【摘要】 目的 测定广西不同产地华南忍冬中绿原酸含量,评价华南忍冬药材质量。方法 采用高效液相色谱法,angilent ods c18 (4.6 mm×150 mm,5 μm)柱,以乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,三相的比例0～20 min为7∶5∶88,25 min为13∶13∶74；流速为0.5 ml/min；检测波长为327 nm；柱温为30 ℃。结果 广西不同产地华南忍冬中绿原酸含量范围为2.21%～3.94%。结论 广西不同产地华南忍冬中绿原酸含量存在一定的差异,但均已达到《中华人民共和国药典》的要求。
【关键词】 华南忍冬；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定
abstract：objective to determine the content of chlorogenic acid in fructus lonicera confusa dc (flcd) from different places in guangxi by hplc, and evaluate its internal quality. methods hplc separation was performed on a agilent c18 analytical column (4.6 mm×150 mm, 5 μm) by gradient eluting with acetonitrile-methanol-0.05% phosphoric acid at the flow rate of 0.5 ml/min. the column temperature was 30 ℃ and the uv detection wavelength was 327 nm. results the chlorogenic acid content of flcd from different places in guangxi ranged from 2.21% to 3.94%. conclusion the chlorogenic acid contents of flcd from different places in guangxi are different, but all of them are up to the standard of phamarcopoeia of the people’s republic of china.
key words：fructus lonicera confusa dc；chlorogenic acid；hplc；content determination
华南忍冬为山银花的一种,系忍冬科忍冬属植物华南忍冬lonicera confusa dc.的干燥花蕾,具有清热解毒之功效,同时还是重要的化工原料和优良饮品原料。Www.11665.cOm2000年版及其之前的《中华人民共和国药典》将华南忍冬当作山银花使用,2005年版《中华人民共和国药典》将华南忍冬定为山银花3种来源植物之一[1]。
1 仪器与试药
安捷伦agilent1100高效液相色谱仪；cg-16w高速微量离心机(北京医用离心机厂)；sb3200t超声波清洗仪(上海能信超声有限公司)；millipore simplicity-185超纯水仪(美国密里博公司)；bp211d电子分析天平(德国赛多利斯)；agilent8453紫外分析仪(美国安捷伦科技公司)。
绿原酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号110753-200413)；实验用10批样品均经广西中医药研究所副研究员方鼎鉴定为忍冬科植物华南忍冬lonicera confusa dc.的干燥花蕾或带初开的花。甲醇、乙腈(天津四友生物医学技术有限公司,色谱纯)、乙醇(北京化工厂,分析纯)、磷酸[中国医药(集团)上海化学试剂公司,分析纯],其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
取绿原酸对照品3 mg,精密称量,置10 ml容量瓶中,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀,得到浓度为0.3 mg/ml的溶液,备用。
2.2 供试品溶液的制备
精密称定华南忍冬药材粉末0.1 g,精密加入70%乙醇50 ml,超声提取30 min,所得溶液趁热离心15 min,取上清液即可。
2.3 色谱条件
色谱柱为agilent c18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相为乙腈-甲醇-0.05%磷酸,0～20 min三相的比例为7∶5∶88,25 min为13∶13∶74,体积流量为0.5 ml/min；柱温为30 ℃；检测波长327 nm；进样10 μl；理论塔板数以绿原酸计不低于1 000。
2.4 线性关系考察
精密吸取上述绿原酸对照品溶液1 ml,置2 ml容量瓶中,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.15 mg/ml对照品溶液。按此方法分别制得浓度为0.075、0.037 5、0.018 7 mg/ml的对照品溶液,按上述色谱条件分别进样测定。以峰面积积分值为纵坐标,绿原酸的浓度(mg/ml)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程为：y＝71 290.516 9x－159.978 53,r＝0.999 8,结果表明在0.187 0～3.00 mg范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密量取上述同一供试品溶液10 μl,重复进样6次,按上述色谱条件测定,绿原酸峰面积积分值的rsd＝0.50%。
2.6 重复性试验
分别取同一批样品各6份,按“2.2”项下方法制备并进行测定,结果绿原酸的平均含量为3.30%,rsd＝1.05%。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液,按上述色谱条件,分别在0、2、4、8、16、24 h不同的时间点进行检测,考察样品溶液的稳定性。结果表明,绿原酸的rsd＝1.06%,说明供试品溶液在24 h内稳定。
2.8 加样回收率试验
取已知含量的样品0.05 g,精密称定,分别精密加入绿原酸对照品溶液(1.096 mg/ml)1 ml,按照“2.2”项下方法制备,依次测定,计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率测定结果（略）
2.9 样品测定
取10批广西不同产地的样品,按上述测定方法进行测定,以外标峰面积法计算样品的含量。结果见图1、表2。表2 广西不同产地华南忍冬样品中绿原酸含量测定结果（略）
3 讨论
2005年版《中华人民共和国药典》中,山银花的含量测定使用乙腈-0.4%磷酸溶液(8∶92)作为流动相；而在试验过程中,反复使用此条件都不能使样品有很好的分离结果,后采用甲醇-乙腈-0.05%磷酸溶液三相作为流动相,采用梯度洗脱的方法,使样品中绿原酸峰以及其它峰得到很好的分离。广西华南忍冬的产地主要分布在广西的上思县、横县、邕宁县等地,多为野生零散分布,但其主要有效成分绿原酸含量均已达到《中华人民共和国药典》要求,如能按照gap规范种植、集中管理,药材质量可能会得到更大的提升。由于不同的生长条件,广西不同产地的山银花——华南忍冬主要有效成分绿原酸含量存在一定的差异。研究发现,上思县百包平纳队的华南忍冬绿原酸含量较其它产地高,可能与其特定的生长环境有关。因此,种植药用华南忍冬药材时对生境、土壤及水肥等种种因素进行优化尤为重要。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.21－22.
