作者：买买提·吐尔逊， 司马义·巴拉提
【摘要】 目的测定新疆5个品种甘草中甘草苷的含量。方法反相高效液相色谱法。色谱条件：kromasil c18柱(5 μm， 250 mm × 4.6 mm i.d.);流动相为乙腈 - 0.5%冰醋酸(25∶75,v/v);检测波长276 nm。结果测定方法在2.0 ～ 60 μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.999 6)，平均回收率为98.4% (rsd=0.82%,n= 3)。甘草中甘草苷的含量与品种有较大的关系，其中乌拉尔甘草中甘草苷的含量最高，含量为 3.14%，其次为光果甘草，含量为 2.01%，而胀果甘草中甘草苷的含量最低，仅为 0.96%。结论实验为进一步开发利用新疆丰富的甘草资源提供了参考依据。
【关键词】 反相高效液相色谱法; 甘草; 甘草苷
新疆甘草glycyrrhiza uralensis fisch.是豆科(legumionosae)甘草属glycyrrhiza植物，维吾尔等少数民族称甘草为“曲曲布亚”(ququkbuya)。Www.11665.cOm该属植物性平,味甘,具有补脾益气、止咳祛痰、清热解毒、缓急定痛、调和药性等功能,用于脾胃虚弱,中气不足,咳嗽气喘,腹中挛急作痛,缓和药物烈性和解药毒等[1,2]。新疆甘草在天山南北都有分布，主要以喀什、阿克苏、巴州等地比较集中，产量居全国之最。新疆甘草有5个品种，分别为胀果甘草、黄甘草、光果甘草、乌拉尔甘草和粗毛甘草等。国内外学者已对甘草属植物进行了化学成分研究,主要的化学成分为黄酮类和三萜化合物,还有少量的生物碱、木质素和香豆素等。近年来, 屡见报道用高效液相色谱法测定甘草中甘草苷的含量[3，4], 但测定上述5 个品种药材中甘草苷含量的报道则少见。本文采用等度洗脱反相高效液相色谱法测定了5个品种甘草中甘草苷的含量并进行了比较,为新疆甘草的鉴定及综合开发提供参考依据。
1 仪器与试剂
岛津lc-20a高效液相色谱仪(配有spd -20a 检测器, lcsolution 工作站);uv-240 紫外可见分光光度计(日本岛津);kq-100 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);hl-22 型多功能粉碎机(上海海菱电器有限公司);赛多利斯 bs224s 型电子天平(德国)。
甘草苷对照品(编号:111610，中国药品生物制品检定所);甲醇、乙腈为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。
胀果甘草、黄甘草、光果甘草，2007年采自喀什、阿克苏、库尔勒等地，乌拉尔甘草和粗毛甘草，200802采购于新疆维吾尔医院，均为野生甘草根茎，并经本课题组鉴定。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为kromasil c18 柱(5 μm，250 mm × 4.6 mm i.d.);流动相为乙腈 - 0.5%冰醋酸(25∶75,v/v);流速1.0 ml/min;检测波长276 nm;柱温30℃;进样量10 μl。理论板数按甘草苷峰计达4 000以上。
2.2 对照品溶液的配制准确称取甘草苷对照品10.0 mg置于50 ml容量瓶中，加色谱纯甲醇使其溶解并定容至刻度，摇匀，得200 μg/ml甘草苷对照品标准储备溶液。使用时根据需要稀释至所需浓度。
2.3 样品溶液的制备准确称取甘草粉末 (过60目筛) 0.2 g，置于50 ml量瓶中，加70%乙醇35 ml。浸泡 2 h 后，超声提取30 min，放置室温，用70%乙醇定容至刻度。精密移取上述溶液2 ml置10 ml量瓶中,加20%乙腈稀释到刻度，摇匀，过滤(0.45 μm)。
2.4 样品提取方法的选择本实验过程考察了甲醇热回流索氏提取法和70%乙醇超声波提取法。结果表明，用70%乙醇浸泡2h后，超声提取30 min的方法，对甘草苷的提取率最高，而且超声波提取法和传统的回流提取法相比，具有操作简便、提取率高等优点。比较了不同浸泡时间(1,2,3,4 h)和提取时间(10，20，30，40，50 min)对提取效率的影响，结果表明浸泡2 h，超声提取30 min 已基本将甘草中的甘草苷提尽，故选择浸泡2 h,超声30 min作为提取时间。
2.5 色谱条件的确定
2.5.1 检测波长的确定以甲醇为参比，将甘草苷对照品标准溶液在紫外分光光度计上于200～350 nm 波长下进行光谱扫描，发现甘草苷在276 nm 波长附近具有最大吸收。确定276 nm 作为甘草苷的检测波长。
2.5.2 流动相的选择在参考有关文献的基础上[5]，比较了不同比例的乙腈-醋酸溶液。当乙腈 - 0.5%冰醋酸(25∶75,v/v)，流速为1.0 ml/min 时体系能使样品中的甘草苷与其它物质得到基线分离。因此确定流动相为乙腈 - 0.5%冰醋酸(25∶75,v/v)。
2.6 标准曲线及精密度实验将200 μg/ml甘草苷标准溶液用色谱纯甲醇配制成浓度为 2.0，8.0，16，32，60 μg/ml 的甘草苷系列标准溶液，分别吸取标准系列溶液10 μl，按上述色谱条件测定峰面积。由 origin 6.1，以峰面积a对质量浓度 ρ (μg/ml)进行回归。回归方程为:y = 16 133.7 x + 17 011.8，相关系数r=0.999 6。说明甘草苷在2.0～60 μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系。
对上述标准系列中浓度为8 μg/ml 的溶液进行了 5 次重复测定，进样量为10 μl/次，结果rsd为1.2%。
2.7 样品测定准确称取不同品种甘草样品各3份，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件进行测定，计算样品中甘草苷的含量。测定结果见表1。表1 不同品种甘草中甘草苷的测定结果
2.8 稳定性实验取乌拉尔甘草试品溶液,在12 h内每隔2 h进样1次，以峰面积计算rsd为1.27%,表明样品溶液在12 h 内基本稳定。
2.9 回收率实验为了考察方法的可靠性，作了加标回收率实验，准确称取0.2 g左右黄甘草样品3份，分别添加不同量的甘草苷对照品，按照“2.3”项下方法制备加标样品溶液，按规定的色谱条件进行测定，测定结果显示，方法的平均回收率为98.4%,rsd=0.82%。结果表明此测定方法具有较好的准确度。
3 讨论
甘草苷是甘草中主要活性成分,本文用反相高效液相色谱法对新疆不同品种甘草中甘草苷的含量进行了测定, 并对样品中甘草苷的提取方法及色谱条件进行了研究。甘草苷含量的高低可以判断甘草药材质量的优劣。上述研究结果表明,甘草中甘草苷的含量与品种及其生长环境有较大关系，其中乌拉尔甘草中甘草苷的含量最高，其次为光果甘草，胀果甘草中甘草苷的含量最低。测定方法操作简便、分析快捷、结果重复性好。此实验结果为进一步开发利用新疆丰富的甘草资源提供了有益的参考依据。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中国药典，ⅰ部[s].北京：化学工业出版社，2005:59.
[2] 刘勇民. 维吾尔药志，上册[m].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999:167.
[3] 付玉杰,祖元刚,赵春建，等.rp-hplc法测定甘草中甘草苷和异甘草苷的含量[j].中草药,2004,35(5): 576.
[4] 闫永红,王文全,杨 娜.hplc测定栽培甘草中甘草苷的含量[j].中国中药杂志,2006,31(11):926.
[5] 伍蔚萍,阎宏涛,孙文基.hplc法测定甘草中甘草苷的含量[j].药物分析杂志,2004,24(4): 425.
