【摘要】 目的 优选复方贞术调脂胶囊水提液精制方法。方法 以总酚酸、总多糖、丹酚酸b含量及总固体得率为指标，比较壳聚糖絮凝法、超滤法和水醇法三种精制方法对复方贞术调脂胶囊水提液的精制效果。结果 采用壳聚糖絮凝法进行精制，水提液中丹酚酸b、总多糖及总酚酸转移率较高，分别为90.37%，93.16%，94.39%，总固体得率为31.5%。结论 壳聚糖絮凝法工艺简单，有效成分转移率较高，可用于复方贞术调脂胶囊水提液的精制。
【关键词】 复方贞术调脂胶囊；超滤法；壳聚糖絮凝法；水醇法
abstract:objective to optimize the purification procedure of the active components of compound zhenzhutiaozhi capsule.methods chitosan, wateralcohol mixture and ultrafiltration were used to purify the components in the capsule.the contents of salvianolic acid b, total salvianolic acids and polysaccharides were used as the index for evaluating the purification efficacy. results the extract yields of salvianolic acid b, polysaccharides and total salvianolic acids were 90.37%，93.16% and 94.39%, respectively, when using chitosan to purify the components.the total yield of the solids was 31.5%.conclusion the process of chitosan was simple, which could be used to purify the active components of compound zhenzhutiaozhi capsule.
key words:compound zhenzhutiaozhi capsule; ultrafiltration; chitosan; wateralcohol mixture
复方贞术调脂胶囊由女贞子、丹参、白术、佛手等中药组成，具有调肝降脂、健脾补肾、祛瘀解毒功效，用于 治疗 高脂血症，疗效显著。wWw.11665.COM前期研究结果显示，丹参、白术、佛手中水溶性组分具有调节血脂，抗脂质过氧化，抗动脉粥样硬化等作用［1-3］。因此，丹参、白术、佛手等药材以水为提取溶剂进行提取。但在有效成分被提取出的同时，大量水溶性杂质也被提出。为去除杂质，富集有效成分，提高制剂的稳定性，本文以丹酚酸b、总酚酸、总多糖含量及总固体得率为指标，优选复方贞术调脂胶囊水提液的精制方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器
dionex ultimate3000(美国)；uv1101型分光光度计（上海天美）；re52aa旋转蒸发器（上海嘉鹏科技有限公司）；bs423s型 电子 分析天平（北京赛多利斯）；kq250型医用超声波清洗机（昆山超声仪器有限公司，功率250w）；壳聚糖（上海华凯科技贸易公司）；ab-8型大孔吸附树脂（天津南开大学化工厂）；超滤系统（millipore，sd239/p34409）。
1.2 试剂
原儿茶醛对照品（110810200205，供含量测定用），丹酚酸b对照品（111562200706，供含量测定用）均购自 中国 药品生物制品检定所。乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 样品溶液的制备
2.1.1 原液
按处方量称取丹参、白术、佛手等药材，加入7倍量的水，提取3次，每次1 h。合并提取液，滤布（50 μm）滤过，浓缩，定容至3 000 ml，作为样品溶液ⅰ。
2.1.2 水提醇沉法
精密量取样品溶液ⅰ 100 ml，浓缩至50 ml（每毫升药液含1.0 g生药），加入乙醇使含醇量达50%，静置，冷藏24 h，滤过，滤液减压回收乙醇，加水定容至250 ml，作为样品溶液ⅱ。
2.1.3 壳聚糖絮凝法
精密量取样品溶液ⅰ100 ml，加水稀释至250 ml，加入30 ml壳聚糖醋酸溶液（称取壳聚糖1 g，加入2%的醋酸溶液100 ml，搅拌，静置24 h，备用），搅匀，静置24 h，离心，取上清液，加水定容至250 ml，作为样品溶液ⅲ。
2.1.4 超滤法
精密量取样品溶液ⅰ 100 ml，加水稀释至药液浓度0.05 g/ml，在120 kpa压力下，采用截留分子量为50 k的超滤膜滤过，滤液浓缩并定容至250 ml，作为样品溶液ⅳ。
2.2 总多糖含量测定
2.2.1 葡萄糖标准曲线的绘制
精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖0.055 6 g，加水溶解并定容于50 ml量瓶中，制成每1 ml含1.112 mg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml至50 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密吸取上述各浓度溶液2 ml，分别加入2%苯酚溶液1 ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5 ml，摇匀，静置5 min，至沸水浴中加热15 min，取出，快速用冷水冷却至室温。以水为空白，同样显色操作制备空白对照，于紫外可见分光光度计490 nm波长处测其吸光度。以葡萄糖毫克数为横坐标，以吸光度为纵坐标，得回归方程y=2.8122x+0.1406，r=0.9993。葡萄糖在0.02224～0.13344 mg范围内与吸光度呈良好线性关系。
2.2.2 供试品溶液制备
分别精密量取样品溶液ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ各100 ml，加乙醇使含醇量达85%，静置，滤过，滤渣分别用无水乙醇、丙酮洗涤，干燥，加水溶解并定容至25 ml，分别作为供试品溶液1、2、3、4。
2.2.3 稳定性考察
精密量取供试品溶液ⅰ 100 μl，置25 ml 刻度试管中，按“2.2.1”项下方法操作，测定吸光度，然后每隔30 min测定1次（n=6），150 min内吸光度基本不变，表明供试品在150 min内基本稳定。
2.2.4 含量测定
精密量取供试品溶液1、2、3、4各100 μl，置25 ml试管中，按“2.2.1”项下方法操作，测定吸光度， 计算 总多糖含量及转移率（见表1）。
2.3 总酚酸含量测定
2.3.1 供试品溶液制备［4］
精密量取样品溶液ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ各100 ml，调整药液浓度为0.3 g生药/ ml，离心，取上清液50 ml置已处理好的xda5型大孔吸附树脂柱（内径1.5 cm，长度10 cm，10 ml树脂湿法装柱）中，用2倍柱体积的水冲洗至流出液近无色，弃去水液，再用70%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，水浴蒸至近干，加水定容至20 ml，分别作为供试品溶液5、6、7、8。
2.3.2 测定波长选择
分别精密吸取原儿茶醛对照品及供试品溶液0.8 ml于 20 ml量瓶中，加入0.5%亚硝酸钠溶液5.0 ml，混匀，放置 12 min，再加入10%硝酸铝溶液0.5 ml，混匀，放置12 min后，加入1 mol/ml氢氧化钠溶液5.0 ml，加水稀释至刻度，摇匀，10 min后，用紫外可见分光光度计于 300～900 nm波长范围扫描，随行试剂为空白。结果对照品和供试品在490 nm波长处有一较大吸收峰，与 文献 报道的一致［5］。
2.3.3 原儿茶醛标准曲线的绘制
精密称取原儿茶醛对照品14.22 mg于25 ml量瓶中，加水溶解，定容至刻度，摇匀，即得。分别吸取原儿茶醛对照品溶液0.5、1、1.2、1.5、2 ml于 20 ml量瓶中，分别加入0.5%亚硝酸钠溶液5 ml，摇匀，放置 12 min后，加入 10%硝酸铝溶液0.5 ml，摇匀，放置 12 mim后，加入1 mol/l氢氧化钠溶液5.0 ml，加水稀释至刻度，摇匀， 10 mim 后，用紫外可见分光光度计于 490 nm波长处测定吸光度，以原儿茶醛毫克数对吸光度绘制标准曲线，得回归方程为：y＝0.9314x－0.0666，r＝0.9988。原儿茶醛在0.2844～1.1376 mg范围内与吸光度呈良好线性关系。
2.3.4 稳定性试验
精密量取供试品溶液5于20 ml量瓶中，按“2.3.3”项下方法操作，每间隔10 min测定1次，测定结果表明，显色后60 min内供试品基本稳定。
2.3.5 含量测定
精密量取供试品溶液5、6、7、8各100 μl，置25 ml刻度试管中，按“2.3.3”项下方法操作，测定吸光度， 计算 总酚酸含量及转移率（见表1）。
2.4 丹酚酸b含量测定
2.4.1 色谱条件与系统适用性
色谱柱：kromasil c18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：甲醇乙腈0.1%甲酸（24∶10∶66）；流速：1 ml/min；检测波长：286 nm；进样量：20 μl。
2.4.2 标准曲线绘制
精密称取丹酚酸b对照品11.590 mg，加75%甲醇溶解制成每1 ml含0.231 8 mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液5、10、20、30、40、60 μl注入液相色谱仪，测定丹酚酸b色谱峰面积，以丹酚酸b微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。丹酚酸b的回归方程为y=8.7932x-0.1881，r=0.9999。在0.464～13.908 μg范围内峰面积积分值与丹酚酸b微克数呈良好的线性关系。
2.4.3 含量测定
分别吸取对照品溶液、样品溶液ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液各20 μl 注入液相色谱仪中，测定峰面积，计算样品中丹酚酸b含量及转移率（见表1）。
2.5 总固体得率的测定
分别精密量取样品溶液ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ各50 ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱内105 ℃干燥5 h，于干燥器内冷却至室温，称定，待恒重时，精密称重，计算总固体得率及转移率（见表1）。表1 不同精制方法比较结果（略）
表1结果显示，水提液采用水醇法处理，总多糖、总酚酸损失较多，转移率仅分别约为33%和70%；超滤法、壳聚糖絮凝法处理，总多糖、总酚酸转移率较高；三种方法处理后，丹酚酸b转移率均较高。由于壳聚糖絮凝法具原料用量少、价廉且操作简单等特点，故综合考虑，确定复方贞术调脂胶囊水提取液采用壳聚糖絮凝法精制。
3 讨论
3.1 由于复方药物成分复杂，样品颜色较深，易对显色反应产生影响，导致含量测定不准确，故在总酚酸含量测定前通过大孔吸附树脂对样品溶液进行纯化，富集有效部位，消除干扰，使结果更准确、可靠。总酚酸含量测定通常采用紫外可见分光光度法，实验中发现，如果以三氯化铁铁氰化钾为显色剂，干扰因素较多，稳定性较差；以亚硝酸钠—硝酸铝显色，灵敏度较高，稳定性好，故采用亚硝酸钠—硝酸铝作为显色剂。
3.2 采用壳聚糖絮凝法对复方贞术调脂胶囊水提液精制处理，既保留了酚酸类、多糖等有效成分，又去除了杂质，与醇沉法相比，具有有效成分转移率高、工艺简单、成本低等优点；与超滤法相比，则克服了膜污染严重，使用寿命低，成本高等不足。壳聚糖作为天然澄清剂，利用电荷和大分子的架桥作用，在最大限度保留有效成分的同时，去除溶液中的不溶性颗粒、鞣质、蛋白质和树脂等杂质，且加入量少，成本低，安全无毒，在中药提取液的纯化领域具有较好的应用前景。
【 参考 文献】
［1］唐春萍,郭姣.调脂灵对高脂血症大鼠脂代谢酶及载脂蛋白的影响［j］.广东药学院学报,2007,23(2):175-177.
［2］唐春萍,郭姣,杨超燕,等.调脂灵对高脂血症大鼠脂质过氧化、血液流变学的影响［j］.中药材,2007,30(7):837-839.
［3］唐春萍,郭姣.调脂灵对高脂血症大鼠降脂作用实验研究［j］.
