【摘要】  目的  研究超声引导下穿刺活检组织中tslcl表达对肝癌预后判断的价值。方法 36例经超声引导下穿刺所得的肝癌组织经免疫组化方法检测tslcl蛋白表达水平，并与临床病理学参数做统计学分析。结果 肝穿组tslcl阳性表达率为25.0%(9/36)，明显低于癌旁组织（62.5%，5/8）(p<o.05)，其缺失表达与临床分期及afp水平密切相关(p均<o.05)。结论 超声引导下肝肿物穿刺活检并检测肿瘤组织中tslcl蛋白的表达水平对肝癌预后判断具有一定的价值。
【关键词】  肝癌  超声引导下肝癌穿刺术  tslcl  免疫组化
        超声引导下穿刺活检技术是一种微创、快速、安全的方法，它不但可以明确病灶的位置、大小、回声、毗邻关系，而且获取的组织标本满意率和病理阳性率高、并发症少，目前被公认为非手术条件下获取病理组织学诊断的最佳方法[1]。但是目前肝癌活检穿刺（以下简称肝穿）组织中癌相关基因表达的相关报导很少。本研究应用免疫组化法对经病理证实为hcc的肝穿癌组织中tslcl蛋白表达水平与相应的临床病理资料比较，探讨超声引导下肝肿物穿刺活检术在hcc预后判断方面的意义。
        1  材料与方法
        1.1 临床标本
        2004年1月至2011年3月辽宁地区超声引导下行肝脏肿瘤穿刺活检组织经病理证实为hcc 36例病人中，男22例，女14例，年龄22-75岁，平均50．4岁全部患者均为单发。www.11665.Com穿刺均前行超声及相关化验检查，均无肝外转移灶及其他脏器肿瘤，且穿刺前均未接受任何抗癌治疗。
        另取8例行手术切除的肝癌旁组织做对照。
        1.2 方法
        1.2.1 超声引导下肝肿物穿刺术：采用5.0mhz穿刺探头，超声体表定位后，严格无菌操作，2％利多卡因局部麻醉，在穿刺探头引导下，用18g×20cm穿刺针在待激发状态下，沿引导线穿刺进入肝肿瘤血流较丰富处，上活检栓，完成切割组织动作后，迅速拔针。每例患者穿3～5次，并多点取材，以提高阳性率，降低假阴性率。穿刺完毕后，在穿刺点处消毒并包扎。
        1.2.2 免疫组织化学染色：常规石蜡病理切片4μm，脱蜡、水化，用高温高压进行抗原修复，pbs漂洗2min，置入30ml/l h2o2 10min，pbs漂洗5min，共3次，正常血清37℃孵育15min，加入一抗(抗tslcl多克隆抗体，santa cruz产品，1：150稀释；空白对照中以pbs代替一抗)4℃冰箱孵育过夜，用pbs漂洗5min，共3次，加入二抗（生物素标记抗igg抗体及辣根过氧化物酶标记抗igg抗体，福建迈新生物技术开发有限公司）37℃孵育60min, pbs漂洗5min，共3次，dab显色，苏木精复染细胞核，中性树胶封片。结果判断：每张切片选取3个具有代表性的高倍视野，每个视野最少200个细胞。细胞核着色为淡黄色、棕黄色及黄褐色者判断为阳性着色细胞,镜下观察细胞浆出现棕黄色颗粒的肿瘤细胞数>10%为阳性。
        1.2.3 统计方法：结果用spss11.0进行统计分析, p<0.05有统计学意义。
        2  结果
        在肝癌组织切片中，tslcl蛋白阳性着色定位于细胞浆。肝穿组织中tslcl蛋白阳性表达率为25.0%(9/36)，对照组中阳性表达率为62.5%（5/8），两组比较有统计学意义（p<0.05）肝穿组织中tslcl的表达缺失与临床分期、afp水平密切相关(p均<0.05)，与年龄、性别、组织分级、有无转移、肝硬化、肿块大小和hbag无相关性(p值均>0.05)（表）。
        表   tslcl蛋白在肝穿组与主要临床病理参数比较 
         

       3  讨论
        tslc1 (tumor suppressor in lung cancer 1)是一种肺癌的抑癌基因，它能较强地抑制非小细胞肺癌细胞株的生长[2]。目前已发现其在肺癌、乳腺癌、宫颈癌等多种肿瘤组织［3-5］，但在肝脏肿瘤中表达情况的报道尚少。tslcl的生物学功能主要体现在抑制肿瘤生长和细胞粘附等方面[6]。
        肝癌的发生发展是一个复杂的、多步骤、多因素参与的过程，肿块较大、分化程度低、afp升高、临床分期高、门脉癌栓形成及远处转移等因素均是肝癌预后不良的表现[7]。张文军等[7]对tslclmrna表达分别做半定量分析及rt-pcr的结果显示, tslcl基因在单病灶和无血管癌栓的肝癌或有完整包膜肝癌中的表达明显高于有多发病灶和血管癌栓的肝癌或无完整包膜肝癌；而在不同大小、不同分化程度的原发性肝癌中，tslcl基因的表达差异无统计学意义。本组数据显示，tslcl在肝穿癌组织中的表达明显低于癌旁组织（p<0.05），且临床分期越高，缺失表达率越高(p<0.05)，afp正常的肝癌组织中表达率明显高于afp水平升高的病例（p<0.05），可以证实tslcl对于肝癌预后有一定的标志作用。
        近年来超声引导下的穿刺活检技术已经发展成熟，通过活检得到明确的病理诊断后，可以对小肝癌和失去手术机会的晚期肝癌采用非手术治疗的综合治疗方法，既减轻了患者的痛苦，又避免了手术对患者身体的损伤，但仅凭超声检查对其往往不能进行预后判断及指导基因靶向治疗[8]。我们在病理学确诊的基础上，通过检测肝癌穿刺组织中tslcl蛋白的表达情况发现，tslcl蛋白在穿刺癌组织中的表达率为25.0%，与以往的研究[7]中tslcl蛋白在术后肝癌标本中的表达率30．0％基本相近，因此我们认为超声引导下进行肝穿刺活检检测hcc组织中与hcc发生发展相关的tslcl表达水平，可以对hcc的预后作出一定的判断，为早日采取针对性的治疗，尤其是对失去手术机会的hcc患者有一定的临床指导意义。
参 考 文 献
[1]王艳苓,张红红,王秀燕.超声引导下经皮肝脏穿刺活检的临床价值[j].实用肝脏病杂志,2009,12(1):52-54.
[2]heller g, fong km, girard l, et al. expression and methylation pattern of tslc1 cascade genes in lung carcinomas[j]. oncogene, 2006,25(6):959-968.
[3]steenbergen rd, kramer d, braakhuis bj,et al. tslc1 gene silencing in cervical cancer cell lines and cervical neoplasia[j]. j natl cancer inst, 2004,96(4):294-305.
[4]heller g, geradts j, ziegler b, et al. downregulation of tslc1 and dal 1 expression occurs frequently in breast cancer[j]. breast cancer res treat, 2007,103(3):283-291.
[5]杨爱宏，杨永秀.宫颈癌组织中tslc1基因表达的意义[j]. 第四军医大学学报,2006, 26(6):529.
[6]杨爱宏，孙琪，杨永秀.tslc 1的研究进展[j].现代肿瘤医学,2009,17(9):1788-1791.
[7]张水军,李文涛,周闯等.抑癌基因tslc 1在肝癌组织中的表达及临床意义[j].中华实验外科杂志,2007,24(2):185-186.
[8]吴荣秀,陈庆来,吴春华,等.原发性小肝癌的超声诊断研究[j].中国超声医学杂志,2006,22(4):290-293