最佳工艺。结果 最佳提取工艺条件为75%乙醇18倍量提取1.0 h,共提取1次,乙醇用量为显著影响因素。结论 首次进行了淡竹叶总黄酮正交提取工艺的研究,结果比较可靠。
【关键词】 淡竹叶；总黄酮；正交试验
abstract：objective to study the optimum ethanol extraction process of total flavonoids in lophatherun gracile brongn. methods the extraction of total flavonoids was choosen as the assessment index. ethanol volumn extracting time and times were the studing factors. the optimum ethanol extraction process was selected with the orthogonal design. results the optimum ethanol extracting process conditions were as follows：adding 18 fold of 75% ethanol, extracting for 1.0 h and one in all. ethanol dosage was the predominant influencing factor. conclusion this optimum extradion process of total flavonoids in lophatherum gracle brongn is reliable.
key words：lophatherum gracile brongn；total flavonoids；orthogonal design
淡竹叶为禾本科多年生草本植物淡竹叶(lophatherum gracile brongn.)的干燥茎叶,主产于河南、安徽、江苏、浙江、福建、广东、广西等地。WwW.11665.cOm该药味甘、淡、寒,归心、胃、小肠经,具有清热除烦、利尿的功效,多用于热病烦渴、口舌生疮、小便赤色淋痛等症[1]。淡竹叶中含有的黄酮类化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多种生理活性[2],因而有效地开发和利用淡竹叶中黄酮类化学成分具有重要意义。笔者选择总黄酮提取量[3]为评价指标,利用l9(34)正交试验,筛选醇提取淡竹叶中总黄酮的工艺条件,可为新药研究和充分利用淡竹叶药材资源提供参考依据。
1 仪器、试剂与材料
hh-s型水浴锅(巩义市英峪华仪器厂)；re-52a旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；shz-d(ⅲ)循环水式真空泵(巩义市英峪华仪器厂)；754型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；ay220电子天平(岛津)；dzf-6050真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。
对照品芦丁购自中国药品生物制品检定所,批号为0080-9705；淡竹叶产地为浙江,加工单位为安徽丰原铜陵中药饮片有限公司,经南京中医药大学中药鉴定教研室吴启南教授鉴定,粉碎后备用。
医用酒精；甲醇ar级；蒸馏水；其余所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 标准曲线的制备
精密称取在105 ℃干燥下的芦丁对照品0.020 0 g,置100 ml
容量瓶中,加适量甲醇溶解,定容至刻度,摇匀,即得对照品溶液(每1 ml中含无水芦丁0.2 mg)。
精密吸取上述对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml,分别置25 ml容量瓶中,各加水至6.0 ml,加5%亚硝酸钠溶液1 ml,混匀,放置6 min,加10%硝酸铝溶液1 ml,摇匀,放置6 min,加4%氢氧化钠试液10 ml,再加水至刻度,摇匀,放置15 min,进行全波长扫描,在510 nm处均有最大吸收。以510 nm 得的吸收度a对浓度c回归,以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程为a=3.865 7c-0.052 5 (r=0.999 4)。在8～48 μg/ml的范围内,浓度与吸收度有良好的线性关系。
2.2 总黄酮提取量的测定
按2.3.3项下方法制备样品。精密称定一定量的干燥品,用甲醇定容至25 ml容量瓶中,再精密吸取3 ml,置25 ml容量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至6.0 ml”起,依法测定吸光度。按照2005版《中国药典》(一部)[4]规定的方法测定。
2.3 醇提工艺条件的选择
2.3.1 醇提浓度的选择
将浙江产淡竹叶药材粉碎,称取20 g/份,共3份,加15倍量的50%乙醇,回流提取2 h(85 ℃),3份提取液分别进行抽滤,将滤液在旋转蒸发仪上浓缩(80 ℃,0.08 mpa),浓缩液在水浴锅上蒸至成稠膏状,再放置真空干燥箱中(80 ℃,0.08 mpa),24 h后取出,取少量醇浸膏测定总黄酮提取量。同法测定60%、75%、95%醇提液的总黄酮提取量(见表1)。结果表明,以20 g原药材中总黄酮提取量为考察指标,75%醇提液得到的总黄酮量最多,故采用75%乙醇提取的工艺。表1 醇提浓度的选择（略）
2.3.2 提取工艺的正交试验
按照上述单因素考察结果,按表2中的因素水平进行正交试验。表2 因素水平表（略）
2.3.3 正交试验方法与结果
将淡竹叶药材粉碎后,称取20 g,用l9(34)正交表安排试验(见表3)。将回流提取液分别过滤,滤液在旋转蒸发仪上浓缩(80 ℃,0.08 mpa),浓缩液放置在蒸发皿中于水浴锅上蒸至成稠膏状后,放置真空干燥箱中(80 ℃,0.08 mpa),24 h后取出,于干燥器中干燥1 h后称量,再按照2.2.1项下方法测定总黄酮的提取量,结果见表3。表3 正交试验设计表及结果（略）
2.3.4 方差分析
(见表4)表4 方差分析表（略）注：f0.05(2,2)=19。
由上述直观分析结果可知,以总黄酮提取量为考察指标,最佳提取工艺条件为a1b2c1,即18倍量75%乙醇回流提取1次,每次1.5 ｈ。方差分析结果显示：a因素(加醇量)对总黄酮提出有显著影响,b因素(提取时间),c因素(提取次数)对总黄酮提出无显著影响。结合生产实际,从降低生产成本出发,对提取条件作适当调整,确定醇提工艺条件为a1b3c1,即18倍量75%乙醇回流1 h,提取1次。
2.3.5 验证试验
称取20 g原药材,按照a1b3c1进行验证试验,结果见表5。表5 验证试验分析表（略）
3 讨论
通过l9(34)正交表试验,最终确定淡竹叶中总黄酮醇提取工艺的条件为：75%乙醇18倍量提取1.0 h,共提取1次,其结果经验证试验确认该条件可行,可以作为大生产的参考工艺条件。
【参考文献】
[1] 江苏新医学院.中药大辞典(下册)[m].上海：上海科学技术出版社, 1977.2253－2254.
[2] 韩公羽,沈企华.植物药有效成分的研究与开发[m].杭州：杭州大学出版社,1991.94－102.
[3] 孙佩霞,叶丽卡,张晓丽,等.比色法测定淫羊藿胶囊中总黄酮的含量[j].沈阳药科大学学报,1999,16(1)：68－70.
[4] 国家药典委员会.中国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.附录28.
