作者：施薇 ，刘志强，王淑敏 ，皮子凤
【摘要】 目的研究氮酮对盐酸小檗碱的体外透皮吸收的影响，为黄连复方涂膜剂透膜吸收促进剂的选择和生产质量控制提供依据。方法以裸鼠皮肤为试验屏障，利用zty智能透皮实验仪和高效液相色谱（hplc）检测法，研究氮酮与冰片联合使用时对盐酸小檗碱透皮吸收的影响。结果当一定量的冰片与浓度分别为0%，2%，5%的氮酮联合使用时，盐酸小檗碱的透皮吸收速率常数分别为62.591，52.927，60.622 μg·cm-2·h-1。结论 冰片与不同浓度的氮酮联合使用时，氮酮与冰片有一定的相互抑制作用，氮酮浓度为0%时，有最大的透皮吸收速率常数。
【关键词】 涂膜剂； 透皮吸收； 高效液相色谱； 盐酸小檗碱
abstract：objectiveto study the effects of azone on the percutaneous of berberine hydrochloride in vitro so as to provide experimental basis for complex prescription coptis chinensis plastics to choose absorb promoter and control production quality. methodswith the skin of nude mice as the barrier, zty intelligence permeation skin tester and detection of hplc were used to study the effects of coalition utilization of azone and borneol for percutaneous absorption of berberine hydrochloride in vitro. resultsthe rate constants of berberine hydrochloride were 62.591，52.927 and 60.622 μg·cm-2·h-1 respectively when azone and borned of 0,2%,5% were used together.conclusionazone with different concentration and bornel inhibit each other when they are combinedly used.the absorption rate is maximum when azone is 0%.
key words： plastics; percutaneous absorption ; hplc ; berberine hydrochloride
黄连为毛茛科（ranunculaceae）植物黄连coptis chinensis franch，三角叶黄连coptis deltoidea c.y. cheng et hsiao 或云连 coptis teeta wall.的干燥根茎。WWw.11665.Com药材依次习称为“味连”“雅连”“云连”［1］。黄连性寒，味苦，归心、脾、胃、肝、胆、大肠经，具有清热燥湿,泻火解毒之功效。黄连中主要成分为盐酸小檗碱，具有抗腹泻、抗炎、免疫促进、降血压、抗心律失常、降血糖等作用。本文以裸鼠皮肤为实验屏障，利用zty智能透皮吸收试验仪对盐酸小檗碱的透皮吸收进行研究［2～4］，并且利用高效液相色谱法［5～7］对盐酸小檗碱的含量进行测定，优选出最佳经皮吸收促进剂，为复方黄连涂膜剂的实验研究提供实验基础。
1 仪器与材料
1.1 仪器waters2690 高效液相色谱仪，2996 uv diode detector 检测器（美国waters 公司产品）；sanoriusbs110s十万分之一分析天平（北京赛多利斯有限公司产品）；kq－500de型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司产品），zty智能透皮试验仪(巩义市予华仪器有限责任公司)
1.2 药物和试剂复方黄连涂膜剂，盐酸小檗碱对照品（供含量测定，批号：110713-200208，中国药品生物制品检定所），氯化钠，聚乙烯醇（pva-124）(scrc国药集团化学试剂有限公司),氮酮，吐温－80，甘油；乙醇，甲醇均为分析纯；磷酸，乙腈均为色谱纯，超纯水。
1.3 动物wistar大鼠（由吉林大学实验动物中心提供）。
2 方法与结果
2.1 盐酸小檗碱测定方法的建立
2.1.1 色谱条件色谱柱：diamonsil c18（5 μm, 4.6 mm×250 mm），柱温35℃；流动相：乙腈-0.1%磷酸（20∶80）；流速：1 ml·min-1；检测波长：228 nm。
2.1.2 样品溶液的制备 按“2.2.4”项下制得样品溶液。
2.1.3 标准曲线的制备 精密称取盐酸小檗碱5.00 mg置于5 ml容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为1.00 mg·ml-1盐酸小檗碱对照品溶液，再分别精密量取一定体积的对照品溶液，配制成浓度为0.003 ，0.01 ，0.04，0.1，0.16 mg·ml-1的对照品溶液。在上述色谱条件下，进样体积为5 μl，以盐酸小檗碱浓度x（mg·ml-1）对吸收峰面积y回归，得回归方程：y＝3.268 7x-0.048 9，r=0.999 9,在0.015～0.8 μg 范围内线性关系良好。
2.1.4 精密度实验 精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样5次，测定结果的rsd=0.19％，表明仪器的精密度良好。
2.1.5 稳定性实验按“2.2.4”项下操作制得供试液，分别在2 ,4,8,12 ,24 h进样10 μl,在上述色谱条件下进行测定，测定结果的rsd=0.72％，(n=5)，表明供试品液在24 h内稳定。
2.1.6 加样回收率实验按“2.2.4”项下操作，取a组药液3 h接收液，烘干后甲醇定容至1 ml，过滤后得样品液，分别精密量取一定体积样品液5份，精密加入对照品适量，依法测定，计算加样回收率，平均回收率为x=98.862％，rsd=1.120％，表明本法准确性较好，方法可行。
2.2 经皮实验方法与结果
2.2.1 黄连复方涂膜剂（自行研制）a组：分别称取处方量pva-124甘油，5％氮酮，吐温-80，乙醇及黄连，冰片等制成黄连复方涂膜剂。b组：制备方法与a组相同，但氮酮浓度为2％。c组：制备方法与a组相同，但不加入氮酮。
2.2.2 离体鼠皮的制备取200～250 g大鼠,用脱毛膏脱毛，然后处死动物，分离腹部皮肤，小心剥离皮下脂肪，用生理盐水反复将其洗净，备用。
2.2.3 经皮吸收扩散装置经皮吸收扩散装置由上下两室对合而成, 将皮肤固定于两室中间。上室为扩散室, 下室为接受室, 在接受室的侧部连有一个取样管, 供取样、补充接受液和排除气泡用, 渗透面积为3.4 cm2, 实验中以多功能电磁搅拌器维持接受室动态环境, 实验维持(37.0±0.1)℃经皮渗透条件。
2.2.4 透皮吸收试验方法与结果 将已经处理好的动物皮肤固定在渗透扩散装置的扩散室与接受室之间，在接受室中注入生理盐水17.0 ml，液面恰于皮肤内层接触且没有气泡。开动电磁搅拌器，保持衡速搅拌和恒温，取上述已制备的三组药物0.3 ml涂于皮肤上，在1，2 ，4，8，12，16，20，24 h定时取样1.0 ml置小瓶中，每次取样后均补加相同体积的新鲜生理盐水并排除接受室中的气泡，计算每次试验的单位面积累积渗透量（q）以及透皮速率常数（j）。
将装有样品液的小瓶于50℃烘箱中烘干，取甲醇1 ml超声将其溶解，经0.45 μm微孔滤膜过滤，在“2.1.1”项下的色谱条件下测定盐酸小檗碱含量，按以下公式计算单位面积累积渗透量q（μg·cm-2）。
q=cnv+vr∑cpa
式中cn：为第n个取样点实际测得的药物浓度(μg·ml-1)； ∑cp：为该取样点前各点的药物测定浓度之和(μg·ml-1)；v：为接受液的体积(ml)；vr: 为取样体积(ml)；a：为渗透面积（cm2）。以单位面积累积渗透量q对时间t进行线性回归，所得斜率k即为速率常数j（μg·cm-2·h-1）。见图1及表1～2。表1 3组样品透皮吸收后接受液中盐酸小檗碱的含量（略）表2 盐酸小檗碱的透皮吸收速率常数（略）
3 结论
在有关经皮给药制剂的研究中，如何确保足够的药物透过皮肤进入体内以达到有效的血药浓度是其中的关键。促进药物透皮吸收的方法很多，其中选择理想的透皮吸收促进剂较为常用。氮酮是一种良好的透皮吸收剂，通过查阅相关文献，冰片也具有一定的透皮吸收促进作用，将二者联合使用时，实验结果表明当氮酮的浓度为0％时，其透皮吸收速率常数为62.591 μg·cm-2·h-1 达到最大值，出现这种现象有可能是氮酮与冰片联合使用时相互有一定的抑制作用，所以在此涂膜剂中勿需加入氮酮即可达到一定的透皮吸收作用，且透皮吸收效果较好。
【参考文献】
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