【摘要】  目的 比较不同产地大青叶中有机酸的含量。方法 根据大青叶药材中3种主要有机酸紫外吸收图谱的特点,采用日本岛津uv-2401型紫外分光光度计测定不同产地大青叶药材中有机酸含量,并进行了方法学考察。结果 不同产地大青叶中的有机酸含量差异显著。结论 本法操作简单、准确、重复性好,可作为大青叶中有机酸定量分析的方法。

【关键词】  大青叶；有机酸；紫外分光光度法

　　abstract：objective to compare the content of organic acid in folium isatidis from differernt habitats. methods according to ultraviolet absorption atlases characteristics of the three main organic acid in folium isatidis, dsa uv-2401 was used to determinate the acidcontent of folium isatidis from differernt habitats, and carried on to inspect the methodology. results the difference of the acidcontent of folium isatidis from differernt habitats is notable. conclusion the method is simple, accurate and duplicated good, and can be used as quantitative analysis method of organic acid in folium isatidis.
key words：folium isatidis；organic acid；ultraviolet spectrophotometric method
 
    水杨酸、丁香酸和苯甲酸是大青叶中常见的3种有机酸成分。Www.11665.COm对于大青叶中有机酸含量测定的方法已有相关的报道[1],但是这些方法较繁琐。本实验采用紫外分光光度法进行测定,结果较为准确,可作为大青叶中有机酸定量分析的参考方法。

　　1  仪器与试药

　　日本岛津uv-2401型紫外分光光度计；万分之一瑞士梅特勒ae-100电子分析天平；hh-s型水浴锅。苯甲酸与水杨酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110716-200408)；丁香酸对照品(alfa aesar公司)；各产地大青叶药材(经鉴定为十字花科植物菘蓝的叶)。所用试剂均为分析纯；水为蒸馏水。

　　2  方法与结果

　　2.1  原理

    根据3种有机酸在200～400 nm范围内的全波长扫描图可知,水杨酸在305 nm处有吸收峰,而此处苯甲酸及丁香酸无吸收,可在此波长下测定水杨酸的含量；在261 nm处丁香酸有吸收峰,而此处水杨酸无吸收,苯甲酸吸收极弱,此波长可用于测定丁香酸的含量；在240 nm处3个组分吸收重叠,可用于测定苯甲酸、水杨酸及丁香酸的含量之和,减去水杨酸及丁香酸的含量,即为苯甲酸的含量。

　　2.2  对照品溶液的制备

　　精密称取标准品水杨酸、丁香酸和苯甲酸5 mg,分别置于5 ml容量瓶中,加蒸馏水适量定容至刻度,摇匀,备用。

　　2.3  样品溶液的制备

    将干燥后的药材粉碎过80目筛,取约1 g,精密称定。分别置具塞磨口的100 ml锥形瓶中,加入50 ml甲醇,超声提取20 min,过滤,重复2次,合并滤液,挥干甲醇,加入适量75%的乙醇溶解残渣,转移样品溶解液置25 ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀。再精密量取1 ml样品溶液,置50 ml容量瓶中定容至刻度,摇匀待测。

　　2.4  线性关系考察
   
　　分别精密量取水杨酸、丁香酸标准品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 ml至10 ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀,备用。精密量取苯甲酸、水杨酸、丁香酸标准品溶液分别各0.05、0.10、0.15、0.20、0.25 ml至10 ml容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度,摇匀,备用。以水作为空白参比溶液,分别在305、261、240 nm波长下测定其吸收度。以吸收度a为纵坐标,标准品浓度x(mg/ml)为横坐标,绘制标准曲线。得水杨酸的回归方程：y＝25.647x－0.020 7,r＝0.999 1,表明水杨酸在0.011 6～0.058 0 mg/ml范围内呈良好的线性关系；丁香酸的回归方程：y＝38.787x＋0.094 4,r＝0.999 2,表明丁香酸在0.009 4～0.047 0 mg/ml范围内呈良好的线性关系；混合酸的回归方程：y＝20.69x＋0.154 2,r＝0.999 8,表明混合酸在0.016 8～0.084 0 mg/ml范围内呈良好的线性关系。

　　2.5  精密度试验

    取同一样品溶液,以蒸馏水作为参比溶液,分别测其吸收度,连续5次,在305 nm下的rsd＝0.38%,在261 nm下的rsd＝0.17%,在240 nm下的rsd＝0.26%。表明仪器精密度符合要求。

　　2.6  稳定性试验

    取新配制的同一样品溶液,以蒸馏水作为参比溶液,分别于0、2、4、6、8 h时在3个波长下分别测其吸收度,连续5次,在305 nm下的rsd＝0.47%,在261 nm下的rsd＝0.13%,在240 nm下的rsd＝0.27%。表明供试品溶液在8 h内稳定。

　　2.7  重复性试验

    取同一批号的样品5份,按“2.3”项下方法制备样品溶液,以蒸馏水作为参比溶液,在3个波长下分别测其吸收度,连续5次,在305 nm下的rsd＝0.49%,在261 nm下的rsd＝0.17%,在240 nm下的rsd＝0.31%。表明仪器精密度符合要求。

　　2.8  样品含量测定

　　(见表1)表1  各产地大青叶中有机酸含量测定比较（略）

　　2.9  加样回收率试验

    精密称取已知含量的样品5份,分别加入3种有机酸的标准品适量,按照“2.3”项下方法制备样品溶液,以蒸馏水作为参比溶液,在3个波长下分别测定其吸收度,计算平均加样回收率。测得水杨酸的平均加样回收率99.816%,rsd＝0.568%(n＝5)；丁香酸的平均加样回收率99.438%,rsd＝0.684%(n＝5)；苯甲酸的平均加样回收率99.490%,rsd＝0.626%(n＝5)。

　　3  讨论

　　宁夏隆德产的大青叶中水杨酸含量最高,河北肃宁产的大青叶中丁香酸含量最高,安徽临泉产的大青叶中苯甲酸含量最高。综合评价宁夏隆德产的大青叶中3种有机酸总量最高。可以视实际需求情况,有选择的采用不同产地的大青叶药材。
   
　　在261 nm处测定丁香酸含量,可能会受到苯甲酸吸收的细微影响,所以结果存在误差,使得苯甲酸的含量偏低、丁香酸含量偏高的现象,有待于进一步的研究。

【参考文献】
  [1] 张 立,周建科,张前莉,等.离子排斥色谱法测定大青叶中有机酸的含量[j].辽宁中医药大学学报,2006,8(4)：120－121.