作者：李仲兴,王秀华,赵建宏,杨敬芳,时东彦,王鑫,李继红
【摘要】 目的 观察五倍子等14种中药的体外抗菌活性。方法 用新的中药抑菌实验方法测定五倍子等14种中药对112株金黄色葡萄球菌的抗菌效果。结果 五倍子等14种中药对112株金黄色葡萄球菌均有一定的抗菌活性,其中以五倍子、连翘和儿茶的抗菌活性最好,其mic90分别为0.102、0.244、1.19 mg/ml。结论 五倍子等14种中药对金黄色葡萄球菌均有较强的抗菌活性。
【关键词】 五倍子；连翘；儿茶；金黄色葡萄球菌；抗菌活性
abstract：objective to evaluate the antibacterial activity of galla chinensis etc.14 kinds of tcm against 112 strains of staphylococcus aureus in vitro. method deterimination of antibacterial activity of galla chinensis etc.against 112 strains of staphylococcus aureus was performed by using new agar dilution method. results the antibacterial efficiency of galla chinensis, forsythia suspensa and acacia catechu (l.) willd against 112 strains staphylococcus aureus was good, and the mic90 was 0.102, 0.244, 1.19 mg/ml respectively. conclusion galla chinensis etc. 14 kinds of tcm had strong antibacterial activity agsinst 112 srains of staphylococcus aureus.
key words：galla chinensis；forsythia suspense；acacia catechu (l.) willd；staphylococcus aureus；antibacterial activity
笔者用新的中药定量抗菌实验方法,对五倍子、连翘、儿茶、黄连和黄芩等14种中药进行了体外定量抗菌实验,比较了上述中药对112株金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(mic)。WwW.11665.cOM现报道如下。
1 实验材料
微量多点接种仪：北京医科大学昆仑药物发展研究所生蔓荆子果实中部(果实直径最大处)：果皮表皮细胞多角形,垂周壁多数平直而厚,少数壁不清晰,气孔稀疏散布,多凹陷,有时突出；果皮表面密被腺毛和非腺毛,有时可以看到腺毛头部脱落后的残迹；果实表面具有纵横纹饰。果皮表面特征见表1。表1 不同产区蔓荆子果实表面扫描特征比较（略）
垂周壁多数平直而厚产；培养基：mueller-hinton琼脂(美国bd公司生产,bbl,简称m-h琼脂)；药物：五倍子、连翘、儿茶、黄连和黄芩等14种中药购自河北省药材公司,先将五倍子等按常法做成煎液,即100 g五倍子,文火煎成200 ml煎液(为50%五倍子煎液)备用；菌种：从本院和河北省人民医院临床患者的血液、尿液、脓汁、痰等标本分离的菌株共112株。
2 实验方法
以五倍子为例,采用琼脂稀释法,用m-h琼脂对五倍子等进行定量抗菌实验[1-2]。
2.1 药液稀释
排列无菌中试管10只,于2～10只管中加无菌蒸馏水10 ml,取50%(1∶2)五倍子水煎液20 ml,于第1管加入10 ml,第2管加入10 ml,与第2管混合后取出10 ml,加入第3管,再混合后取10 ml放入第4管,如此连续稀释至第9管,取出10 ml弃掉。第10管只有无菌蒸馏水作对照。这样1～9管含有不同浓度药液各10 ml。
2.2 含药平板制备
用无菌操作将已溶化的无菌m-h琼脂900 ml分装于10瓶,每瓶90 ml,将第1管含10 ml 50%的五倍子水煎液放入含90 ml培养基的瓶中,混合后倾注4个平板,每个平板含25 ml含药琼脂；第2管以后的平板制备同第1管,凝固后备用。这样,第1组的琼脂平板实际含五倍子5%(1∶20),第2组为1∶40,第3组为1∶80……。
含药培养基的药物浓度计算：将一定量(50 ml或100 ml)、一定比例(1∶2或1∶4)的原药材水煎液于37 ℃温箱中烘干,称重,求出每1 ml水煎液的实际重量,就可算出每1 ml培养基中水煎液干重量。如每100 ml 50%五倍子煎液干重为13 000 mg,第1组每100 ml含药培养基含有煎液10 ml,那么每1 ml培养基含煎液干重则等于：13 700/100×10/100＝13.0 mg。
所以第1组含药培养基实际含煎剂干重为13.0 mg/ml,因倍量稀释,故第2组含药培养基为第1组数被2除即可。即1∶20＝13.0 mg/ml,1∶40＝6.5 mg/ml,1∶80＝3.25 mg/ml……。
2.3 菌液制备
将金黄色葡萄球菌等新鲜培养物(菌落)制成菌液,浓度相当于0.5麦氏比浊管。
2.4 指标测定
用多点接种仪分别吸取各种菌液并将菌液点种于含不同药物浓度的琼脂平板上。于35 ℃培养18～24 h,观察mic,并统计出mic50和mic90的药物浓度和累积抑菌百分率。
3 结果
(见表1、表2)表1 五倍子等14种中药对112株金黄色葡萄球菌的累积抑菌百分率（略）表2 五倍子等14种中药对112株金黄色葡萄球菌的抗菌活性药物（略）
4 讨论
从上述研究结果来看,五倍子水煎剂在14种中药中的抗菌活性最好,其次抗菌活性较好的是连翘、儿茶,以及黄连、黄芩等,虎杖和山茱萸的抗菌活性最差。据报道,五倍子具有收敛、止血等作用,其水煎剂对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、链球菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌、猪霍乱沙门菌均有抑制作用[3]。经上述试验证明,五倍子的抗菌活性最好,对112株金黄色葡萄球菌的mic90仅为0.102 mg/ml,也就是说,五倍子水煎剂干重的0.102 mg/ml即可抑制112株金黄色葡萄球菌的90%的菌株。
金黄色葡萄球菌是化脓性感染中最常见的致病菌,可引起人类局部化脓性感染,如疖、痈、脓肿等,也可引起严重的肺炎、伪膜性肠炎、脑膜炎、骨关节感染和心内膜炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染,同时也可引起中毒性休克综合征(toxic shock syndrome,tss)。血液透析治疗的晚期肾病患者特别容易感染金黄色葡萄球菌。此外,多重耐药的甲氧西林金葡菌(mrsa)所引起的感染在不断上升。由于mrsa对多种抗生素耐药,包括β-内酰胺类、氨基糖苷和大环内酯类抗生素均耐药,其耐药机理与青霉素结合蛋白(pbp2a)改变、dna解旋酶、nora膜蛋白加深反泵和自溶酶有关,故其治疗只有用万古霉素或万古霉素加利福平[4]。然而,五倍子对mrsa也有很强的抗菌活性,对84株mrsa的mic90是0.102 mg/ml[5]。说明五倍子是很有开发和应用前景的抗感染中药。
关于连翘的抗菌作用研究也有许多报道[6-7],其定量抗菌活性研究,只有刘氏[8]报道连翘水煎剂对金黄色葡萄球菌的mic为1∶320,使用的是1株金黄色葡萄球菌。本实验显示,连翘水煎剂对112株金黄色葡萄球菌的mic90是1∶640。
儿茶、黄连、黄芩和乌梅等对金黄色葡萄球菌也有一定的抗菌活性。值得提出的是,乌梅不仅对革兰阳性球菌抑菌效果较好,对革兰阴性杆菌的抑菌效果也较好,乌梅水煎剂干重的1.44 mg/ml(1∶160稀释)则能使28株大肠杆菌100%受到抑制；其水煎剂干重的2.88 mg/ml也能100%抑制28株肺炎克雷伯菌。
【参考文献】
[1] 李仲兴,王秀华,赵建宏,等.应用m-h琼脂进行连翘体外抗菌实验的效果观察[j].中国中药杂志,2000,25(12)：742－745.
[2] 李仲兴,王秀华,赵建宏,等.应用m-h琼脂进行黄连对252株临床菌株的体外抗菌活性研究[j].中草药,2001,32(4)：337－339.
[3] 中草药汇编编写组.中草药汇编(上册)[m].第2版.北京：人民卫生出版社,1996.155－156.
[4] 刘振声,金大鹏,陈增辉.医院感染管理学[m].北京：军事医学科学出版社,2000.162－367.
[5] 李仲兴,张立志,王秀华,等.五倍子对224株耐甲氧西林葡萄球菌(mrsa和mrse)的抑菌效果观察[j].中国中医药信息杂志,2001,8(12)：32－34.
[6] 周邦靖,张友菊,张晓玲.148种中药对淋球菌抗菌作用的实验观察[j].浙江中医杂志,1992,27(8)：370.
[7] 周邦靖,徐有穗.160种中药对小肠结肠炎耶氏菌的抗菌作用[j].成都中医学院学报,1993,16(4)：204.
[8] 刘国声.中药抗生力研究[j].中华新医学报,1950,(1)：95,285.
