作者：李先端　程立平　顾雪竹　游修琪　毛淑杰

【摘要】  ：目的 建立盐补骨脂饮片质量标准。方法 采用传统鉴别、薄层鉴别及hplc法测定生、盐补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素成分含量；同时对其水分、灰分、浸出物、农药残留、重金属等进行测定。结果 10多个生、熟样品中,补骨脂素、异补骨脂素含量总和平均不低于0.5%和0.6%。结论 hplc方法操作简便、结果可靠、重现性好、专属性强,可用于补骨脂中成分含量的测定,制定的质量标准规范、系统、结果准确。

【关键词】  盐补骨脂　补骨脂素　异补骨脂素　质量标准

　　abstract：objective to establish quality standard for prepared slices of salt-processed psoralea corylifolia. methods psoralen and isopsoraten in the crude psoralea corylifolia and its salt-processed products were determined by traditional identification, thin-layer identification and hplc method. water, ash, extract, pesticide residue and heavy metals were also detected. results the average content of total content determination for psoralen and isopsoraten in more than 10 patches of crude and processed samples was not below 0.5% and 0.6% respectively. conclusion hplc method is simple and the result is reliable with good repeatability and can be used for the determination of the components in psoralea corylifolia. the quality control standards of the psoralea corylifolia is normative, systematic and the result is accurate.　

　　key words：salt-processed psoralea corylifolia；psoralen；isopsorate；quality standards
 
  　  补骨脂为豆科植物补骨脂(psoralea corylifolia l.)的干燥成熟果实。wWW.11665.cOm具有温肾助阳、纳气、止泻的功效。用于阳痿遗精,遗尿尿频,腰膝冷痛,肾虚作喘,五更泄泻；外用治疗白癜风、斑秃等[1],为临床常用中药。补骨脂中含有黄酮、香豆素、补骨脂酚等30余种化合物[2],其中呋喃香豆精类成分补骨脂素、异补骨脂素是其主要有效成分,具有光敏、抗癌、解痉及止血等作用。故目前补骨脂的质量均以该2种成分的含量为依据,来衡量补骨脂药材的质量优劣。《中华人民共和国药典》对盐补骨脂饮片目前还没有具体的质量要求。我们配合“常用中药饮片规范化研究课题”(“九五”攻关),对盐补骨脂饮片质量作了较系统的研究,可为制定其质量标准提供科学依据。现将结果报道如下。

　　1  实验材料

　　1.1  药物

   　 购买产于四川、河南、云南、浙江地区的补骨脂药材,经鉴定为豆科植物补骨脂psoralea corylifolia l.的干燥成熟果实。

　　1.2  炮制品

   　 ①药典法炮制品：取净制补骨脂10 kg,加2%盐溶液1 kg与药材拌匀,闷1 h,置炒药机内(130～150 ℃)炒15～18 min,出锅,晾干,即得。②新法炮制品：取净制补骨脂10 kg,加水10 kg,浸渍一昼夜,晾干,再加2%盐溶液1 kg,拌匀,闷1 h,置炒药机内(130～150 ℃)炒15～18 min,出锅,晾干,即得。

　　1.3  仪器及试剂

   　 高效液相色谱仪(美国沃特斯公司)；cyj-700滚桶式炒药机(上海制造)。补骨脂素、异补骨脂素(中国生物制品检定所提供)；硅胶g(青岛海洋化工厂生产)。甲醇为色谱纯；其它试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  饮片性状

 　   生补骨脂：呈肾形略扁,长3～5 mm,宽2～4 mm,厚约1.5 mm。表面黑褐色或灰褐色,有微细的网纹。质坚硬,破开内有白色种仁,有油性。微有香气,味辛微苦。
   
　　药典法盐补骨脂：形如补骨脂,微鼓起,色泽加深。气微香,味微咸。

   　 新法盐补骨脂：肾形,微鼓起,长3～5 mm,宽2～4 mm。表面黑色、黑褐色或灰褐色,具细微网状皱纹。顶端圆钝,有一小突起,凹侧有果梗痕。质松脆,断面棕褐色。果皮薄,与种子易分离。气香,味微咸。

　　2.2  粉末显微特征

  　  生补骨脂：粉末灰黄色。种皮栅栏细胞成片,横断面观细胞1列,光辉带位于上端；顶面观呈多角形,胞腔极小。种皮支持细胞1列,侧面观呈哑铃状；表面观呈类圆形,可见环状增厚壁。内生腺体自果皮表皮向内着生,形大,常破碎。完整者侧面观略呈半球形,由十数个至数十个细胞组成,呈放射状排列。子叶细胞含糊粉粒和油滴。
   
　　药典法盐补骨脂：与生补骨脂不同之处为子叶细胞糊粉粒糊化状。
  
　　新法盐补骨脂：粉末黄棕色。种皮栅状细胞横切面观细胞1列,侧壁上部较厚,下部较薄,内壁薄；顶面观多角形,胞腔极小,孔沟细而清晰；底面观呈类圆形,胞腔较大。种皮支持细胞侧面观呈哑铃状；表面观呈类圆形,可见环状增厚壁。内生腺体常破碎,完整者有时可见,表面观类圆形,中央有多个子角形表皮细胞集成类圆形细胞群,周围细胞纵向延长,呈放射状排列。内胚乳细胞呈类圆形、类长方形或多角形,细胞界限不明显,腔内有糊化淀粉粒。

　　2.3  薄层鉴别

   　 取补骨脂粉末(60目)0.5 g,加甲醇10 ml,超声处理20 min,滤过,滤液作为供试品溶液。另取补骨脂素、异补骨脂素对照品,加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照[2005版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅵb]试验,吸取上述2种溶液各2～4 μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以正己烷-醋酸乙酯(8∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%氢氧化钠乙醇溶液,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同的2个蓝白色荧光斑点。

　　2.4  检查

　　2.4.1  水分测定 

　　取过2号筛的粉末供试品2～4 g,精密称定,平铺于干燥至恒重的称量瓶中,厚度不超过5 mm,打开瓶盖,在100～105 ℃干燥5 h,盖瓶盖,移置干燥器中,冷却30 min,精密称定重量,再在上述温度干燥1 h,冷却,称重,至2次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失的重量,计算供试品含水量,测定结果见表1、表2。

　　2.4.2  总灰分及酸不溶性灰分测定 

　　总灰分测定：取过2号筛的粉末供试品3～4 g,精密称定,置炽灼至恒重的坩埚中,缓缓炽热,注意避免燃烧,至完全炭化时,逐渐升高温度至500～600 ℃,使完全炭化并至恒重。根据残渣重量,计算供试品总灰分的含量(%)。如供试品不易炭化,可将坩埚放冷,加热水或10%硝酸铵溶液2 ml,使残渣湿润,然后置水浴上蒸干,残渣照前法炽灼,至坩埚内容物完全炭化。测定结果见表1、表2。
   
　　酸不溶性灰分测定：取“2.4.2”项下所得的灰分,在坩埚中加入稀盐酸约10 ml,用表面皿覆盖坩埚,置水浴上加热10 min,表面皿用热水5 ml冲洗,洗液并入坩埚中,用无灰滤纸滤过,坩埚内的残渣用水洗于滤纸上,并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中,干燥,炽灼至恒重。根据残渣重量,计算供试品中酸不溶性灰分的含量(%)。测定结果见表1、表2。

　　2.5  浸出物测定

  　  取供试品约2～4 g,称定重量,置250 ml锥形瓶中,精密加入水100 ml,塞紧,称定重量,静置1 h后,连接回流冷凝管,加热至沸腾,并保持微沸1 h。放冷后,取下锥形瓶,密塞,称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25 ml,置已恒重的蒸发皿中,水浴上蒸干后,于105 ℃干燥3 h,移置干燥器中,冷却30 min,迅速精密称定重量,以干燥品计算供试品中水浸出物的含量(%),结果见表1、表2。表1  中试样品中总灰分、酸不溶性灰分、水分、浸出物含量(略)表2  中试样品中总灰分、酸不溶性灰分、水分、浸出物含量(略)

　　2.6  含量测定[3]

    　色谱柱：填料为kromasil-c18,5 μm,4.6 mm×250 mm(北京分析仪器厂填装)；流动相：甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1)；柱温：室温；检测波长：246 nm；流速：0.8 ml/min。

   　 对照品溶液的制备：精密称取补骨脂素、异补骨脂素对照品各2.5 mg,分别置25 ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀；分别精密量取补骨脂素、异补骨脂素溶液各4 ml,置25 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(每l ml含补骨脂素、异补骨脂素各16 μg)。

  　  供试品溶液的制备：取补骨脂各饮片粉末(60目)约0.15 g,精密称定,置50 ml具塞三角瓶中,精密加甲醇25 ml,称定重量,超声处理20 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。

 　   分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10 μl,注入液相色谱仪,测定峰面积,计算含量,测定结果见表3、表4。表3  中试13批样品中补骨脂素、异补骨脂素含量测定结果(略)表4  中试13批样品中补骨脂素、异补骨脂素含量测定结果(略)

　　2.7  重金属测定

   　 精密称取过2号筛的供试品粉末适量,经微波消化处理后,用原子吸收光谱法分析测定,结果见表5。表5  重金属测定结果(略)

　　2.8  农药残留量测定

  　  精密称取补骨脂、药典法盐补骨脂及新法盐补骨脂粉末适量,经提取制得供试品溶液,用气相色谱法分析测试,结果见表6。表6  农药残留测定结果(略)

　　2.9  微生物检查

   　 按照2005版《中华人民共和国药典》附录ⅹⅲc试验,检查结果见表7。表7  微生物检测结果（略）注：重金属、农药残留、微生物检查由北京谱尼理化分析测试中心测定

　　3  讨论

  　  粉末显微鉴别表明,补骨脂生品与盐制品的显微特征区别为：生品子叶细胞含糊粉粒和油滴清晰可见,而盐制品油滴消失,子叶细胞糊粉化。

 　   无论小试和中试(4个产地)10多批补骨脂样品,经新工艺炮制后,有效成分补骨脂素与异补骨脂素含量与生品、《中华人民共和国药典》方法比较均增加,这与以前的文献报道基本一致。实验结果更进一步说明,新工艺是可行的,炮制是有科学道理的。

 　   从不同产区生补骨脂2种成分测定结果看,总量有差别。虽然河南也为补骨脂主要产地,但四川、云南、浙江产2种成分总量均高于河南1倍,原因值得进一步探讨。

  　  hplc方法操作简便、结果可靠、重现性好、专属性强,可用于补骨脂中有效成分含量测定。质量标准研究规范、系统,结果准确,建议有关部门采纳。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.147.

　　[2] 吴 焕.补骨脂的化学成分[j].中草药,1978,(10)：32.

　　[3] 李先端,毛淑杰,程立平.高效液相色谱法测定补骨脂生品和炮制品中补骨脂素与异补骨脂素含量[j].中国药物与应用监测,2005,(1)：44.