【摘要】 目的 探讨细胞周期蛋白d1(cyclin d1)和抑癌基因pten在胃黏膜癌变多阶段中的表达及其相关性。方法 应用免疫组织化学染色sp法检测cyclin d1和pten在不同胃黏膜病变石蜡包埋标本的表达并进行相关性分析。结果 在慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生和胃癌中cyclin d1的表达率逐渐增高，pten的表达率逐渐降低，且差异有统计学意义(p<0.05);cyclin d1和pten在胃黏膜癌变多阶段中的阳性表达率呈负相关。结论 cyclin d1、pten在胃癌的发生、发展中起协同作用，对其进行联合检测有助于胃癌的早期诊断。
【关键词】 胃癌;胃癌前病变;cyclind1;pten;相关性
胃癌(gc)是我国高发的恶性肿瘤之一，近年研究发现其形成是一个多因素、多阶段、多基因作用的复杂过程〔1,2〕。在各种致病因素作用下，胃黏膜在经历慢性浅表性胃炎(csg)、萎缩性胃炎(cag)、肠上皮化生(im)、不典型增生(atp)及gc的一系列贯序性形态学变化过程中，细胞趋向更为恶性的生物学行为。细胞周期调控基因在其发生发展过程中起着一定的作用，他们的表达失衡是导致胃癌发生的机制之一，故本研究采用免疫组化法探讨细胞周期蛋白d1(cyclin d1)和抑癌基因(pten)在胃黏膜癌变多阶段中的表达及相关性，为研究胃癌发生机制及胃癌的早期诊断提供实验室依据。Www.11665.cOM
1 材料与方法
1.1 研究对象 选择河北医科大学中医院临床病理科保存的2004至2008年胃窦部病理活检组织存档蜡块，共223例，其中csg 35例，cag(无im)44例，cag(伴im)49例，atg 45例，gc 50例。其中男108例，女116例。平均(58.6±12.3)岁。其中gc组织标本均未经放射治疗和(或)化学治疗。所用组织标本患者均签署知情同意书。
1.2 试剂与方法 鼠抗人单克隆抗体cyclin d1，鼠抗人单克隆抗体pten及免疫组化sp广谱超敏试剂盒(即用型)、dab显色剂等均购自福州迈新生物技术开发公司。石蜡切片常规脱蜡、水化，进行水浴抗原修复，继以免疫组化试剂盒进行检测。操作步骤按说明书进行。以阳性片及pb代替一抗，设阳性及阴性对照。
1.3 免疫组化结果判定 cyclin d1、pten阳性染色主要定位于细胞质中，为深浅不一的棕黄色颗粒，偶可见于细胞膜和(或)细胞核。每张切片由两位观察者随机选择5个有代表性的10×40高倍视野，计数网格自测微尺内阳性细胞数占视野总细胞数的百分比，并按阳性细胞数的百分比对各蛋白阳性表达的程度予以分级。阳性细胞<5%为阴性();5%～25%为弱阳性(+);25%～50%为阳性();>50%为强阳性()。
1.4 统计学方法 采用线性趋势χ2检验进行各组间率的比较，应用pearson四格表χ2检验进行相关样本的关联性分析。所有数据均利用spss13.0统计学软件处理。
2 结 果
2.1 cyclin d1蛋白、pten蛋白在胃黏膜各病变中的表达 随着胃黏膜癌变的阶段性进展，cyclin d1蛋白表达的阳性率越来越大，pten蛋白表达的阳性率越来越小(均p<0.001)，见表1。表1 cyclin d1、pten在胃黏膜各期病变的表达
2.2 cyclin d1与pten表达的相关性 经相关样本的关联性检验(χ2=189.233，p<0.001)，列联系数c=0.678，可以认为二者有关联性，密切程度中等。
3 讨 论
胃癌的发生是一个多阶段、多步骤、逐渐演变的过程。在各种致癌因子作用下，胃黏膜先发生癌前病变，一部分癌前病变可发展成早期胃癌，最后形成进展期胃癌。在这一癌变过程中往往涉及到多种癌基因的激活和抑癌基因的失活。原癌基因cyclin d1合成于g1早期，是细胞增殖g1～s期的重要控件。其调控机制主要是通过对rb蛋白的灭活而释放e2f，以启动s期相关基因的转录，使其渡过g1→s调控点进入s期〔3〕。研究发现，cyclin d1基因及其表达的异常在许多肿瘤细胞中存在〔4～6〕。wang等〔7〕研究发现，cyclin d1的表达在人食管基底细胞高度增生与非典型性增生间未见差异，从非典型性增生发展到鳞状细胞癌可见轻微增高。本实验结果提示cyclin d1过度表达可能是关键性控件之一，是肿瘤形成的早期分子事件。cyclin d1蛋白的检测可能对于胃癌前病变及早期胃癌的诊断有参考价值。
抑癌基因pten编码的蛋白具有双特异性磷酸酶活性，能使磷酸肌醇三磷酸(pip3)去磷酸化而抑制pi3k/akt (pakt)信号传导途径，在调控细胞生长及维持细胞的增殖、分化和凋亡平衡中起重要作用〔8〕。pten在胃癌发生发展不同阶段的表达呈递减趋势，李异玲等〔9〕的研究提示pten蛋白表达水平可作为判定胃癌病理生物学行为的客观指标。本研究发现pten蛋白的表达随病理级别增加呈递减趋势。总之，pten作为一种具有磷酸酶活性的抑癌基因，在胃癌早期发生过程中发挥着重要的作用。
cyclin d1和pten均为重要的细胞周期调控因子。研究表明〔10〕cyclin d1在胃黏膜癌变多阶段中高表达，pten在胃黏膜癌变多阶段中低表达，但两者之间是否存在联系却未有研究报道。本研究表明cyclin d1和pten在胃黏膜癌变多阶段中表达呈负相关。pten失表达与cyclin d1的高表达在胃癌的发生发展过程中可能具有协同作用，使肿瘤生长获得更大的生长趋势。故此联合检测cyclin d1和pten比检测单一指标更有价值，能为临床检测和诊断胃癌及胃癌前期病变提供更多生物学信息，但他们之间具体相互作用机制有待深入研究。
【参考文献】
1 yin gy，zhang wn，shen xj，et al.ultrastructure and molecular biological changes of chronic gastritis，gastric and gastric precancerous lesions:a comparative study〔j〕.world j gastroenterol，2003;5(4):8517.
2 yasa mh，bektas a，yukselen v，et al.dna analysis and dna ploidy in gastric cancer and gastric precancerous lesions〔j〕.int j clin pract，2005;59(9):102933.
3 sugimoto m，martin n，wilks d，et al.activation of cyclind1kinase in murine fibroblasts lacking both p21(cip1) and p27(kip1)〔j〕. oncogene，2002;21(53):806774.
4 wang x，zou s.the relationship of cyclin d1 and estrogen receptor expression in the process of proliferation and metastasis in breast neoplasm〔j〕.j tongji med univ，2001;21(3):2312.
5 gugger m，kappeler a，vonlanthen s，et al.alterations of cell cycle regulators are less frequent in advanced nonsmall cell lung cancer than in resectable tumours 〔j〕.lung cancer，2001
