【摘要】  目的 建立活血通络丸中紫丁香苷含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为kromasil c18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-1%冰醋酸(10∶90),流速为1.0 ml/min,检测波长为270 nm,柱温为室温,进样量为20 μl。结果 紫丁香苷浓度在5.3～53 μg/ml范围内线性关系良好,平均回收率为98.29%, rsd＝1.71%。结论 方法简便、准确、重现性好,可作为活血通络丸的质量控制方法。

【关键词】  活血通络丸；高效液相色谱法；紫丁香苷；含量测定

    abstract：objective to establish a hplc method for the content determination of syringin in huoxue tongluo pill. methods chromatographic assay was performed on kromasil c18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) at room temperature, and the mixture solution of acetonitrile-1% aqueous acetic acid (10∶90, v/v) was used as mobile phase. the flow rate was 1.0 ml/min. the detection wavelength was at 270 nm. the sample size was 20 μl. results good linear relationship was achieved when the concentration of syringin was in the range of 5.3～53 μg/ml. the average recovery was 98.29% with rsd＝1.71%. conclusion the method is simple, accurate and the results are stable with good reproducibility. this method can be used for the content determination of syringin in huoxue tongluo pill.

    key words：huoxue tongluo pill；hplc；syringin；content determination
 
    活血通络丸系武威市凉州区中医院经多年临床经验研制的医院制剂,由丹参、祖师麻、鸡血藤、乳香、没药、黄芪等11味中药组成的中药复方制剂,具有化痰祛瘀、通络止痛的功能,用于风湿、类风湿性关节炎所致的肌肉、关节刺痛,部位固定不移,甚至关节变形、僵硬、肢体麻木等。Www.11665.CoM经临床多年使用,疗效显著。祖师麻为方中主药之一,紫丁香苷为其有效成分之一。为有效控制该制剂的质量,本试验采用高效液相色谱(hplc)法,建立了活血通络丸中紫丁香苷的含量测定方法,为活血通络丸质量标准的研究与指标的制定提供了试验依据。

　　1  仪器与试药

    agilent1100高效液相色谱仪(包括：g1314a vwd检测器, g1311a泵,g1316a柱温箱,7725i手动进样阀,agilent1100化学工作站)；瑞士普利赛斯xr205sm-dr型电子分析天平；hs10260d超声波清洗器(天津市恒奥科技发展有限公司)。
   
　　紫丁香苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号111574- 200502,供含量测定用)；活血通络丸样品(批号070410、070423、070514)及阴性对照样品均由武威市凉州区中医院制剂室提供。水为重蒸馏水,乙腈为色谱纯,其它试剂、试药均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件及系统适用性试验

    色谱柱：kromasil c18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：
乙腈-1%冰醋酸(10∶90)；流速：1.0 ml/min；检测波长：270 nm；柱温：室温；进样量20 μl。在此色谱条件下,取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各20 μl分别进样,结果供试品色谱中,紫丁香苷峰与相邻峰达到基线分离,且阴性对照无干扰,其峰形对称,分离效果良好。见图1。

　　2.2  对照品溶液的制备

    精密称取紫丁香苷对照品2.65 mg,置于50 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配成浓度为0.053 mg/ml的甲醇溶液。再精密量取4 ml置10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制成含紫丁香苷0.021 2 mg/ml的对照品溶液。

　　2.3  供试品溶液的制备
   
　　取活血通络丸,研细,取粉末(过40目筛)约4 g,精密称定,置具塞锥形瓶中。精密加入甲醇50 ml,称定重量,超声处理(功率250 w,频率50 khz)45 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过。精密量取续滤液40 ml,水浴蒸干,残渣加50 ml水使溶解,移置分液漏斗中,用氯仿提取2次,每次25 ml。弃去氯仿层,水层用水饱和的正丁醇提取4次,每次25 ml。合并正丁醇提取液,用10 ml水洗1次,分取正丁醇层,置蒸发皿中,水浴蒸干,残渣加甲醇溶解并定容至10 ml容量瓶中,作为供试品溶液。用0.45 μm微孔滤膜过滤后备用。

　　2.4  阴性对照品溶液的制备

    取不含祖师麻的阴性样品,按“2.3”项下方法,制得阴性对照品溶液。

　　2.5  线性关系的考察

    精密吸取紫丁香苷浓度为0.053 mg/ml的甲醇溶液1、2、4、6、8、lo ml,分别置于10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下测定,以峰面积(a)对浓度(c)进行线性回归,得回归方程为a＝9 906.6c＋5 271.5,r＝0.999 9。表明紫丁香苷浓度在5.3～53 μg/ml范围内线性关系良好。

　　2.6  精密度试验

    精密吸取对照品溶液20 μl,重复进样5次,计算5次峰面积的rsd＝1.16%。

　　2.7  稳定性试验

    取对照品溶液和供试品溶液,室温放置,在上述色谱条件下,于0、1、2、4、8、12 h分别进样20 μl,测定峰面积,计算,对照品的rsd＝1.28%,供试品的rsd＝1.70%,结果表明,对照品和供试品溶液在12 h内稳定。

　　2.8  重复性试验

    取活血通络丸(批号070410),平行做6份样品,按样品测定法测定,计算紫丁香苷含量,结果rsd＝2.13%,表明方法重复性较好。

　　2.9  加样回收率试验
   
　　采用加样回收法,取已知含量的活血通络丸(批号070410,含量0.063 mg/g)6份,精密称定,分别精密加入紫丁香苷标准品溶液(0.053 mg/ml)2 ml,按“2.3”项下方法制备,在上述色谱条件下测定紫丁香苷的含量,结果平均回收率为98.29%, rsd＝1.71%。结果见表1。表1  加样回收率试验结果(略)

　　2.10  样品测定

    取3批样品,按“2.3”项下所述方法分别制得供试品溶液,在上述色谱条件下,分别吸取对照品溶液及供试品溶液各20 μl注入液相色谱仪,按外标法计算样品中紫丁香苷的含量,结果见表2。表2  紫丁香苷含量测定结果(略)

　　3  讨论

    关于紫丁香苷含量的hplc法测定已有文献报道[1-5]。本试验建立的hplc法测定活血通络丸中紫丁香苷的含量,方法简便、快速、重现性好、准确度高,可作为该制剂的定量控制指标。

    在供试品溶液制备时,比较了甲醇超声提取和加热回流提取,结果两种提取方式对紫丁香苷含量的影响无差异,但超声提取简便快速,甲醇超声45 min以后可将样品中紫丁香苷提取完全。用甲醇超声提取液直接进样测定,结果有干扰杂质,利用紫丁香苷的性质,用萃取分离的方法对提取成分进行进一步分离净化,可有效减少杂质干扰。

    hplc法测定紫丁香苷含量时,曾比较了不同比例的乙腈-水、甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸、乙腈-水-冰醋酸、乙腈-水-磷酸等多种流动相系统,结果以乙腈-1%冰醋酸(10∶90)作为流动相,色谱图峰型好,出峰时间适宜,分离效果较好。

【参考文献】
  　　[1] 齐香君,李 楠,单燕风,等.hplc法测定祖师麻中紫丁香苷[j].中草药, 2005,36(8)：1243－1244.

　　[2] 郑 键,刘玉珍,李 军,等.反相高效液相色谱法测定刺五加注射液中紫丁香苷的含量[j].中成药,2000,22(4)：263.

　　[3] 何禄仁,王兰霞,李士博,等.hplc法测定壮元健肾胶囊中紫丁香苷的含量[j].中国药事,2007,21(10)：829－831.

　　[4] 杨水新,赵国忠,张圣民,等.高效液相色谱法测定刺五加注射液中紫丁香苷的含量[j].药物分析杂志,2001,21(1)：16.

　　[5] 罗兴平,聂凌云,翟宗德,等.hplc测定康儿灵颗粒中紫丁香苷的含量[j].解放军药学学报,2005,21(4)：305－306.