作者：管清香,岳峻威,刘昕,朱琨
【摘要】 目的 建立桂芍镇痫片的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别桂芍镇痫片中甘草、党参及柴胡,采用高效液相色谱法测定白芍中芍药苷的含量。结果 薄层鉴别的色谱斑点清晰,阴性对照无干扰。芍药苷进样量在0.245 2～0.735 6 μg范围内线性关系良好(r＝0.999 7)。平均加样回收率为98.3%,rsd＝1.52%(n＝5)。结论 本法简便、可靠,所建立的质量标准可有效控制本品的质量。
【关键词】 桂芍镇痫片；芍药苷；质量标准；高效液相色谱法；薄层色谱法
study on quality standard for guishao zhenxian tablets
guan qing-xiang, yue jun-wei, liu xin, et al
school of pharmacy, jilin university, changchun 130021, china
abstract：objective to establish the quality standard for guishao zhenxian tablets. methods radix glycyrrhizae, radix codonopsis, radix bupleuri were identified by tlc. the content of paeoniflorin in the preparation was determined by hplc. results the spots of tlc color spectrum were distinct and there was nointerference from the negative control. the calibration curve was linear over the concentration range of 0.245 2～0.735 6 μg for paeoniflorin (r＝0.999 7) and the average recovery was 98.3%, rsd＝1.52% (n＝5). conclusion the established quality standard is convenient and reliable, and can be used to control the quality of guishao zhenxian tablets more effectively.
key words：guishao zhenxian tablets；paeoniflorin；quanlity standard；hplc；tlc
桂芍镇痫片由白芍、党参、柴胡等9味中药组方而成,用于治疗各种发作类型的癫痫,为《卫生部药品标准·中药成方制剂》第3册收载的品种(ws3-b-2591-97)。wwW.11665.COm原质量标准中只有黄芩、白芍的鉴别,无含量测定。为了更好地控制本品质量,本试验对其质量标准进行了研究。采用薄层色谱(tlc)法对制剂中的甘草、党参及柴胡进行了鉴别,采用高效液相色谱(hplc)法对制剂中君药白芍的主要成分芍药苷进行了含量测定。
1 仪器与试药
lc-20at高效液相色谱仪,包括spd-20a检测器、labsolution色谱数据处理工作站(日本岛津)；赛多利斯电子天平(1/100 000,德国)；kq-250de数控型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
甘草次酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110723-200411)；党参对照药材(供鉴别用,中国药品生物制品检定所,批号121057-200303)；柴胡对照药材(供鉴别用,中国药品生物制品检定所,批号120992-0301)；芍药苷对照品(供含量测定用,中国药品生物制品检定所,批号110736- 200423)；桂芍镇痫片样品(自制,批号060811、060812、060813)。乙腈为色谱纯,水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
2.1 甘草的鉴别
取本品10片,除去薄膜衣,研细,称取细粉3 g,加氯仿40 ml, 回流提取30 min,滤过,滤渣挥干溶剂,加甲醇40 ml,回流提取1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加水30 ml使溶解,用水饱和的正丁醇提取3次,每次20 ml,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次20 ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品,加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[《中华人民共和国药典》2005年版(一部)附录ⅵb]试验,吸取供试品溶液5～10 μl、对照品溶液4 μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以石油醚(30～60 ℃)-甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂[1],展开,取出,晾干,喷以10 %磷钼酸乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
2.2 党参的鉴别
取本品10片,除去薄膜衣,研细,称取细粉3 g,加正丁醇50 ml,超声处理30 min,滤过,滤液浓缩至约0.5 ml,作为供试品溶液。另取党参对照药材2 g,加水20 ml,微沸煮40 min,滤过,滤液用正丁醇30 ml振摇提取,正丁醇液浓缩至1 ml,作为对照药材溶液。照薄层色谱法[《中华人民共和国药典》2005年版(一部)附录ⅵb]试验,吸取供试品溶液和对照药材溶液各5 μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以正丁醇-无水乙醇-水(15∶3∶2)为展开剂[2],展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,于105 ℃下加热。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
2.3 柴胡的鉴别
取本品10片,除去薄膜衣,研细,称取细粉3 g,置具塞锥形瓶中,加甲醇50 ml,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水30 ml使溶解,并转移到分液漏斗中,用水饱和的正丁醇提取3次,每次40 ml,合并正丁醇液,用氨试液40 ml洗涤,弃去氨液,正丁醇层蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。取柴胡对照药材1 g,加水微沸30 min,滤过,滤液浓缩至约30 ml,转移至分液漏斗中,余项操作同供试品,即得对照药材溶液。照薄层色谱法[《中华人民共和国药典》2005年版(一部)附录ⅵb]试验,吸取供试品溶液和对照药材溶液各10 μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)为展开剂[3],展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
3 含量测定
3.1 色谱条件与系统适用性
色谱柱为diamonsiltmc18(5 μm,200 mm×4.6 mm)；流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液(15∶85),流速为1.0 ml/min；检测波长为230 nm；柱温为室温。理论板数按芍药苷峰计算应不低于4 000；分离度r＞1.5。
3.2 溶液的制备
3.2.1 对照品溶液
精密称取芍药苷对照品12.26 mg,置100 ml量瓶中,加甲醇适量使溶解,定容,摇匀,精密量取5.0 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇定容,摇匀,经0.45 μm滤膜滤过,即得。
3.2.2 供试品溶液
取桂芍镇痫片10片,除去薄膜衣,研细,取细粉0.2 g,精密称定,置50 ml量瓶中,加稀乙醇35 ml,超声处理((功率250 w,频率40 khz),放冷,加稀乙醇定容,摇匀,滤过,取续滤液,经0.45 μm滤膜滤过,即得。
3.2.3 阴性对照品溶液
按处方组成及制备工艺制备不含芍药的样品,按“3.2.2”项下方法处理,即得。
3.3 空白干扰试验
按上述色谱条件,分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液,注入液相色谱仪,测定。结果在供试品色谱中,在与对照品色谱峰相应的位置上有相同保留时间的色谱峰,而阴性对照品溶液在此无峰,见图1。芍药苷与其他组分分离良好,说明阴性样品对芍药苷含量测定无干扰。
3.4 线性范围考察
精密吸取对照品溶液4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μl,按上述色谱条件测定,记录色谱图,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,进行线性回归,得回归方程为：y＝1 547 954x＋14 289 (r＝0.999 7)。结果表明,芍药苷在0.245 2～0.735 6 μg范围内线性关系良好。
3.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μl,按上述色谱条件重复进样5次,记录色谱图,计算。结果rsd＝0.81%,表明本法精密度较好。
3.6 稳定性试验
精密吸取供试品溶液10 μl,按上述色谱条件测定,分别于0、4、8、12、24 h进样,记录色谱图,测定峰面积,计算。结果rsd＝1.04%,表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
3.7 重复性试验
取同一批样品(批号060811)5份,按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定,记录色谱图,测定峰面积,计算。结果本品平均含量为13.06 mg/g(rsd＝1.10%),表明本方法重复性良好。
3.8 加样回收率试验
取已知含量的样品(批号060811,含量13.06 mg/g),除去薄膜衣,研细,取0.1 g,精密称定,置50 ml量瓶中,精密加入芍药苷对照品溶液10 ml(浓度为0.122 6 mg/ml),其余按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定,记录色谱图,计算,结果见表1。本方法回收率在96.7%～100.3%之间,rsd＝1.52%,表明方法的准确性较好。表1 回收率试验结果(略)
3.9 样品测定
取3个批号(060811、060812、060813)的样品,平行2份,按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液。精密量取对照品、供试品溶液各10 μl,按上述色谱条件测定,测定峰面积,计算。结果3个批号样品中芍药苷的平均含量分别为4.12、4.09、4.08 mg/片。
4 讨论
曾试验了甲醇-0.1 %磷酸溶液(35∶65)、甲醇-水(30∶70)及乙腈-0.1%醋酸溶液(25∶75)等流动相系统,结果均不理想。而流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液(15∶85)时,具有较好的分离度和适宜的保留时间,故以此作为含量测定的流动相。
在筛选样品中芍药苷的提取条件时,比较了稀乙醇加热回流法和超声提取法,结果超声提取方便、迅速,超声30 min即可提取完全,故样品的处理采用超声提取30 min。
以tlc法对制剂中的甘草、党参及柴胡进行定性鉴别,斑点清晰,专属性好,无阴性干扰。芍药苷为白芍中的主要成分,可用来作为中成药中白芍的定量指标成分。所建立的hplc法测定芍药苷含量简便、重复性好,可作为控制本品质量的指标。
【参考文献】
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