作者：刘可越，汤自豪，刘海军，张铁军，曲伟红
【摘要】 目的优化款冬花配方颗粒的制备工艺，建立指标成分芦丁的含量测定方法。方法以正交实验法对款冬花配方水提工艺的影响因素进行考察，优选工艺条件; 用hplc法测定芦丁含量，检测波长为360 nm ，流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液（50∶50）。结果优选提取工艺为:10倍量水，回流提取3次，1.5 h/次。芦丁提取率为85. 53%，出膏率为25.95%;芦丁在1～12.5 μg(r=0.999 8)范围内呈良好线性关系。平均回收率为99.07%（n=5）。 结论款冬花配方颗粒的制备工艺稳定、可行；评价指标可靠、合理。
【关键词】 款冬花； 配方颗粒； 芦丁； 质量控制
chinaabstract:objectiveto optimize the extraction process for the preparation of tussilago farfara formula granules and to establish an hplc method for the determination of rutin in the samples.methodsthe optimum water extraction process was selected by the orthogonal design and the content of rutin in formula granules was analyzed by hplc method. the hplc assay was performed by using meoh-0.1% phosphoric acid (50∶50) . the detection wavelength was set at 360 nm. resultsthe optimum extraction conditions were to reflux for 3 times with 10 folds of water and each time for 1.5 h. the extraction rate of ratin was 85. 53%, and the dried extraction yield was 25.95%. the peak area had a good linearity with the concentration of rutin and the linear range was 1～12.5 μg(r=0.999 8).the average recovery was 99.07%（n=5）.conclusionthe preparation process of tussilago farfara formula granules is stable and feasible. the hplc method for quality control is accurate and suitable.
key words:tussilago farfara; formula granules; rutin; quality control
款冬花为菊科款冬属tussilago l.植物款冬的干燥花蕾。WwW.11665.coM2005版《中国药典》将款冬花收载为常用中药，具润肺下气、止咳化痰之功效。现代临床上主要用于新久咳嗽，喘咳痰多等症［1］。在中医临床处方及中成药中用量较大，为历版药典所收载。中药配方颗粒是近年来对传统中药饮片应用形式的突破，以其生产自动化、工艺条件恒定、人为因素影响少等优势［2］，既满足了临床辨证论治，随证加减的需要，又具有免煎易服、质量稳定可控等优点，因此逐步得到广泛的应用［3］。笔者将款冬花制成配方颗粒剂型，优化其提取工艺，并以高效液相色谱（hplc）法对颗粒中芦丁的含量进行了测定，为产品质控提供参考，使款冬花药材资源得以更好地开发利用。
1 仪器和试药
高效液相色谱仪，包括sp8800高效液相泵，sepetra focus紫外检测器，威玛龙色谱数据工作站，甲醇、磷酸为分析纯等。超声仪（autosience仪器有限公司）。款冬花药材购于天津饮片厂，经天津药物研究院中药现代研究部张铁军研究员鉴定为菊科植物款冬花 tussilago farfara l．的干燥花蕾。芦丁标准品（天津市药品检验所），试剂均为分析纯（天津康科德科技有限公司）。
2 方法与结果
2.1 款冬花提取工艺
2.1.1 正交设计通过预实验得知影响提取的主要因素为时间（a）、加水倍量（b）和提取次数（c），为进一步优选各因素最佳工艺水平，设计正交实验，以芦丁提取率和出膏率为指标，采用l9（34）正交表优选水提款冬花的最佳提取工艺条件。因素水平设计见表1。表1 正交试验因素水平（略）
2.1.2 实验方法及结果称取20 g款冬花药材共9份，采用l9(34)正交表安排实验，测定出膏率及芦丁提取率，并充分考虑二者关系及对真实结果的影响，利用提取率与出膏率之和作为综合加权评分［4］，得出综合评分。具体实验结果见表2。为了进一步确定各因素对结果的影响大小，对实验结果进行了方差分析。结果如表3所示。表2 正交实验结果（略）表3 方差分析（略）
从上述结果分析可以看出，则3因素的影响大小依次为c>b>a, c具有显著性。从省时降耗及生产实际出发，在保证提取充分的前提下，综合分析各个因素对芦丁的提取率和出膏率的影响，拟定最佳工艺为10倍水量，煎3次，1.5 h/次。
2.1.3 水提正交实验的验证按照确定的优选工艺重复验证3次，测得平均提取率为85.53%，平均出膏率为25.95%，证明优选工艺数据可靠。
2.2 款冬花配方颗粒的制备取1 500 g款冬花药材，按正交实验所定最佳工艺条件提取，合并滤液，浓缩。按照理论干膏和辅料比1∶1加入淀粉，用75%乙醇适量制成软材，制粒干燥，即得款冬花配方颗粒成品。
2.3 芦丁含量测定
2.3.1 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加流动相制成每毫升含0.10 mg的溶液，分别精密吸取1，2.5, 5, 7.5,10,12.5 ml 置于100 ml量瓶加流动相稀释至刻度，备用。
2.3.2 供试品溶液的制备精密称取款冬花配方颗粒约0.2 g，置量瓶中，加甲醇50 ml，超声30 min，滤过，放冷，转移至100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
2.3.3 线性关系考察精密吸取上述芦丁对照品溶液10 μl，进样，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；以甲醇：0.1％磷酸水溶液（50∶50）为流动相；检测波长为360 nm；理论板数按芦丁峰计算应不低于4 000。记录峰面积。以峰面积为纵坐标，芦丁进样量为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程为：y=391 982x + 19 143,r＝0.999 8，表明芦丁在1～12.5 μg与峰面积具有良好的线性关系。
2.3.4 精密度实验分别精密吸取上述供试品溶液10 μl，按上述色谱条件进行测定芦丁的峰面积，计算得rsd=0.52％（n＝6）。
2.3.5 稳定性实验精密称取款冬花配方颗粒约0.5 g，按“2.3.2”项方法制备供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液10 μl，分别在0,2,4,8,12，24 h进样，按上述色谱条件进行测定芦丁的峰面积，计算得rsd=1.34％（n＝6）。结果表明，样品在24 h内稳定。
2.3.6 重复性实验精密称取同一批次样品6份，分别按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取上述供试品溶液10 μl，按上述色谱条件进行测定芦丁含量，计算得rsd=0.95％（n＝6）。
2.3.7 加样回收率实验取款冬花配方颗粒约0.5 g，精密称定。精密加入3.0 mg的芦丁对照品，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液进行测定。结果平均回收率为99.07％（n=5）。见表4。表4 加样回收实验结果（略）
2.3.8 芦丁的含量测定取款冬花配方颗粒约0.5 g，精密称定，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，平均含量为0.909 5％。
3 结论
本实验对款冬花配方颗粒的制备工艺进行了研究。通过正交实验法，确定最佳提取条件，并为其制定了简便适用的的质量控制方法。通过对颗粒的各项检查，结果均符合《中国药典》2005年版关于颗粒检查项下规定。所制得的颗粒工艺合理，指标成分明确，质量稳定可控。
关于指标成分的选定：款冬花中芦丁含量较高，芦丁又是治疗咳喘症的重要药物，所以选用芦丁作为款冬花配方颗粒的指标成分。hplc法测定款冬花中芦丁的含量，方法准确，重复性好，安全稳定，不需要复杂的仪器设备,可用于款冬花配方颗粒的质量控制。并且本实验采取两项指标综合加权评分的方法［4,5］确定最佳工艺，更为合理。
配方颗粒作为饮片剂型的发展和补充，大多以水作为其提取溶剂，款冬花中的芦丁成分易溶于热水，故将其制成配方颗粒，既保证了传统中药的特点，又提高了质量保证，值得临床推广和应用。
【参考文献】
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