【摘要】 目的： 研究 褪黑素（mt）对睡眠剥夺大鼠胃黏膜损伤的 影响 及其可能机制. 方法 ：将20只sd大鼠随机分为两组：对照组（睡眠剥夺+生理盐水腹腔注射）和实验组（睡眠剥夺+mt腹腔注射）. 采用小站台水环境法建立大鼠睡眠剥夺模型. 睡眠剥夺期间每日早8：00实验组腹腔注射mt（15 mg/kg），对照组腹腔注射等体积生理盐水. 睡眠剥夺5 d后，测定各组血浆以及胃黏膜匀浆丙二醛（mda）的含量及超氧化物歧化酶（sod）的活性；测定胃黏膜损伤指数（ui）并在光镜下观察组织学变化. 结果：实验组与对照组比较，胃黏膜损伤明显减轻，胃黏膜损伤指数显著降低（p<0.01），血浆、胃黏膜组织匀浆sod活性显著升高（p<0.01），血浆、胃黏膜组织匀浆mda含量显著降低（p<0.01）. 结论：mt对睡眠剥夺导致的胃黏膜损伤有保护作用，其机制可能与mt清除胃黏膜自由基有关.
【关键词】 褪黑素；睡眠剥夺；胃黏膜损伤
【abstract】 aim: to explore the effect of melatonin (mt) on sleep deprivation (sd)induced gastric mucosal lesions in rats and the mechanism. methods: twenty sprague dawley rats were randomly divided into 2 groups: control group (sd+sodium chloride) and experimental group (sd+mt). sd was induced in the rats housed on small platform overwater. the 2 groups were given intraperitoneal injection of mt (15 mg/kg) and equal volume sodium chloride, respectively, at 8:00 p.m every day during sd. after 5 d sd, malondialdehyde (mda) and superoxide dismutase (sod) in blood plasma and gastric mucosa of the rats were measured by the radioimmunoassay and histochemical method. the gastric mucosal changes in each group were observed, and the mucosal lesion index, histological changes were evaluated. results: the mucosal damage was slighter in the experimental group than that in the control group. the mucosal lesion index decreased significantly (p<0.01), the plasma levels of sod increased significantly (p<0.01), the plasma levels of mda decreased significantly (p<0.01) in the experimental group as compared with those in the control group. conclusion: mt is effective in preventing sdinduced gastric mucosal lesion. the mechanism may be related with the decrease of gastric mucosal free radical by mt.
【keywords】 melatonin; sleep deprivation; gastric mucosal lesion
0 引言
睡眠剥夺作为一种强烈的应激源，对机体可产生生理和心理应激反应，以致造成多方面的负面影响［1-2］. 研究［3］表明，睡眠剥夺不仅对中枢神经系统有重要影响，还能够引起急性的消化系统疾病. 褪黑素(melatonin, mt)是由松果腺分泌的一种神经激素，具有抗自由基、抗氧化作用. 据报道mt对枪击噪声所致大鼠胃黏膜损伤有保护作用［4］，但其对睡眠剥夺大鼠的应激性溃疡作用尚不明确. 我们探讨mt对睡眠剥夺大鼠胃黏膜损伤的作用，旨在为 治疗 和预防睡眠剥夺对消化功能产生的影响提供实验依据.
1 材料和方法
1.1 材料 健康雄性sd大鼠20只，体质量(230±20) g（第四军医大学实验动物中心提供），在7 d环境适应期后随机分为实验组（模型+mt腹腔注射）和对照组（模型+生理盐水腹腔注射），每组10只. mt（美国sigma公司）；超氧化物歧化酶（sod）、丙二醛（mda）试剂盒（南京建成生物技术公司）.
1.2 方法
1.2.1 给药 睡眠剥夺期间，实验组于每日8:00腹腔注射mt，剂量为15 mg/kg，配制成2 ml溶液，给药；对照组在相同时间腹腔注射生理盐水2 ml.
1.2.2 睡眠剥夺动物模型的制备 采用小平台水环境法建立大鼠睡眠剥夺模型. 制作30 cm×30 cm×40 cm的鼠箱，其中有一直径2.5 cm,高8.0 cm的平台，在平台周边注满水，水温保持在20℃左右，水面距平台面约1.0 cm. 大鼠在平台上可自行饮食饮水，若其睡眠，则由于肌肉张力松弛而落入水中，在大鼠活动空间内持续40 w日光灯照射，室内温度控制在18℃～22℃. 实验前让鼠熟悉适应环境1 wk. 连续睡眠剥夺5 d.
1.2.3 血液生化指标的检测 睡眠剥夺结束后立即将大鼠麻醉，心腔取血，离心、分离血浆，采用比色法测定sod，mda，严格按照试剂盒及仪器说明书由一人完成检测.
1.2.4 胃黏膜损伤指数的测定 取血后，于剑突下正中剪开腹壁，暴露鼠胃，切下全胃，沿大弯侧剪开胃壁,用生理盐水冲洗干净，按照 文献 ［5］的标准评定损伤指数：<1 mm为1分，1～<2 mm为2分，2～<3 mm为3分，3～<4 mm为4分. 4 mm以上即分段测量,按上述方法计分,全胃得分之总和即为溃疡指数.
1.2.5 胃黏膜取材 胃黏膜损伤指数测定完毕后，在损伤明显处取组织，石蜡包埋，做病理切片并在光镜下观察. 用玻片将胃黏膜轻轻刮下，置于2 ml生理盐水中，研碎成匀浆，3000 r/min离心5 min，弃残渣留取上清液，分别测定sod活性及mda含量.
统计学处理：所有数据均以x±s表示，结果采用spss 10.0统计软件进行t检验.
2.1 大鼠胃黏膜损伤指数及血浆sod，mda含量测定测定 结果显示，胃黏膜损伤指数实验组显著小于对照组（p<0.01）； 实验组血浆、 胃黏膜组织中sod含量明显高于对照组， 两组差异具有统计学意义（p<0.01）； 实验组血浆、 胃黏膜组织中mda含量明显低于对照组， 两组差异具有统计学意义（p<0.01, 表1）.
bp<0.01 vs对照.
2.2 胃黏膜的组织学改变 对照组大鼠胃黏膜结构排列紊乱失去完整性及连续性，部分区域黏膜上皮层缺失，腺体排列疏松，腺体细胞水肿，可见黏膜下层有出血，血管内充血，有炎性细胞浸润（图1a）；实验组大鼠胃黏膜连续性完整，无炎细胞浸润，细胞无变性、水肿（图1b）.
a：对照组；b：实验组.
