作者：李苑新，蔡旭玲，霍务贞，朱盛山
【摘要】 目的 为提高复方丹参缓释片中冰片的稳定性，改善其体外释放度，对冰片进行β环糊精包合工艺的研究。方法 采用饱和水溶液法、气质联用法和正交试验，以冰片与β环糊精的比例、包合时间、静置时间和干燥方法为因素，以冰片的包合率、包合物收率为评价指标，优选冰片包合工艺技术参数，考察冰片包合前后的体外释放度。结果 最佳工艺参数：冰片与β环糊精的质量比为1∶6，包合时间为0.5 h，静置时间为1.5 h，常压50 ℃干燥;所制得的冰片包合率为96.16%，包合物收率为98.95%。结论 该包合工艺简单，可操作性强，包合率与包合物收率高，适用于研制复方丹参缓释片。
【关键词】 冰片;β环糊精;正交试验;工艺参数;体外释放度
abstract:objective to enhance the stability of borneol in compound danshen sustainedrelease tablets and improve their in vitro release with the clathration technology of borneol with βcyclodextrin. methods saturation watersolution, gcms and orthogonal experiment with the ratio between bemeol and βcyclodextrin, clathration time, standing time and drying method as technology parameters were applied. in vitro release of borneol, the clathration rate and yield were observed. results the optimized clathration technology parameters were as follows: the ratio between bemeol and βcyclodextrin was 1∶ 6 (g∶g), inclusion time was 0.5 h, standing time was 1.5 h and dried at 50 ℃ np. the borneol clathration ratio was 96.16%, and the clathration yield was 98.95%. conclusion the clathration technology parameters of borneol are reasonable, easy and suitable for compound danshen sustainedrelease tablets.
key words:borneol; βcyclodextrin; orthogonal experiment; technique paramete; in vitro release
复方丹参缓释片是以丹参、三七提取物、冰片包合物和缓释辅料制成。WWw.11665.cOm冰片味辛、苦，易挥发，具有开窍醒神、清热止痛之功效[1]。由于冰片几乎不溶于水，具挥发性，磨粉直接加入研制缓释片，存在释放度差和储存过程中极易挥发损失的情况，影响制剂的质量。为提高复方丹参缓释片中冰片的稳定性，改善其体外释放度，采用饱和水溶液法、气质联用法和正交试验，以冰片与β环糊精的比例、包合时间、静置时间和干燥方法为因素，以冰片的包合率、包合物收率为评价指标，遴选冰片包合最佳工艺技术参数，制备冰片β环糊精包合物，考察复方丹参缓释片中冰片包合前后的体外释放度，为研制复方丹参缓释片提供技术支撑。
1 试剂与仪器
气质联用仪(6890n/gc5973/ms，agilent公司);bp211d 电子 分析天平(德国sartorius公司);dzf6050型真空干燥箱(上海博讯实业有限公司);dhg9203型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司);hsgⅱb恒温水浴锅(上海仪表集团供销公司)。冰片(购自广州市药材公司);冰片对照品(批号110743-200302)、水杨酸甲酯内标物(批号110703220020)均由 中国 药品生物制品检定所提供;β环糊精(广东省郁南县永光环状糊精有限公司);无水乙醇(广州化学试剂厂，批号200603012);95%乙醇(广州化学试剂厂，批号200604032)。
2 冰片的含量测定方法
广东药学院学报 第26卷 第1期 李苑新,等.复方丹参缓释片中冰片包合工艺的研究2.1 ms色谱条件 hp5色谱柱(0.25 mm×30 m，0.25 μm);采用程序升温:60 ℃恒温3.00 min，10 ℃/min上升到110 ℃，1 ℃/min上升到114 ℃;载气为高纯he(99.99%);总流量20.4 ml/min;分流比：1∶20.4;流量：1.0 ml/min;ms检测器。
2.2 内标液制备 精密称取水杨酸甲酯，加无水乙醇制成1.0 mg/ml的溶液，为内标溶液。
2.3 对照品溶液制备 精密称取冰片对照品7.15 mg，置25 ml容量瓶中，移取无水乙醇20 ml，超声溶解后用无水乙醇定容，摇匀，得对照品溶液。吸取冰片对照品溶液3.0 ml，置5 ml量瓶中，加入内标液1.0 ml，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，以0.22 μm微孔滤膜过滤，在上述色谱条件下，取1 μl 进样，ms色谱图见图1a。
2.4 供试品溶液制备 精密称取冰片包合物100 mg，置50 ml容量瓶中，加入无水乙醇30 ml，密封超声15 min，放至室温，用无水乙醇定容，摇匀。以0.22 μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。
2.5 线性关系考察及校正因子的测定[2] 移取“2.3”项冰片对照品溶液4.0、3.0、2.0、1.0、0.5 ml，分别置5 ml量瓶中，各加入内标溶液1.0 ml，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜过滤。在上述色谱条件下，分别取1 μl 进样，以被测组分与内标的峰面积比对被测组分与内标的质量比进行回归，得线性方程： y=0.9846x-0.0341， r=0.999 9。结果表明对照品冰片在28.6～228.8 μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。冰片(以异龙脑与龙脑峰面积的和 计算 )的相对校正因子为1.050 3，rsd=0.5%(n=5)。
2.6 加样回收试验[3] 移取“2.4”项供试品溶液1.5 ml和“2.3”项冰片对照品溶液1.5 ml置5 ml量瓶中，加入内标溶液1.0 ml，以无水乙醇定容至刻度，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜过滤。在上述色谱条件下，取1 μl进样，测定含量，计算平均回收率为99.43%，rsd=0.55%(n=6)。
2.7 含量测定方法 移取“2.4”项供试品溶液3.0 ml置5 ml量瓶中，移取内标溶液1.0 ml，以无水乙醇定容，摇匀,用0.22 μm微孔滤膜过滤。在上述色谱条件下，取1 μl进样，冰片包合物ms色谱图见图1b。
3 冰片β环糊精包合工艺筛选
3.1 正交试验
在预试验的基础上以冰片与β环糊精的比例、包合时间、静置时间和干燥方法为因素，采用l9(34)正交试验设计，以冰片包合率、包合物收率为评价指标进行综合评分，优选冰片包合最佳工艺技术参数。冰片包合率(%)=(包合物中冰片量/冰片加入量)×100%;包合物收率(%)=[包合物量/(β环糊精量+冰片加入量)]×100%;综合评分=[(冰片包合率+包合物收率)/2]×100[4]。试验结果见表1、2、3。表1 正交试验因素水平表
3.2 冰片β环糊精包合物的制备
准确称取β环糊精60 g加入750 ml纯水中，80 ℃水浴加热，搅拌使溶解完全。准确称取规定量冰片以两倍量体积分数为95%乙醇溶解，搅拌下加入β环糊精溶液中，继续搅拌至规定时间，静置规定时间，抽滤，用10 ml乙酸乙酯冲洗滤饼，按干燥方法干燥，冰片包合物含水量控制在4%～5%。表2 正交试验结果表3 方差分析
由表2、表3结果可以看出：a、b因素对冰片的包合具有显著性影响，各因素对冰片包合的影响顺序为a>b>d>c，冰片包合最佳工艺技术参数为a2b1c2d2，即冰片∶β环糊精=1∶6(g∶g)，包合时间为0.5 h，静置时间1.5 h，常压50 ℃干燥。
3.3 冰片包合放大实验
按冰片包合最佳工艺条件a2b1c2d2，准确称取β环糊精600 g加入7 500 ml纯水中，80 ℃加热，搅拌使溶解完全。准确称取冰片100 g以两倍量体积分数95%乙醇溶解，在搅拌条件下加入β环糊精溶液中，继续搅拌0.5 h，静置1.5 h，抽滤，用100 ml乙酸乙酯冲洗滤饼，常压50 ℃干燥，含水量控制在4%～5%，粉碎过120目筛，测定含量， 计算 冰片包合率、包合物收得率，实验结果见表4。表4 冰片包合放大实验结果
4 冰片包合前后体外释放度试验
冰片直接粉碎过120目筛、冰片β环糊精包合物分别与丹参、三七提取物、缓释辅料制成复方丹参缓释片。取冰片包合前后制成的复方丹参缓释片(约0.5 g/片)，分别准确称重，按照《 中国 药典》2005年版二部，附录ⅹd释放度测定(第一法)[5]，以1 000 ml水为溶出介质，转速100 r/min，温度(37.0±0.5) ℃;转篮进入释放池计时，于1、2、4、6、8、10、12 h分别取样10 ml(取样时吹起杯底沉淀物，同时补充相同温度体积的水)，置60 ml犁形分液漏斗中，每次加入5 ml三氯甲烷萃取4次，合并萃取液，用三氯甲烷定容至25 ml。移取冰片萃取液3.0 ml置5 ml量瓶中，加入内标液1.0 ml，以三氯甲烷定容至刻度，摇匀。取1 μl进样，对各组分进行内标校正，计算各取样点的累积释放度，绘制冰片包合前后的体外累积释放度曲线，结果见图2。
图2结果表明，用未包合冰片制备复方丹参缓释片，冰片在水中的初始释放较快，8 h释放完全。释放度试验中冰片在释放介质中的释放与挥发损失同时进行，释放出来的冰片在释放介质中的含量因为冰片的挥发损失而逐渐减少，致使冰片的体外累积释放度结果偏低。冰片释放完全后,挥发损失仍在继续，造成未包合冰片的体外累积释放度曲线在8 h释放完全后呈现快速下降的趋势。
用冰片β环糊精包合物制备复方丹参缓释片，冰片在水中释放比较匀速，10 h释放完全。释放介质中的冰片由于受到β环糊精的镶嵌作用，挥发损失减少，包合冰片的体外累积释放度结果明显高于未包合冰片，包合冰片的体外累积释放度曲线在10 h释放完全后呈现缓慢下降的趋势。
5 讨论
5.1 冰片是难溶于水的挥发性成分，以β环糊精包合能有效减少其挥发损失，提高其在复方丹参缓释片中的稳定性、分散性，改善其体外释药行为，提高了产品质量。
5.2 用zrs8g智能溶出试验仪进行复方丹参缓释片的体外释放度试验，由于溶出杯无密闭装置，易升华挥发的冰片在溶出过程中会不断挥发损失，致使其体外累积释放度偏低。
5.3 采用溶媒提取法，以无水乙醇超声提取冰片包合物中的冰片，用内标法、校正因子、ms色谱法检测冰片的含量，冰片中的异龙脑、龙脑、内标物水杨酸甲酯分别在9.79、10.00、10.69 min出峰，峰形好、分离度大、重现性好。
5.4 按优选包合最佳工艺技术参数制备冰片β环糊精包合物，其冰片包合率为96.16%、包合物收率为98.95%。冰片包合工艺技术参数合理，可操作性强，适用于研制复方丹参缓释片。
【 参考 文献 】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005年版一部[m].北京:化学 工业 出版社,2005:98-99.
[2] 宋洪涛,郭涛,秦冬彦等.冰片β环糊精包合物的制备工艺[j].沈阳药科大学学报,2000,17(3):170-173.
[3] 关志宇,濮存海,赵开军.活血止痛胶囊中冰片β环糊精包合物的工艺研究[j].中药材,2006,29(1):66-71.
[4] 王光忠,谭文界.正交设计优选冰片β环糊精包合物的制备工艺[j].
