作者：李铮,张小茜,赵惠萍,张国辉
【摘要】 目的 建立乌头饮片中生物碱含量的测定方法。方法 采用液-质联用方法,测定乌头类不同饮片中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的含量。液相色谱采用inertsil ods-3色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-醋酸铵缓冲液(60∶40)；流速：0.2 ml/min；柱温：30 ℃。结果 建立了液-质联用方法测定乌头饮片中生物碱含量的方法,并测得了25批乌头不同饮片的结果。结论 液-质联用方法具有灵敏、专属性强的特点,适用于微量生物碱的检测。
【关键词】 液-质联用；乌头；乌头碱；次乌头碱；新乌头碱；含量测定
abstract：objective to establish a method for the determination of alkaloid in cut crude drug of aconite root. method contents of aconitine, hypaconitine and mesaconitine incrude drug of aconite root were determined by lc-ms. it was carried out on inertsil ods-3 column (150 mm×4.6 mm, 5 μm), with acetonitrile-ammonium acetate buffer solution (60∶40) as mobile phase, at a flow rate of 0.2 ml/min and temperature of 30 ℃. result the method of determining alkaloid content in crude drug of aconite root was established and 25 lots of crude drugs were determined. conclusion the method was sensitive and specifical, can be used to control the quality of cut crude drug from aconite root.
key words：lc-ms；aconite root；aconitine；hypaconitine；mesaconitine；content determination
乌头类中药因其含有的乌头碱(aconitine)毒性强(其致死量为2～5 mg),从染毒至死亡最短仅8 min,其治疗量与中毒量接近,因此,传统中医常以其炮制品制川乌、制草乌和盐附子、白附片、黑顺片入药。Www.11665.coM因炮制方法和产地及采收时间不同,其毒性成分含量差异较大,因此,对药材中乌头类生物碱进行含量测定具有重要意义。我们在药材市场上共收集样品25批,其中生川乌1批、制川乌4批、制草乌7批、白附片5批、黑顺片8批。采用液-质联用技术,测定了其中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的含量。结果表明,该方法具有灵敏、专属性强的特点,适用于微量生物碱的检测。
1 仪器、试剂与试药
岛津lc-ms-2010a质谱仪。乌头碱、次乌头碱和新乌头碱对照品由中国药品生物制品检定所提供。乌头类饮片购自药材市场。乙腈为优级纯,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 液相色谱分析条件
色谱柱：inertsil ods-3(4.6 mm×150 mm,5 μm),柱温30 ℃,流速：0.2 ml/min。流动相[1-3]：乙腈-醋酸铵缓冲液(2.5‰冰醋酸,用浓氨水调节ph10.5左右；60∶40)。在上述色谱条件下取得满意的分析效果(见图1)。
2.2 质谱分析条件[4]
电喷雾电离离子源,源电压4.5 kv,毛细管温度为270 ℃,毛细管电压20 v,鞘气流速50 arb,正离子检测,质量分析器为四级杆,采用选择离子模式检测(见图2)。
2.3 供试品溶液的制备
精密称定生川乌粉末0.5 g,精密加入10%氨水溶液1 ml和二氯甲烷-乙醚(1∶1)溶液10 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得。
2.4 对照品溶液的制备
精密称取乌头碱、次乌头碱对照品各6 mg及新乌头碱对照品8 mg,置同一100 ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释定容至刻度,摇匀；精密量取1 ml置100 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
2.5 线性关系考察
分别将乌头碱(0.060 8 mg/ml)、次乌头碱(0.064 6 mg/ml)、新乌头碱(0.082 4 mg/ml)混合溶液稀释10、50、100、1 000、10 000倍,依次注入液-质色谱仪,记录峰面积。分别以进样量(ng)为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,乌头碱回归方程为：y＝1.556×105＋2.725×109x,r＝0.999 3；次乌头碱回归方程为：y＝1.230×105＋3.078×109x,r＝0.999 5；新乌头碱回归方程为：y＝1.725×105＋2.931×109x,r＝0.999 4。结果表明,乌头碱在0.006 08～6.08 ng、次乌头碱在0.006 46～6.46 ng、新乌头碱在0.008 24～8.24 ng范围线性关系良好。
2.6 含量测定结果
按照上述确定的方法,对其余24批样品进行了测定,结果见表1。表1 不同饮片中生物碱含量测定结果（略）
3 讨论
本试验分别以二氯甲烷、乙醚、二氯甲烷-乙醚(1∶1)为溶剂,超声提取生川乌样品,结果以3个成分总量计,二氯甲烷-乙醚(1∶1)提取效率为最高。以二氯甲烷-乙醚(1∶1)为溶剂,分别超声提取15、30、45 min,提取生川乌样品,结果以超声提取30 min为宜。采用液-质联用技术测定乌头类中药及其炮制品中乌头碱、次乌头碱及新乌头碱的含量,具有灵敏、专属性强等优点,尤其适用于被测样品中只含微量乌头类生物碱或背景干扰较为复杂的情况。我们对收集的不同来源的多个制川乌、制草乌、白附片和黑顺片样品进行了含量测定,结果同一品种不同样品之间含量差异较大,所以对炮制品进行准确的含量测定,对于临床用药安全具有重要意义。
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