作者：陈有根　邬国庆　戴俊东　李慧

【摘要】  ：目的 建立中药麦冬的指纹图谱,为麦冬药材及其制剂的质量控制提供依据。方法 采用hplc梯度洗脱、紫外检测的方法,分别对产于四川绵阳的川麦冬和浙江慈溪的杭麦冬各10批药材进行检测,用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统a版”,计算各药材样品的相似度,并生成麦冬药材对照指纹图谱。结果 来源于两个不同产区的药材,产区内样品间相似度多数大于0.95,但产区间样品相互比较,则相似度多数小于0.80,有的竟小于0.50。结论 川麦冬和杭麦冬的指纹图谱相差明显,不仅可用于区别两个不同产区的药材,也可用于区别用两个不同产区的药材生产的中成药制剂。

【关键词】  川麦冬　杭麦冬　指纹图谱　高效液相色谱法

　　abstract：objective to establish the fingerprints for characterization of the chemical components of maidong (root of ophiopogon japonicus) in two main cultivate regions of china, sichuan (chuanmaidong) and zhejiang (hangmaidong). methods an hplc-uv analytical methods was applied to detect 70% ethanol extracts of 20 samples from sichuan and zhejiang province, a “fingerprint similarity evaluating system for tcm” issued by pharmacopoeia committee of p. r. china was used to evaluate the similarities all of the samples. results the fingerprints revealed that the similarities were higher than 0.95 between samples from the same cultivate region, and were lower than 0.80 between samples from different regions of above two. conclusion the fingerprints of chuanmaidong and hangmaidong were provided with high difference, and the difference can be taken as a most important proof for distinguishing the material medica of chuanmaidong and hangmaidong, but also in patent medicine of tcm.

　　key words：chuangmaidong；hangmaidong；fingerprints；hplc
 
 　   麦冬来源于百合科(liliaceae)沿阶草属植物麦冬ophiopogon japonicus (thunb.) ker-gawl.的干燥块根,具有滋阴生津、润肺清心等功效,主要成分为甾体皂苷类、高异黄酮类和多糖类化合物。wWW.11665.CoM我国麦冬道地产区有两个,分别为四川绵阳和浙江慈溪,来源于两个产区的麦冬药材分别习称川麦冬和杭麦冬。由于两个产区的气候环境和采收习惯不同,导致其化学成分和含量存在一定差异,如川麦冬主含麦冬皂苷d,并含少量麦冬皂苷b,而杭麦冬主含麦冬皂苷b,含少量或不含麦冬皂苷d；川麦冬中甲基麦冬黄烷酮a的含量高于甲基麦冬黄烷酮b,而杭麦冬中甲基麦冬黄烷酮a的含量则低于甲基麦冬黄烷酮b,而且杭麦冬中甲基麦冬黄烷酮a和甲基麦冬黄烷酮b的总量显著高于川麦冬。基于比较川麦冬与杭麦冬的化学成分特征,为麦冬药材及其制剂的质量控制提供依据,本试验通过系统研究,分别建立了川麦冬、杭麦冬的指纹图谱。

　　1  仪器与试药

   　 agilent 1100高效液相色谱仪,四元泵,自动进样器,柱温箱,dad二极管阵列检测器,agilent a10.02工作站。kromasil c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)。样品来源与编号见表1。乙腈为色谱纯,水为纯净水,其它试剂均为分析纯。 表1  药材来源（略）

　　2  方法与结果

　　2.1  提取方法的选择

   　 我们对《中华人民共和国药典》、《卫生部药品标准》、《新药转正标准》等国家药品标准中含麦冬的中成药复方进行了统计,结果表明：目前我国200余种中成药制剂处方中含有麦冬,这些中成药制剂对麦冬药材的提取处理工艺基本使用同一种方法,即水煎煮-乙醇沉淀法。为使药材指纹图谱对含麦冬的中成药质量控制具有一定的借鉴作用,理论上药材样品的提取方法也应该采用水提-醇沉方法,为简化制样方法,我们选择采用70%乙醇直接提取。本课题比较了用70%乙醇冷浸(24 h)、超声(30 min)和回流(1 h)3种方法,结果表明：3种方法的提取效率基本一致,但回流提取的样品由于加热后糖分溶解度增大,以至于溶液相对很难滤过,因此,确定采用70%乙醇冷浸24 h的制样方法。

　　2.2  检测波长的选择

  　 取md01细粉1 g,精密称定,置10 ml容量瓶中,加70%乙醇至刻度,冷浸24 h,期间振摇数次,微孔滤膜滤过,制得供试品溶液。进样10 μl,用不同检测波长检测,比较在230、254、280、300、330 nm波长条件下,色谱峰的信息给出情况。结果表明：检测波长为280 nm和300 nm时,色谱峰给出信息最多,但检测波长为300 nm时,各色谱峰的峰高更高。确定选择300 nm作为指纹图谱检测波长。

　　2.3  流动相的选择
   
　　取“2.2”项下的供试品溶液,以乙腈(a)-0.3%磷酸水(b)溶剂系统,在表2所列的3种梯度条件下,分别进样10 μl,比较其分离效果。结果表明：流动相3的分离效果最好。表2  麦冬药材指纹图谱流动相a梯度表(略)

　　2.4  色谱柱的选择

   　 取“2.2”项下的供试品溶液,用流动相3进行洗脱,分别比较了waters symmetry(3.9 mm×150 mm,5 μm)、merck lichrocatr (4.0 mm×250 mm,5 μm)和kromasil(4.6 mm×250 mm,5 μm)3种c18反相色谱柱的分离效果,结果表明：kromasil色谱柱对各色谱峰分离效果相对较好。因此,本实验选择kromasil色谱。

　　2.5  进样精密度试验

   　 取“2.2”项下的供试品溶液,连续进样5次,每次10 μl。以峰面积之和大于90%的20个色谱峰为共有峰,以第19号峰甲基麦冬黄烷酮a为s峰,计算各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积。结果表明,各色谱峰相对保留时间和相对峰面积的比值基本一致,rsd均小于5%,符合指纹图谱的要求。

　　2.6  稳定性试验

　    取“2.2”项下的供试品溶液,每隔4 h进样1次,每次10 μl,共进样5次。测定结果表明,各共有峰相对保留时间基本一致,各共有峰单峰面积rsd均小于5%,符合指纹图谱要求。

　　2.7  重复性试验

  　  取md01细粉1 g,5份,精密称定,分别置10 ml容量瓶中,加70%乙醇至刻度,冷浸24 h,期间振摇数次,微孔滤膜滤过,制得供试品溶液。各进样10 μl,检测指纹图谱。结果表明,各色谱峰的相对保留时间和峰面积的比值基本一致,rsd均在5%以内,符合指纹图谱的要求。

　　2.8  麦冬药材指纹图谱标准的制定

  　  取不同来源的麦冬药材细粉1 g,精密称定,分别置10 ml容量瓶中,加70%乙醇至刻度,冷浸24 h,期间振摇数次,微孔滤膜滤过,制得供试品溶液。精密量取各供试品溶液10 μl,注入液相色谱仪,记录60 min色谱图。用药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统a版”,计算各药材样品的相似度,并生成麦冬药材对照指纹图谱。相似度计算结果表明：①在20批麦冬药材样品中,与由20批药材样品生成的对照指纹图谱相比较,仅有10批相似度大于0.90,占总样品数的50%；有8批相似度小于0.80,占总样品数的40%；②在10批川麦冬药材样品中,与由10批川麦冬药材样品生成的对照指纹图谱相比较,10批相似度均大于0.85,其中有9批相似度大于0.90,占样品数的90%；③在10批浙麦冬药材样品中,与由10批浙麦冬药材样品生成的对照指纹图谱相比较,10批相似度均大于0.95。见表3～表5、图1～图4。表3  20批不同产区麦冬药材样品相似度计算结果（略） 表4  10批同一产区川麦冬药材样品相似度计算结果（略） 表5  10批同一产区浙麦冬药材样品相似度计算结果（略）

　　3  讨论
   
　　从川麦冬和浙麦冬的指纹图谱相似度计算结果可以看出：来源于两个不同产区的药材,产区内各样品与同一产区药材生成的对照指纹图谱比较,相似度多数大于0.95；但产区间样品相互比较,则相似度半数小于0.90。
   
　　由10批川麦冬药材生成的对照指纹图谱有20个共有峰,由10批浙麦冬药材生成的对照指纹图谱只有13个共有峰。两个对照指纹图谱的主要区别是：川麦冬药材对照指纹图谱在保留时间为7.3 min和10.1 min处有两个较大吸收峰,而浙麦冬药材对照指纹图谱仅在保留时间为7.3 min处有一个较小吸收峰；相反,浙麦冬药材对照指纹图谱在保留时间为53.1 min和54.2 min处有两个较大吸收峰,而川麦冬药材对照指纹图谱在这两处有两个较小吸收峰,而且两个吸收峰峰面积大小比刚好相反。
    林氏等[1]分别采用hplc-elsd-esi/tof-ms和hplc-uv方法对川麦冬和浙麦冬药材的正丁醇部位和乙醚部位进行了指纹图谱研究。结果表明：川麦冬和杭麦冬的指纹图谱虽存在共有峰,但谱图整体存在一定的差异。
   
　　我们曾对川麦冬与浙麦冬中麦冬皂苷d、总皂苷、甲基麦冬黄烷酮a和b两种高异黄酮、果糖、低分子总糖等进行过含量测定,所有研究结果都显示：川麦冬与浙麦冬中化学成分含量存在明显差异；这些差异是否说明二者之间存在种群差异,值得进一步探讨。本研究结果可以为麦冬药材及其制剂的质量控制和麦冬的化学分类提供理论依据。

【参考文献】
  　　[1] 林以宁,志田保夫,袁 博,等.不同产地麦冬的指纹图谱比较研究[j].中国药科大学学报,2005,36(6)：538－542.