【摘要】 目的 观察大剂量多西他塞联合粒细胞集落刺激因子（gcsf）在恶性实体瘤患者动员采集自体外周血造血干/祖细胞的有效性和安全性。方法 30例恶性实体瘤患者入组，第一天采用多西他塞120mg/m2经静脉持续滴注3小时，在白细胞1.0×109/l左右时每天给予gcsf 5μg/kg, 分早晚两次皮下注射，直至采集结束。结果 在给予多西他塞后平均第(6.47±1.01)天白细胞降至1.0×109/l，皮下注射gcsf平均(3.50±1.01)天即多西他塞动员后平均第(9.97±1.03)天开始外周血造血干/组细胞单采，每人每天采集一次，采集两天，共获cd34+细胞中位数3.49×106/kg（1.71×106～16.69×106/kg），其中cd34+细胞>2.0×106/kg的患者25例。不同采集时间获cd34+细胞数差异无统计学意义（p=0.651）。6例发生关节轻度疼痛，3例轻度腹泻，1例口腔粘膜炎。结论 多西他塞120mg/m2联合gcsf 5μg/kg是恶性实体瘤患者动员采集自体干/祖细胞的有效安全方案。
【关键词】 恶性实体瘤 多西他塞 gcsf 外周血造血干 祖细胞
自体外周血造血干细胞移植支持下的大剂量化疗可用于多种恶性实体的治疗。大剂量化疗联合造血生长因子的动员方式可获得造血细胞产率比非动员时的产率平均高10～30倍，扩增幅度与大剂量化疗后骨髓抑制程度有关［1，2］。WWW.11665.COm多西他塞是对乳腺癌等多种实体瘤非常有效的细胞毒药物。我们采用大剂量多西他塞联合gcsf的方案用于恶性实体瘤患者动员外周血造血干细胞，获得满意效果。
1 资料和方法
1.1 研究对象
2004年6月～2006年5月，30例有明确组织学和细胞学诊断的恶性实体瘤患者，将要接受干细胞支持下的两周期大剂量化疗，包括乳腺癌18例、肺癌5例、软组织肉瘤2例、恶性黑色素瘤2例、其他恶性实体瘤3例；男9例，女21例；平均年龄48.6岁（23～70岁）。除1例早期术后辅助治疗，其余29例均为晚期肿瘤。30例患者在外周血造血干细胞动员前共接受化疗0～6个疗程，平均4个疗程。有6例曾接受过局部放疗，其中头颅1例，胸椎2例, 腰椎3例。所有动员患者心、肝、肾等功能基本正常，ecog≤2，预计生存期大于3个月，中性粒细胞绝对数（anc）>1.5×109/l，血小板>100×109/l，骨髓增生良好，所有患者全部签署知情同意书。
1.2 动员方案
第一天给予多西他塞120mg/m2（多西他塞：泰索蒂，塞诺菲安万特；多西他塞：多帕菲：齐鲁制药）持续静脉滴注3h。滴注前给予预防性止吐药物，滴注前一天给予地塞米松7.5毫克，每12h 1次,共6次3天。监测血象变化，约wbc在1.0×109/l时即多西他塞滴注后5～7天左右时，给予gcsf5mg/kg（gcsf：格拉诺塞特，中外制药）每天分两次皮下注射，直至采集结束。
1.3 造血干细胞的采集与冻存
大剂量多西他塞滴注后第9天（8～13天），wbc＞10×109/l 时，于患者股静脉处置管，用cs300plus血细胞分离机（baxter公司）采集，得到去除了红细胞的单个核细胞。每次采集循环量12l，每天采集1次，一般采集2次。用终浓度为3%羟乙基淀粉，4%人血白蛋白，5%dmso的冷冻保护剂，-80℃低温冰箱直接冷冻保存采集到的造血干细胞[3]。
1.4 cd34阳性细胞检测
常规检测采集物单核细胞数（mnc）。cd34+细胞检测采用标准化ishage方案。调整细胞数至（0.5～1）×106/ml，分两管：cd34pe/cd45pc5及阴性对照ig1pe/ig1pc5标记抗体（单抗均为法国immunotech公司产品），流式细胞仪分析测定cd34+细胞百分比。cd34+细胞百分比与采集物白细胞总数乘积即为采集物cd34+细胞总数。本研究拟采用减低剂量的大剂量化疗，故以两次采集获cd34+细胞总数≥2.0×106/kg为成功。
1.5 临床观察指标
多西他塞滴注过程中24小时心电监护，监测血压、脉搏、呼吸、体温。静脉滴注后观察骨痛、腹泻、口腔粘膜炎、水肿等不良反应，血常规及肝肾功能等。
1.6 统计学方法
数据采用±s或中位数表示，不同病种和不同采集时间获cd34+细胞数比较采用秩和检验。对采集当天外周血淋巴及单核细胞比例及绝对值与采集的cd34+细胞数进行相关分析及检验。
2 结果
2.1 动员结果
所有接受多西他塞动员的患者全部进行了采集，共进行60次采集，每例患者采集2次。动员后平均第(6.47±1.01)天wbc降至1.0×109/l，应用gcsf后平均第(3.50±1.01)天即多西他塞动员后第(9.97±1.03)天开始采集，2次共获cd34+细胞中位数3.49×106/kg（1.71×106～16.69×106/kg）。其中cd34+细胞>2.0×106/kg的患者25例，cd34+细胞<2.0×106/kg的患者5例,见表1。所有患者中2例接受过放疗，1例接受6个周期化疗。14例患者单次采集获得cd34+细胞>2.0×106/kg，其中11例>3.0×106/kg。采集时间集中在动员后第9、10、11、12天,见表2。乳癌与肺癌等其他肿瘤之间采集的cd34+细胞数差异无统计学意义（p=0.928），不同时间采集cd34+细胞数差异无统计学意义（p=0.651）。采集当天外周血淋巴及单核细胞比例及绝对值与采集的cd34+细胞数亦未见明显相关性（p=0.251，p=0.164）。表1 30例患者采集结果表2 不同动员时间采集cd34+细胞(×106/kg)
2.2 不良反应
所有患者均能耐受动员采集全过程，不良反应较轻。6例发生关节轻度疼痛，3例轻度腹泻，1例口腔粘膜炎，经对症处理后均缓解。无粒细胞缺乏性发热和需血小板输注者。所有患者心肝肾等功能无损害。
3 讨论
晚期实体瘤采用干细胞支持下的大剂量化疗研究首先要采集到足够干细胞，而动员方案的选择既要考虑到动员效果又要在一定程度上控制肿瘤的生长，多西他塞是晚期乳腺癌、晚期肺癌等实体瘤标准二线治疗药物［4，5］，我们在参照国外学者的研究基础上采用了大剂量多西他塞联合gcsf作为动员方案［610］，比较其动员疗效及安全性。
本研究结果显示动员后83%（25/30）的患者获得cd34+细胞总数≥2.0×106/kg，其中47%（14/30）的患者经单次采集即获得cd34+细胞总数≥2.0×106/kg；但有5例患者两次采集cd34+细胞总数<2.0×106/kg。我们的体会：多次化疗及放疗的晚期患者由于骨髓功能受到一定的影响，采集数量会受到影响，应适当调整动员方案以获得足够的cd34+细胞。在乳癌及肺癌等不同病种所采集的cd34+细胞总数无差别。我们试图通过检测采集当天外周血淋巴单核细胞比例及绝对值来预测采集效果，但未看到它们之间的相关性，检测外周血cd34+细胞可能对采集结果有预测价值。同时对于骨髓功能受长期化、放疗影响，不能耐受进一步常规剂量化疗，通过此方法采集一定数量的干细胞作为下一步治疗的支持，本研究也有一定的临床实际意义。本研究结果与prince等[6]的结果相近，由于prince拟进行三个周期大剂量化疗研究，故要求获cd34+细胞总数要高。但本研究设计增加了多西他塞的剂量而减低了gcsf的剂量，这样即增强了抗肿瘤效果，又减少了医疗支出，同样取得了很好的动员效果。采集时间上集中在动员后第9～11天（中位第10天），但不同采集时间获得的cd34+细胞总数无差别，结果与prince动员后采集时间推迟1～2天。
总之，对晚期恶性实体瘤，尤其是晚期乳腺癌，采用大剂量多西他塞联合gcsf方案动员自体外周血造血干/祖细胞是有效和安全的。
