作者：李涛,麒麟,苗术,刘建华

【摘要】  目的 采用高效液相色谱法测定金茵颗粒剂中绿原酸的含量。方法 kroasil ods 柱(4.6 mm×250 mm)；柱温：室温；流动相：0.3%乙酸-甲醇(74∶26)；流速：0.9 ml/min；检测波长：327 nm。结果 该方法的线性范围为65～325 μg/ml,回归方程为：a=24 239 869c-31 292,r=0.999 3；平均回收率为100.10 %,rsd=0.87%(n=6)。结论 该方法可作为金茵颗粒剂的质量控制方法。

【关键词】  高效液相色谱法；金茵颗粒剂；绿原酸；含量测定

    abstract：objective to establish a hplc method to determind the content of chlorogenic acid in jinyin granules. method the mobile phase was 0.3%hac-methonal (74∶26). the uv detection wavelength was 327 nm. the mobile speed was 0.9 ml/min. separation column was kroasil ods (4.6 mm×250 mm). result a good linearity was obtained in the range of 65～325 μg, regression a=24 239 869c-31 292, r=0.999 3. the average recovery was 100.10%, rsd was 0.87% (n=6). conclusion the method was good for determining chlorogenic acid in jinyin granules.
   
　　key words：hplc；jinyin granules；chlorogenic acid；content determination
 
    金茵颗粒剂是由金钱草、茵陈、枳实、熊胆粉等6味中药材经水提取、减压干燥后与一定量糖粉混合,经现代工艺制备而成,具有清热解毒、利胆退黄、行气止痛之功效,可用于治疗胆囊炎、胆结石等病症。WwW.11665.coM茵陈中的绿原酸是该颗粒剂中的有效成分,因此,我们建立了该制剂中绿原酸的hplc测定方法,该法具有快速、准确、灵敏度高的特点,可作为该制剂的质量控制方法。

　　1  仪器与试药

    waters公司高效液相色谱仪,包括waters-600输液泵、2487紫外-可见光检测器、7725i手动进样器。
   
　　绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号753-9003),金茵颗粒剂由齐齐哈尔医学院研制生产(批号030305,030306,030307)。甲醇为色谱纯,水为超纯水,冰醋酸为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件[1]
  
　　kroasil ods 柱(4.6 mm×250 mm)；柱温：室温；流动相：0.3%乙酸-甲醇(74∶26)；流速：0.9 ml/min；检测波长：327 nm；进样量10 μl；流动相经0.45 μm微孔滤膜过滤。在本实验条件下,绿原酸的色谱峰分离较好(见图1)。

　　2.2  对照品溶液的配制
   
　　精密称取绿原酸对照品13 mg于10 ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。

　　2.3  标准曲线的建立
   
　　精密吸取上述绿原酸对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml分别置于10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,按上述色谱条件分别进样10 μl(每份重复进样2次),测得峰面积。以峰面积a为纵坐标、绿原酸对照品溶液的浓度(c)为横坐标,绘制标准曲线,并求得线性回归方程为：a=24 239 869c-31 292,r=0.999 7。

　　2.4  供试品溶液的制备[2]
   
　　精密称取本品适量(0.8 g),加热水30 ml使溶解,静置后过滤,热水洗涤。合并滤液,调ph值至2.0,用乙酸乙酯提取6次,第1次15 ml,以后每次10 ml,合并乙酸乙酯提取液,水浴蒸干,用甲醇稀释至2 ml,过0.45 μm滤膜,作为供试品溶液。

　　2.5  阴性对照液的制备

    按处方比例称取除茵陈以外的其它药材,按生产工艺方法制得阴性样品后,按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。

　　2.6  回收率试验

    精密称取已知绿原酸含量的金茵颗粒剂0.8 g,共6份,准确加入绿原酸对照品,按样品测定项下方法操作,结果见表1。表1  回收率试验结果（略）

　　2.7  精密度试验
  
　　取对照品溶液重复进样6次,计算平均峰面积a=4 688 660,
rsd=0.87%。

　　2.8  稳定性试验

    在室温条件下,将对照品溶液和样品溶液分别放置0、2、4、6、8 h后进行测定,测得样品含量,rsd分别为1.02%和0.90%。

　　2.9  重现性试验

    精密称定同一批号的样品5份(批号030305),按样品测定项下条件,测得样品中绿原酸的含量,rsd=0.93%。

　　2.10  绿原酸含量的测定
   
　　取3批金茵颗粒剂样品分别制成供试品溶液,按上述色谱条件测定,根据上述回归方程,求得绿原酸含量,结果见表2。表2  金茵颗粒剂中绿原酸含量测定结果（略）

　　3  讨论
   
　　本试验采用多种提取方法,用甲醇超声提取干扰成分与主成分不能得到很好的分离,用乙酸乙酯回流提取、超声提取结果不理想。
   
　　在本试验所采用的绿原酸提取方法中,ph值应控制在1.5～2.5之间,乙酸乙酯提取6次可将绿原酸提取完全。
   
　　流动相中加入少量的酸可抑制色谱峰拖尾。

【参考文献】
  　　[1] 刘善新,贾元印,张新军,等.hplc法测定银仁颗粒中绿原酸的含量[j].中药新药与临床药理,2005,16(2)：116－118.

　　[2] 王 建.hplc法测定金参润喉合剂中绿原酸的含量[j].中国现代应用药学杂志,1999,16(2)：50.