作者：吴和珍,宋爱华,杨艳芳,施 峰,刘焱文

【摘要】  目的 建立肤痒颗粒的定性定量检测方法。方法 采用薄层色谱法鉴别肤痒颗粒中地肤子、白英,高效液相色谱法测定红花中羟基红花黄色素a的含量。使用c18色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸(24∶6∶70),检测波长为403 nm。结果 定性方法能够检出地肤子、白英；羟基红花黄色素a在0.128～1.024 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r＝0.999 8,平均回收率为99.52%,rsd＝1.97%(n＝5)。结论 该方法可作为肤痒颗粒的定性、定量检测方法。

【关键词】  肤痒颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；羟基红花黄色素a

    abstract：objective to establish the qualitative and quantitative detective methods of fuyang granules. methods the tlc methods for identification of fructus kochiae and herba solani lyrati were established. a simple hplc was established for the determination of hydroxysafflor a (hysa). the mobile phase was methanol-acetonitrile-0.7% phosphoric acid (24∶6∶70). uv detecting wavelength was at 403 nm. results fructus kochiae and herba solani lyrati could be identified by tlc. hysa showed a linear relationship at the concentration range of 0.128～1.024 μg, r＝0.999 8. the average recovery was 99.52% and rsd＝1.97% (n＝5). conclusion the method can be used for qualitative identification and quantization determination of fuyang granules.
   
　　key words：fuyang granules；tlc；hplc；hydroxysafflor a
 
    肤痒颗粒收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》[1],由红花、地肤子、白英、苍耳子、川芎5味中药组成,具有祛风活血、除湿止痒的功效,临床用于皮肤瘙痒症,湿疹,荨麻疹等瘙痒性皮肤病。WWW.11665.COm原质量标准中只有2个理化鉴别,无薄层定性和含量测定方法。为了更好地控制制剂的内在质量,本试验对其定性、含量测定方法进行了探索。

　　1  仪器与试药
  
　　agilent 1100高效液相色谱仪,g1314a紫外检测器。水为重蒸馏水,所用试剂均为分析纯。地肤子对照药材、齐墩果酸对照品、羟基红花黄色素a(hydroxysafflor a,hysa)对照品均由中国药品生物制品检定所提供。白英对照药材购自湖北省中药材公司,经湖北中医学院药学院鉴定教研室鉴定。肤痒颗粒由湖北东信药业有限公司提供。

　　2  方法与结果

　　2.1  定性鉴别

　　2.1.1  地肤子的薄层色谱鉴别 

　　取本品4.0 g,研细,加乙醇40 ml,超声处理5 min,滤过,滤液加盐酸3.0 ml,加热回流2 h,溶液放至室温后,滤过,滤液于水浴上挥去乙醇至干,残渣加水20 ml使溶解,转移至分液漏斗中,以石油醚(60～90 ℃)萃取2次,每次15 ml,合并石油醚提取液,置水浴上挥干,残渣加乙醇1 ml溶解,作为供试品溶液。另取地肤子对照药材1 g,加甲醇20 ml,超声处理5 min,滤过,加盐酸1.5 ml,加热回流2 h,放至室温后,滤过,于水浴上挥去乙醇至干,残渣加水10 ml使溶解,溶液转移至分液漏斗中,以石油醚(60～90 ℃)萃取2次,每次10 ml,合并石油醚提取液,置水浴上挥干,残渣加乙醇1 ml溶解,作为对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品适量,以乙醇溶解,制成每1 ml含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅵb]试验,吸取上述3种溶液各10 μl,分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶g薄层板上,以石油醚-三氯甲烷-丙酮(5∶2∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。经3批样品及阴性对照试验,结果阴性无干扰。

　　2.1.2  白英的薄层色谱鉴别 

　　取本品6.0 g,加乙醇50 ml,加热回流30 min,放冷,滤过,滤液回收乙醇至干,残渣加水20 ml使溶解,溶液转移至分液漏斗中,以乙酸乙酯萃取2次,每次15 ml,合并乙酸乙酯提取液,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇1 ml溶解,作为供试品溶液。取白英对照药材2.0 g,加乙醇20 ml,加热回流30 min,放至室温,滤过,滤液置水浴上挥干,残渣加水10 ml溶解,转移至分液漏斗中,以乙酸乙酯萃取2次,每次10 ml,合并乙酸乙酯提取液,置水浴上挥干,残渣加甲醇2.0 ml使溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅵb]试验,吸取上述两种溶液各10 μl,分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶g薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。经3批样品及阴性对照试验,结果阴性无干扰。

　　2.2  含量测定

　　2.2.1  色谱条件及系统适应性试验 

　　色谱柱：alltima c18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(24∶6∶70)；检测波长：403 nm；柱温：25 ℃；流速：1.0 ml/min；理论塔板数按hysa峰计算应不低于3 000,阴性对照无干扰。在上述条件下,hysa的保留时间约为11 min(见图1)。

　　2.2.2  供试品溶液的制备 

　　取本品颗粒1袋,精密称定,混匀,研碎,取约2 g,精密称定,置25 ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取本品水溶液5 ml,置50 ml量瓶中,以甲醇稀释至刻度,滤过,取续滤液25 ml,置蒸发皿中挥去甲醇至干,残渣以25%的甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中,以25%的甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,即得。

　　2.2.3  对照品溶液的制备
 
　　取hysa对照品适量,精密称定,加25%甲醇制成每1 ml含0.13 mg的溶液,即得。

　　2.2.4  阴性对照液的制备 

　　取处方量1/10的药材(缺红花),置1 000 ml烧瓶中,按生产工艺加水提取2次,合并提取液,静置8 h,取上清液浓缩至适量体积,转移至100 ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,取溶液2 ml置25 ml量瓶中,加入糊精0.5 g,蔗糖粉1.5 g,照供试品溶液制备方法制备,即得。

　　2.2.5  线性关系的考察 

　　精密称取hysa对照品6.40 mg,置50 ml量瓶中,加25%甲醇溶解并稀释至刻度,制成每1 ml含hysa 0.128 mg的溶液作为储备液。精密吸取储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 ml置1 ml量瓶中,加25%甲醇稀释至刻度,制成每1 ml分别含hysa 0.012 8、0.025 6、0.051 2、0.076 8、0.102 4 mg的溶液。精密吸取上述溶液各10 μl,注入高效液相色谱仪,测定。以峰面积为横坐标,hysa的量(μg)为纵坐标,绘制标准曲线。线形回归方程为：y＝-2 165.1x―23.921,r＝0.999 8。hysa在0.128～1.024 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.2.6  精密度试验 
　
　　取本品同一供试品溶液,重复进样5次,测定峰面积,结果hysa峰面积积分值的相对标准偏差小于2.0%,表明仪器精密度良好。

　　2.2.7  稳定性试验 

　　取本品同一供试品溶液,分别于制备后放置0、1、2、4、8、12 h,精密吸取20 μl,注入高效液相色谱仪,测定,计算hysa含量,hysa含量相对标准偏差小于2.0%,表明供试品溶液在制备后12 h内测定基本稳定。

　　2.2.8  重现性试验 

　　精密称取本品同一批样品5份,按正文含量测定项下方法进行测定,结果hysa含量标准偏差小于2.0%,表明本方法重现性良好。

　　2.2.9  回收率试验 

　　取已知含量的样品(含hysa为0.662 9 mg/g)约1.0 g,精密称定,置25 ml量瓶中,分别精密加入hysa对照品适量,按正文含量测定项下方法操作,计算回收率,结果见表1。本法平均回收率为99.58%,rsd<5.0%,表明回收率较好。表1  加样回收率试验结果（略）
 
　　2.2.10  样品的测定及含量限度制订
 
　　取样品10批,每批2份,按正文含量测定项下方法操作,用外标两点法计算hysa的含量,结果见表2。表2  10批样品含量测定结果（略）

    根据以上10批样品测定结果,依据《中药新药研究技术要求》暂拟定本供试品每袋含红花以hysa(c27h30o15)计,应不少于3.5 mg。

　　3  讨论

    本研究参照《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》“肤痒冲剂”质量标准[1]拟定,采用tlc法对制剂中的地肤子、白英进行鉴别,选择的制样方法及展开剂具有分离度好、重复性好、专属性强的特点。
   
　　含量测定以红花中hysa为指标成分,采用高效液相色谱法进行含量测定。其方法的建立,参照2005年版《中华人民共和国药典》(一部)红花项下含量测定的方法[2],根据本制剂的实际情况,将流动相调整为上述比例,结果表明,该方法简便,准确,专属性强,能客观地反映本品的内在质量。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第6册)[s].北京：化学工业出版社,1992.92.

　　[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.103.