【摘要】  目的 建立骨健灵贴膏中苯海拉明含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,甲醇-1%硫酸铵溶液(55∶45)为流动相,检测波长258 nm,进样量2 μl。结果 苯海拉明在0.635～5.08 μg之间呈良好的线性关系(y＝46 393x＋8 562.3,r2 ＝0.999 9),平均回收率为99.97%。结论 该方法简便快速,结果准确可靠,可用于骨健灵贴膏中苯海拉明的含量测定。

【关键词】  高效液相色谱法；骨健灵贴膏；苯海拉明；含量测定

骨健灵贴膏为《卫生部药品标准》(中药成方制剂)第二十册收载品种,具有活血化瘀、消肿止痛的功效,用于骨质增生引起的功能性障碍、软组织损伤及大骨节病引起的肿胀疼痛等。苯海拉明是处方中主要成分,是一种氨基醚衍生物类的抗组织胺药物,其含量的测定方法有非水滴定法、酸性染料比色法、分光光度法、交流示波极谱法、原子吸收分光光度法等。本试验采用hplc法测定骨健灵贴膏中苯海拉明的含量,所建立方法专属性强,阴性无干扰,可用于本品含量测定。

　　1  仪器与试药

    岛津高效液相色谱仪,岛津lc-10atvp泵,岛津spd-10avp检测器。苯海拉明对照品(批号066-8103,供含量测定用),中国药品生物制品检定所提供。WWw.11665.CoM骨健灵膏(批号050705、050706、050707),北京羚锐卫生材料有限公司生产。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件与系统适用性

    用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-1%硫酸铵溶液(55∶45)为流动相；检测波长为258 nm。

　　2.2  对照品溶液的制备

    精密称取苯海拉明对照品适量,加甲醇制成0.25 mg/ml的溶液,摇匀,即得。

　　2.3  供试品溶液的制备

    取骨健灵贴膏4片,除去盖衬,剪成小块,置圆底烧瓶中,精密加0.5 mol/l盐酸-甲醇(1∶1)溶液25 ml,称定重量,超声2 h,放冷,再称定重量,用0.5 mol/l盐酸-甲醇(1∶1)溶液补足减失重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。

　　2.4  阴性对照样品溶液的制备

    按处方和工艺制备缺苯海拉明阴性样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照样品溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl,注入液相色谱仪,经测定样品中苯海拉明和其他物质分离良好,其阴性对照样品溶液在与供试品及对照品溶液中苯海拉明成分的相应保留时间的位置上,无干扰。色谱图见图1。

　　2.5  线性关系的考察

　　取苯海拉明对照品溶液(0.254 mg/ml),分别精密吸取2.5、5、10、15、20 μl注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以苯海拉明峰面积积分值为纵坐标,进样量为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程为：y＝46 393x＋8 562.3,r2 ＝0.999 9,苯海拉明在0.635～5.08 μg之间呈良好的线性关系。

　　2.6  精密度试验

    取同一对照品溶液,分别精密吸取10 μl,重复进样5次,测定苯海拉明峰面积并计算相对标准偏差,结果rsd＝0.51%。

　　2.7  稳定性试验

    取同一供试品溶液(050705),分别在0、2、4、6、8 h进样测定苯海拉明峰面积,并计算苯海拉明峰面积积分值的相对标准偏差。结果rsd＝0.22%,供试品溶液在8 h内稳定。

　　2.8  重复性试验

    取同一批号(批号050705)样品,按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液,分别进样10 μl,测定苯海拉明峰面积,并计算其相对标准偏差。结果平均含量为1.73 mg/片,rsd＝0.27%。

　　2.9  加样回收率试验
   
　　取同一批号样品(批号050705,苯海拉明含量1.72 mg/片)
2片,分别精密加入苯海拉明对照品溶液适量,按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液,分别进样10 μl,测定苯海拉明峰面积并计算苯海拉明含量,计算加样回收率,结果见表1。表1  骨健灵贴膏加样回收率试验结果（略）

　　2.10  样品含量测定

　　(见表2)表2  样品的含量测定结果(略)

　　3  讨论
   
　　通过对多批样品采用hplc法测定苯海拉明,结果表明：该方法简便快速,可用于骨健灵贴膏中苯海拉明的含量测定。考虑到国内涂膏设备的精密度普遍不准确,含膏量差别较大,加上含膏量只规定最低含膏量,以及原料厂家不同和投料、处理样品方法的不同,本方法采用测定每片贴膏中苯海拉明含量的方法,更能准确控制贴膏剂的质量。