作者：张玲,刘振丽,宋志前,王淳,李林福,王跃生 

【摘要】  目的 考察枳实配方颗粒质量。方法 选用3个批次枳实饮片制备配方颗粒与汤剂。采用zobax extend c18色谱柱,乙腈-水-磷酸-十二烷基硫酸钠(12∶87∶1∶0.2)为流动相,检测波长为275 nm。结果 枳实配方颗粒与相应饮片和汤剂hplc图谱出峰数量、峰位无差异；配方颗粒与汤剂相应峰的相对峰面积无明显区别,但与饮片有一定差异。结论 hplc图谱显示枳实配方颗粒与汤剂具有高度的相似性。

【关键词】  枳实；配方颗粒；高效液相色谱法

    abstract：objective  to inspect the quality of fructus aurantii immaturus formula granule. methods choose three batch fructus aurantii immaturus to prepare formula granule and decoction. zobax extend c18 column was used with acetonitrile-water-phosphoric acid-sodium lauryl sulphate (12∶87∶1∶0.2) as the mobile phase, the detection wavelength was 275 nm. result there were no differences in elution peak quantity and peak position in the hplc spectrum of fructus aurantii immaturus formula granule with corresponding cut crude drug and decoction. the relative peak area in the corresponding peak of formula granule had no significant difference with decoction, but had certain differences with cut crude drug. conclusion hplc spectrum showed that fructus aurantii immaturus formula granule and decoction had high similarity.

　　key words：fructus aurantii immaturus；formula granule；hplc
 　　
　　枳实为常用理气药,具有破气消积、化痰散痞的功效[1],主要含有挥发油、黄酮类和生物碱类化学成分[2]。wwW.11665.coM枳实配方颗粒为枳实饮片经水煎提取后,用喷雾干燥等技术制成的单剂量颗粒剂型,目前允许等同枳实饮片作为汤剂配方使用。为对枳实配方颗粒质量进行综合考察,本实验对3个批次枳实饮片及由其制备的相应配方颗粒和汤剂的hplc图谱进行了对比分析。

　　1  实验材料

　　高效液相色谱仪：hp1100,g1322a脱气机,g1311a四元泵,g1316a恒温箱,g1315b dad检测器,g1313a自动进样器,hp化学工作站。枳实配方颗粒3批,分别由江西、四川、湖南饮片厂提供。相应饮片制备的汤剂在实验室按临床常规用药方法制备。辛弗林对照品(批号0727-200105,含量测定用)购自中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯,水为重蒸水,其它试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

    zobax extend c18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相：乙腈-水-磷酸-十二烷基硫酸钠(12∶87∶1∶0.2)；流速：1.2 ml/min；
检测波长275 nm；柱温30 ℃。

　　2.2  对照品峰的确认

    取辛弗林对照品,用甲醇配制成每1 ml 含0.4 mg的对照品溶液,在上述色谱条件下,精密吸取5 μl注入液相色谱仪,确定色谱峰峰位。

　　2.3  供试品溶液的制备

　　2.3.1  配方颗粒供试品溶液的制备
 
　　取枳实配方颗粒粉末0.2 g(过4号筛),精密称定,置锥形瓶中,加入甲醇25 ml,加热回流1.0 h,放冷,滤过,蒸干,残渣加水5 ml使溶解,通过聚酰胺柱(60～90目,3 g,内径1.5 cm,干法装柱),用水25 ml洗脱,收集洗脱液,转移至25 ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。

　　2.3.2  汤剂供试品溶液的制备 

　　精密吸取相当于1 g枳实的汤剂,置锥形瓶中,收干。其余操作同“2.3.1”项。

　　2.3.3  饮片供试品溶液的制备 

　　取枳实饮片粉末1.0 g(过4号筛),其余操作同“2.3.1”项。

　　2.4  精密度试验

    精密吸取同一配方颗粒制备的供试品溶液,连续进样5次,结果色谱峰相对保留时间比值的rsd为0.84%～3.08%,相对峰面积比值的rsd为1.50%～3.20%。

　　2.5  稳定性试验

    精密吸取同一配方颗粒制备的供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、24 h进样,各共有特征峰相对保留时间比值的rsd为0.51%～3.02%,相对峰面积比值的rsd为0.74%～3.12%。

　　2.6  重复性试验
   
　　取同一配方颗粒粉末(过4号筛)0.2 g,5份,按供试品溶液处理,各共有色谱峰相对保留时间的rsd为0.47%～2.51%,相对峰面积的rsd为0.63%～2.28%。

　　2.7  供试品hplc图谱的测定
   
　　取3个批次枳实饮片、相应配方颗粒和汤剂,按供试品溶液制备方法操作,精密吸取20 μl进样测定,得到各样品hplc图谱。以样品hplc图谱中辛弗林峰为参照峰(α=1,s峰),求出各样品中均存在的色谱峰的相对保留时间值和相对峰面积值。由于保留时间受实验因素的影响,参考文献[1]方法,对每个峰位的α值根据统计学的处理设定窗口5%,即α值取可信限在≤5%的范围内。按α值的大小次序排列,并计算每个α值项下该峰的相对峰面积值。3个产地饮片、制备的汤剂及中试生产的配方颗粒hplc图谱见图1。色谱峰相对保留时间、相对峰面积结果见表1、表2。表1  3批枳实饮片、相应汤剂及配方颗粒特征峰相对保留
时间比较(略)表2  3批枳实饮片、相应汤剂及配方颗粒特征峰相对峰面积比较（略）

　　3  讨论
   
　　实验结果显示,3个批次的枳实饮片、相应配方颗粒及相应汤剂的hplc图谱共有的色谱峰峰位、峰数一致(见表1),配方颗粒及相应汤剂相对峰面积值相差不大(见表2)。说明经过工艺制备后,在此分析条件下配方颗粒与汤剂具有相同的成分,且各成分间含量比例无明显变化。
    枳实中的黄酮类成分存在种类差异[3],因此,如以黄酮类成分作为考察对象,不同批次饮片及相应配方颗粒、汤剂的hplc图谱肯定存在很大差异。2005年版《中华人民共和国药典》将生物碱类成分辛弗林作为枳实含量测定项下的指标成分[2]。为保证制定的配方颗粒质量评价方法的可行,本实验通过聚酰胺柱吸附黄酮类成分,避免不同产地饮片中黄酮类成分种类不同引起的色谱峰差异。实验中选取了适合生物碱类成分分析的液相色谱流动相,对枳实配方颗粒及相应的饮片和汤剂进行了对比分析。
   
　　供试品溶液制备中曾比较了4种方法：①用甲醇回流提取；②用水回流提取；③用甲醇回流提取后通过聚酰胺柱；④用水回流提取后通过聚酰胺柱。液相色谱图显示以甲醇回流提取后通过聚酰胺柱出峰最好,故确定供试品以甲醇回流提取后通过聚酰胺柱制备。鉴于生物碱类成分的特点,在流动相中加入了离子对试剂以实现其在色谱柱上的保留。曾比较了在流动相中加入十二烷基硫酸钠-磷酸、十二烷基磺酸钠-磷酸二氢钾-冰醋酸、二乙胺和三乙胺,结果以十二烷基硫酸钠-磷酸较好。曾试用流动相梯度洗脱,以使图谱中前面的成分得以分离,但由于十二烷基硫酸钠在乙腈中的溶解性不好,结果显示,供试品色谱峰重复性不好,基线不平稳,故而采用了线性洗脱。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.172.

　　[2] 苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术[m].北京：人民卫生出版社,2000.704.

　　[3] 赵 宇,梁逸曾,易伦朝,等.化学模式识别在中药枳实分类中的应用[j].中药研究与实践,2004,18(增刊)：70.