作者：刘可越，刘海军，高春华，刘建云，杨智斌，项遵重，王艳召
【摘要】 目的研究粟米草中的化学成分。 方法采用硅胶柱色谱层析, sephadex lh-20，phplc等手段对有效部位进行分离纯化，通过理化和波谱分析方法鉴定化合物结构。 结果从粟米草中位分离得到9个化合物,分别鉴定为: α-菠甾醇（α-spinasterol, ⅰ）、5，25-豆甾二烯醇（5，25-stigmastadienol， ⅱ）、齐墩果酸(oleanolic acid，ⅲ)、α-菠甾醇-β-d-葡萄糖苷(α-spinasterol-β-d-glucoside，ⅳ)、豆甾醇-β-d-葡萄糖苷(stigmasterol -β-d-glucoside，ⅴ)、胡萝卜苷(daucosterol，ⅵ)、山萘酚（kaemferol，ⅶ)、牡荆素-7-o-β-d-葡萄糖苷（vitexin-7-o-β-d-glucoside，ⅷ)、芦丁(rutin，ⅸ）。结论化合物ⅰ，ⅱ，ⅳ，ⅴ，ⅶ，ⅸ为首次从粟米草中分得，为进一步的活性筛选奠定了基础。
【关键词】 粟米草 化学成分 分离鉴定 波谱分析
abstract：objectiveto study the chemical constituents in mullugo pentaphylla l. methodsthe compounds of active fractions were isolated by column chromatography with silica gel and sephadex lh-20 column chromatography . their structures were identified on the basis of spectroscopic evidences and physiochemical properties.resultsnine compounds are isolated and identified as α-spinasterol（ⅰ)、5，25-stigmastadienol（ⅱ)、oleanolic acid（ⅲ)、α-spinasterol-β-d-glucoside（ⅳ)、stigmasterol -β-d-glucoside（ⅴ)、daucosterol（ⅵ)、kaemferol（ⅶ)、vitexin-7-o-β-d-glucoside（ⅷ)、rutin（ⅸ).conclusioncompound ⅰ、ⅱ、ⅳ、ⅴ、ⅶ、ⅸ were isolated from mullugo pentaphylla l.for the first time.
key words：mullugo pentaphylla l.; chemical constituents; extraction and identification; spectroscopic analysis
粟米草是番杏科粟米草属（mullugo）植物mullugo pentaphylla l.，主要分布在热带亚热带地区，在我国江西省及华南大部分地区均有分布。Www.11665.com粟米草是东南亚国家的传统草药，具有清热解毒、抗菌利湿的功效，主治腹痛泄泻、疮疖肿毒、风疹等症［1］。 现代 医学研究表明，粟米草具有抗心律失常、降压等药理作用 ［2～5］。但其抗心血管疾病的药效物质基础尚未确定。为了研究其有效成分,开发利用粟米草植物资源，我们对粟米草的乙醇提取物的化学成分进行了研究。本实验结合活性追踪的方法，对其有效部位的化学成分进行了系统研究。从中分离得到9个化合物,现报道如下。
1 材料与仪器
粟米草药材采挖自江西省九江市庐山周边,经九江学院基础医学院高春华教授鉴定为粟米草属（mullugo）植物粟米草mullugo pentaphylla l.。熔点用x-4显微熔点测定仪测定,温度计未校正; 质谱用vgzab-hs质谱仪测定；ir光谱用岛津ir-480型红外光谱仪测定。nmr用bruker drx-400核磁共振仪测定,ms用hp5973n msd型质谱仪。层析用硅胶为青岛海洋化工厂产品,sephadex lh-20 柱层析填料购于美国sigma公司。所用试剂均为分析纯。
2 方法
粟米草干燥全草3 kg，切成1～2 cm小段，用10倍量80%乙醇加热回流提取两次，2 h/次。合并提取液,减压回收溶剂,得乙醇提取物浸膏90.5 g。该醇提物悬浮于水中,以石油醚（60～90℃）、醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取, 回收有机溶剂，得各部位萃取物。
取石油醚部位萃取物15 g，硅胶柱层析，以石油醚-醋酸乙酯系统（20:1→1:1）梯度洗脱，得9个组分(fr.1-9)。fr.3组分经减压回收溶剂浓缩，有白色片状结晶析出，经重结晶纯化的化合物ⅰ（25mg）；fr.5 组分浓缩后，再次以石油醚-醋酸乙酯系统（10:1→ 1:1）梯度洗脱，得化合物ⅱ（12mg）。
取醋酸乙酯部位萃取物26 g，硅胶柱层析，以石油醚-醋酸乙酯系统（5:1 →0:1）梯度洗脱，得8个组分(fr.1-8)。fr.1 和fr.6组分经减压回收溶剂浓缩分别出现颗粒状沉淀，经sephadex lh-20 柱色谱，以甲醇洗脱，得化合物ⅶ（25 mg）、ⅲ（55 mg）。
取正丁醇萃取物30 g，硅胶柱层析，以氯仿-甲醇系统（100:1 →0:100）梯度洗脱，得6个组分。fr.2，fr.3分别经氯仿-甲醇系统（100:1 →0:100）再次洗脱，得白色沉淀，重结晶纯化得化合物ⅳ（22 mg）、ⅴ和ⅵ混合物（38 mg）；fr.4，fr.5分别经sephadex lh-20 柱色谱和phplc柱层析，以甲醇洗脱，得化合物ⅷ（25 mg），ⅸ（22 mg）。
3 结果
化合物ⅰ: 白色片状结晶（石油醚：醋酸乙酯 3：1）, mp153～154℃，硫酸显色呈绿色，与α-菠甾醇对照品薄层色谱rf值及显色行为一致。13c-nmr (100 mhz,cdcl3): 37.20 (c-1),38.06 (c-2),71.21 (c-3), 31.90 (c-4),40.51 (c-5),29.72 (c-6), 117.52 (c-7), 139.56 (c-8), 49.66 (c-9), 34.55 (c-10), 21.61 (c-11), 39.60 (c-12)，43.51 (c-13), 55.22(c-14), 23.12 (c-15), 28.51 (c-16), 55.99 (c-17), 12.15 (c-18), 13.21 (c-19)，40.87 (c-20), 21.25(c-21),138.36 (c-22), 129.50 (c-23), 51.36 (c-24), 31.90 (c-25), 21.41 (c-26)，19.10 (c-27), 25.39 (c-28), 12.32 (c-29)。以上波谱资料与 文献 ［6］报道一致，确认其为α-菠甾醇。
化合物ⅱ: 无色针晶（醋酸乙酯），mp136～138℃,硫酸显色呈绿色,molish反应阴性。13c-nmr (100 mhz,cdcl3): 36.6(c-1),31.3(c-2),71.2(c-3), 37.3(c-4),140.3(c-5),120.9(c-6), 33.7(c-7), 29.6(c-8), 49.8(c-9), 35.2(c-10), 29.7(c-11), 40.6(c-12)，43.3(c-13), 55.5(c-14), 23.9(c-15), 28.4(c-16), 55.9(c-17), 12.0(c-18), 21.2(c-19)，35.7(c-20), 19.7(c-21),33.8(c-22), 29.5(c-23), 49.8(c-24), 147.6(c-25), 19.2(c-26)，111.0(c-27), 26.5(c-28), 13.2(c-29)。查阅波谱资料显示与文献［7］报道一致，确认为5，25-豆甾二烯醇。
化合物ⅲ :白色粉末(甲醇), mp309～310℃,liebermann反应阳性，molish反应为阴性。esi-ms m/z(%):457［m+1］+。1h-nmr(cd3od)δ：0.86(3h,s，ch3), 0.87(3h,s，ch3),0.98(3h,s，ch3),0.96(3h,s，ch3),1.10(3h,s，ch3), 1.18(3h,s，ch3),0.90～2.10(24h，m),3.71 (1h,dd, j= 4.0,2.0 hz，h-3),5.36(1h,brs, h-12)。 13c-nmr (cd3od)δ:40.52(c-1),29.22(c-2), 84.66(c-3),40.26(c-4),69.36 (c-5), 19.12(c-6), 33.81(c-7),40.52(c-8),56.83 (c-9), 39.62(c-10), 24.82(c-11),123.62(c-12)，145.70 (c-13),43.66(c-14),29.02(c-15), 24.36 (c-16), 49.32(c-17),42.51(c-18),48.10(c-19)，31.22(c-20),34.13(c-21), 33.62 (c-22), 29.82(c-23),17.26(c-24),17.40(c-25), 17.56 (c-26)，26.26(c-27), 181.70 (c-28), 33.32(c-29)，23.32(c-30)。与对照品齐墩果酸薄层色谱rf值及显色行为一致, 1h-nmr (cd3od)δ与13c-nmr（cd3od )δ数据与 文献 报道［8］一致,鉴定化合物为齐墩果酸(oleanolic acid)。
化合物ⅳ : 无色片状结晶（醋酸乙酯）,化合物经酸水解得苷元与糖部分。与已知苷元α-菠甾醇及葡萄糖tlc对照rf值一致，显色行为相同。1h-nmr (400 mhz, c5d5n)δ: 0.58 (3h,s), 0.71 (3h,s), 0.98 (3h, d, j =6.5 hz ), 1.1 (3h, d, j＝6.5 hz), 4.0 (1h,ｍ), 4.41 (1h, dd, j = 11.7 hz, 5.3 hz), 4.58 (1h, dd, j = 11.7, 1.6 hz), 5.03 (1h, d, 7.9 hz), 5.05 (1h, dd, j = 15.1, 8.8 hz) 。以上波谱数据与文献［6］报道的一致，确认其为 α-菠甾醇-β-d-葡萄糖苷。
化合物ⅴ和ⅵ: 白色粉末(氯仿-甲醇) ,mp 269 ℃～ 274 ℃。从1h-nmr 谱上的烯氢比例可以分辨出该粉末为2 个化合物的混合物。将该混合物采用盐酸水解后，薄层色谱检出葡萄糖。其苷元的13cnmr 数据与文献［9，10］报道的β-谷甾醇和豆甾醇的混合物基本一致, 故该混合物鉴定为胡萝卜苷和豆甾醇-β-d-葡萄糖苷葡萄糖苷的混合物。
化合物 ⅶ : 黄色针晶（石油醚-醋酸乙酯）。盐酸-镁粉反应呈阳性。紫外光谱显示具有黄酮类化合物的特征峰。与山奈酚对照品共薄层为同一斑点，三种展开系统rf值一致。1h-nmr波谱数据与文献［11］报道一致，确认其为山萘酚。
化合物 ⅷ :黄色无定形粉末， 1h nmr (400mhz, cd3od) δ:7.83(2h, j=7.6hz, h-2′, 6′) , 6.73(1h,d, j=7.6hz, h-3′, 5′) , 6.65(1h, s,h-6 ) ,6.56(1h,br s,h-3) , 5.03(glc h-1″) .13c nmr (100mhz, cd3od) δ: 167.9 (c-2) , 100.8 (c-3) , 183.2(c-4 ) , 161.9( c-5) , 99.2(c-6) , 162.2(c-7) ,106.9(c-8) , 156.6(c-9) ,106.8(c-10) , 129.1(c-1′),130.2(c-2′,6′),119.8(c-3′,5′),161.7(c-4′), glc(c:1-6) :75.3,73.2,80.3,72.3,83.0,63.2,glc(c:1″-6″) : 102.3, 75.6, 77.8,71.3, 78.6, 62.5。以上波谱数据与文献［12］报道的一致，确认其为牡荆素-7-o-β-d-葡萄糖苷。
化合物ⅸ: 黄色粉末,mp195℃, esi-ms m/z(%):611［m+1］+。13c-nmr (dmso-d6)δ: 156.55（c-2）, 133.86（c-3）, 177.58（c-4）,161.24（c-5）, 98.88（c-6）, 164.23（c-7）, 93.89（c-8）,156.83（c-9）, 103.98（c-10）,121.58（c-1′）, 115.62（c-2′）, 144.78（c-3′）, 148.92（c-4′）, 116.23（c-5′），121.03（c-6′）；葡萄糖信号: 104.21(c-1″), 74.56(c-2″),76.88(c-3″),69.89(c-4″),76.32(c-5″)，67.82(c-6″)，鼠李糖信号：101.21(c-1″), 70.56(c-2″),70.96(c-3″),71.23(c-4″),68.92(c-5″)，17.96(c-6″)。 以上数据与文献报道［11］一致,鉴定为芦丁(rutin)。
4 讨论
从粟米草石油醚醋酸乙酯及正丁醇萃取部位分离得到9个化合物,经理化与波谱分析,分别鉴定为: α-菠甾醇（α-spinasterol,ⅰ）、5，25-豆甾二烯醇（5，25-stigmastadienol， ⅱ）、齐墩果酸(oleanolic acid，ⅲ)、α-菠甾醇-β-d-葡萄糖苷(α-spinasterol-β-d-glucoside，ⅳ)、豆甾醇-β-d-葡萄糖苷(stigmasterol -β-d-glucoside，ⅴ)、胡萝卜苷(daucosterol，ⅵ)、山萘酚（kaemferol，ⅶ)、牡荆素-7-o-β-d-葡萄糖苷（vitexin-7-o-β-d-glucoside，ⅷ)、芦丁(rutin，ⅸ）。化合物ⅰ、ⅱ、ⅳ、ⅴ、ⅶ、ⅸ为首次从粟米草中分得。通过以上的研究，发现粟米草含有较丰富的黄酮类和甾体类化学成分, 这可能作为粟米草抗心血管疾病的药效物质基础，下一步工作将对分得的成分进行药理活性筛选。
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