作者：蒙毅,钟一雄,范卫锋,黄维安
【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定鹰不扑中齐墩果酸含量的方法。方法 选用c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-0.2%磷酸溶液(85∶15)为流动相,流速1.0 ml/min,柱温30 ℃,检测波长为210 nm。结果 齐墩果酸的平均回收率为95.4%,rsd＝0.67%(n＝6),线性范围为0.059～0.59 μg,r＝0.999 8。结论 本法简便、准确,可用于鹰不扑中齐墩果酸的含量测定。
【关键词】 鹰不扑；齐墩果酸；高效液相色谱法
abstract： objective to establish a hplc method for determining the content of oleanolic acid in radix araliae armatae. methods stationary phase was lichrospher-c18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm), mobile phase was methanol-0.2% phosphoric (85∶15), detection wavelength was 210 nm, flow rate was 1.0 ml/min and column temperature was 30 ℃. results there was good linearity in the range of 0.059～0.59 μg for oleanolic acid. the average recovery of oleanolic acid were 95.4% with rsd＝0.67% (n＝6). conclusion this method is rapid and accurate. it can be applied to control the quality of radix araliae armatae effectively.
key words：radix araliae armatae；oleanolic acid；hplc
鹰不扑又名鸟不企、老鸦怕等,为五加科植物黄毛楤木aralia decaisneana hance的干燥根,主产于广西、广东和湖南等地,具有清热解毒、祛风除湿、散瘀消肿之功效,用于治疗跌打损伤、风湿性腰腿痛、急慢性肝炎、肾炎水肿、淋巴结肿大、咽喉炎、蛇咬伤及糖尿病等症[1]。www.11665.coM鹰不扑主要含以齐墩果酸为主的三萜皂苷[2]。齐墩果酸是主要有效成分,原标准(收载于《广西中药材标准》1990年版)未有含量测定项,文献报道仅为薄层扫描法[3]对齐墩果酸进行定量分析。本试验首次采用hplc法对鹰不扑中齐墩果酸进行含量测定,为药材使用和质量控制提供科学依据。
1 仪器与试药
lc-10at日本岛津高效液相色谱仪(带紫外可见检测器),日本岛津uv-2001紫外分光光度计,威玛龙化学工作站。
齐墩果酸对照品(批号110709-200304,含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供；鹰不扑由广西玉林制药有限责任公司提供,经广西玉林制药有限责任公司中药鉴定室鉴定为五加科植物黄毛楤木aralia decaisneana hance的干燥根。水为重蒸馏水,甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
lichrospher-c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(85∶15)[4]；流速：1.0 ml/min；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。理论板数按齐墩果酸计算应不低于3 000(色谱图见图1)。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取齐墩果酸对照品适量,加甲醇制成每1 ml含齐墩果酸59 μg的溶液,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取鹰不扑粉末约0.5 g,精密称定,置平底烧瓶中,精密加入甲醇-15%盐酸(4∶1)50 ml,称定重量,水浴加热回流5 h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
2.4 线性关系的考察
分别精密吸取齐墩果酸对照品溶液(59.0 μg/ml)1、2、4、6、8、10 ml,置于10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,各进样10 μl,连续进样2次,测定峰面积。以对照品进样量(c)为横坐标,峰面积(a)为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：a＝2.618 6×105c－473.5,r＝0.999 8(n＝6),结果表明,齐墩果酸在0.059～0.59 μg范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
取齐墩果酸对照品溶液,各重复进样6次,测定峰面积,结果齐墩果酸峰面积平均值为157 847,rsd＝0.58%(n＝6)。
2.6 重现性试验
取同一批号样品6份,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,测定,结果齐墩果酸峰面积平均值为120 822,rsd＝1.09%(n＝6)。表明该法重现性良好。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液,分别于配制后0、4、8、12、24 h依法测定峰面积,结果齐墩果酸rsd＝1.25%,表明样品溶液在24 h内基本稳定。
2.8 加样回收率试验
取已知齐墩果酸含量的鹰不扑粉末约0.2 g,精密称定,平行称取6份,各加入一定量的齐墩果酸对照品,按“2.3”项下方法制备供试液,按上述色谱条件测定。结果齐墩果酸平均加样回收率为95.4%,rsd＝0.67%,说明该方法准确可靠。见表1。 表1 齐墩果酸加样回收率试验结果（略）
2.9 样品测定
取鹰不扑样品,按“2.3”项下方法操作,在上述色谱条件下进行测定,结果见表2。表2 样品含量测定结果(略)
3 讨论
齐墩果酸标准品在紫外分光光度计190～500 nm波长范围进行光谱扫描,其最大吸收波长为203 nm,但由于流动相在短波长处有末端吸收,为了减少干扰,提高信噪比,采取不同波长的色谱图进行比较。选择210 nm为检测波长,检测器响应值大,基线平稳,峰形好。
本试验考察不同的酸(硫酸、盐酸、醋酸)及酸度(5%、15%、30%)回流提取,其中15%盐酸甲醇液直接回流提取的水解效果最好,比一般水解过程(先甲醇提取再水解)简单,重现性好。首次采用hplc法对鹰不扑中齐墩果酸进行含量测定,精密度优于薄层扫描法,无需显色,结果稳定,方法简便。为用hplc法测定鹰不扑中齐墩果酸含量,提供了一种可借鉴的方法。
鹰不扑的传统药用部位为根,本试验考察广西不同地区的鹰不扑,齐墩果酸的含量相差不大,根与茎的含量也相差不大,可以用其茎作为药用部位,扩大药用范围。
【参考文献】
[1] 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准[s].南宁：广西科学技术出版社,1990,95－96.
[2] 熊筱娟,高应东,邹盛勤.江西黄毛楤木生药学、化学成分及药理活性研究[j].安徽农业科学,2006,34(6)：1104－1106.
[3] 姚向超,邓杏灵,曾池清.薄层扫描法测定黄毛楤木中齐墩果酸的含量[j].江西中医学院学报,2005,17(3)：45－46.
[4] 韩 锋,王惠淑.hplc法测定舒肝灵胶囊中齐墩果酸的含量[j].天津中医药,2006,23(6)：67－68.
