【摘要】 目的 了解广东省健康人群血清中百日咳、白喉和破伤风（简称百、白、破）抗体水平，为百、白、破防控提供依据。方法 采取分层整群抽样法抽出潮州市、汕尾市、深圳市等三个地区部分健康人群，采用间接elisa法（定量）检测正常人血清中百、白、破igg抗体水平。结果 三个地区健康人群百日咳igg抗体阳性率为54.1%，白喉igg抗体保护率为76.4%，破伤风igg抗体保护率为77.2%。结论 广东省三个地区健康人群百日咳igg抗体阳性率较低，部分地区白喉及破伤风抗体保护率比较低，白喉及破伤风抗体保护率有随着年龄的升高而降低的趋势，提示我们要加强百、白、破的接种率和接种质量。
【关键词】 百日咳；白喉；破伤风；抗体水平；调查；elisa
results of monitoring of antibody levels of pertussis, dipheria and tetanusin healthy population in guangdong province.
liu mei-zhen, tan hai-ling, he chang-wen, et al.
guangdong provincial center for disease control and prevention, guangzhou 510300, guangdong, p. r.china
abstract：objective to understand the levels of antibodies against pertussis, diphtheria and tetanus in the healthy population in guangdong province and provide scientic basis for immunization strategy. methods samples were collected from population of the cities of chaozhou, shanwei and shenzhen and antibody levels were detected by using elisa. results the positive rate of igg against pertussis was 54.1%. the protective rates of antibody against diphtheria and tetanus were 76.4% and 77.2%,respectively. conclusion the positive rates of antibody to pertussis were low in guangdong province. the protective rates of antibody to diphtheria and tetanus were low also in some areas of guangdong province and the antibody level tends to decrease along with the increase of age,suggesting that vaccination rates and quality be enhanced.
key words：pertussis; diphtheria; tetanus; antibody level; survey; elisa
为了解广东省健康人群百日咳、白喉和破伤风(简称白、百、破)抗体水平，评价预防接种质量，通过对3个地方健康人群进行了检测，现将结果报告如下。WWW.11665.COm
1 材料与方法
1.1 监测对象及标本采集
潮州市及汕尾市的监测对象为2～4岁、6～8岁及13～15岁等3个年龄组儿童。要求各年龄组儿童随机抽取50人。深圳罗湖的调查对象为1～4岁流动儿童及本地儿童。每人采集静脉血3ml，分离血清，置-20℃冰箱保存待检。
1.2 检验方法和判断标准
采用间接elisa法检测健康人群中百日咳、白喉和破伤风igg抗体水平（定量），试剂盒购自德国serion公司，均在有效期内使用，按照试剂盒说明书操作。白喉和破伤风试剂盒分别检测血清中的相应抗毒素igg抗体水平，测定结果以iu/ml单位表示，并与免疫保护的状态相对应。根据试剂盒推荐的抗毒素浓度评估标准，本文以白喉抗毒素以≥0.1iu/ml为达安全保护水平；破伤风抗毒素以≥0.1iu/ml达保护水平，分别计算白喉及破伤风抗体保护率。与白喉和破伤风不同，对于百日咳其血清学保护抗体的水平没有临界值范围的明确定义，百日咳抗体水平按试剂盒标准判断为阳性、阴性（临界归在阴性），计算其阳性率。
1.3 仪器设备
采用bio-rad酶标仪测定各孔od值，波长405nm ，参考波长655nm。
2 结果
此次共对368名儿童的血样分别检测百日咳、白喉和破伤风igg抗体。广东省三个地区人群百日咳igg抗体总阳性率为54.1%，白喉igg抗体保护率为76.4%，破伤风igg抗体保护率为77.2%。
2.1 百日咳igg抗体水平
广东省三个地区人群百日咳igg抗体的阳性率以汕尾市为高，100%，深圳罗湖阳性率为45.1%，潮州市最低，为40%。三个地区健康人群百日咳抗体阳性率差异有显著性（χ2=102.76，p<0.01）。不同年龄组百日咳抗体阳性率随年龄的升高而升高，各年龄组百日咳抗体阳性率差异有显著性（χ2=102.76，p<0.01）。
2.2 白喉抗毒素水平
广东省不同地区人群白喉igg抗体保护率从高到低依次为深圳市罗湖87.5%、汕尾市73.0%、潮州市为67.3%。不同地区白喉抗体保护率差异有显著性（χ2=17.14，p<0.01），见表1。不同年龄组白喉抗体保护率随年龄的升高而降低，各年龄组白喉抗体保护率差异有显著性（χ2=25.02，p<0.01），见表3。表1 广东省不同地区人群白喉igg抗体保护率地 区检查（略）注:*上表中用国际单位进行分级是以中和试验中抗白喉毒素抗体为基础的。表2 广东省不同地区人群破伤风igg抗体保护率地区检查（略）注:*上表中以国际单位表示的数据是在小鼠体内试验基础上检测得到的抗破伤风毒素抗体数值。表3 不同年龄组人群百日咳、白喉、破伤风的抗体水平年龄组（略）
2.3 破伤风抗毒素水平
广东省不同地区人群破伤风igg抗体保护率从高到低依次为深圳市罗湖95.1%、汕尾市75.7%、潮州为60.7%,见表2。不同年龄组破伤风抗体保护率随年龄的升高而降低，各年龄组破伤风抗体保护率差异有显著性（χ2=94.81，p<0.01），见表3。
3 讨论
根据中华人民共和国卫生部1998年版的《计划免疫技术管理规程》，目前用于检测人群中百、白、破抗体水平和检测dpt联合制剂免疫效果的方法为间接血球凝集试验和微量凝集试验。但也有文献认为，由于间接血凝反应结果不够稳定，重复性较差，还需要改进和完善，因此尚未能完全代替经典的动物法。公认的白喉抗体保护水平是0.01iu/ml血清。0.01iu/ml血清的保护水平是要求用经典的家兔皮内法测定，用血细胞凝集试验方法测定，不能以0.01单位为保护水平，而且也不能用iu来表示，因两种方法所测得的结果是不等值的。目前还没有一个公认的用血细胞凝集试验测定的保护水平抗体值。为了解广西省人群百、白、破抗体水平，首次采用德国赛润的进口elisa试剂盒直接对血清中抗白喉及破伤风毒素及百日咳抗体进行定量检测并进行评价。
本次调查对368份不同年龄组健康人进行百日咳抗体的测定，总阳性率为54.1%，汕尾市百日咳igg抗体的阳性率最高，为100%，潮州及深圳两地抗体水平均低于国家要求的75%的指标。不同年龄组阳性率差异有显著性，总趋势随年龄的升高而升高。三个地区百日咳疫苗的使用情况不清楚，是免疫效果差或者疫苗本身的不同造成的差异尚待进一步调查。因百日咳杆菌的抗原比较复杂，不同种类及不同厂家生产的无细胞百白破联合疫苗(dtａp)其百日咳抗原的组成及含量均不相同，反映免疫效果的指标也不同。目前，我国主要采用全细胞百白破联合疫苗(dtｗp)或无细胞百白破联合疫苗(dtａp)用于预防百日咳、白喉、破伤风三种疾病。不同种类疫苗其抗原成分不同，dtｗp和dtａp两种疫苗的相同之处在于都含有相同的白喉和破伤风类毒素，不同之处在于百日咳的抗原成分不同，dtｗp所含百日咳的主要成分是凝集原(agg)1、2、3型，而dtａp所含百日咳的主要成分为百日咳毒素(pt)和丝状血凝素(fha)及少量agg。新dpt疫苗(dtａp)配制时去除了百日咳全菌体疫苗中的有害成分，在保持免疫效果的同时，全身和局部副反应的发生率也明显降低了［1］。按照卫生部《计划免疫技术管理规程》(1988年版)规定，考核百日咳的血清学免疫效果采用百日咳凝集试验。对使用dtｗp的地区仍然适应，而对使用dtａp的地区来说应用酶联免疫吸附试验(elisa)检测血清中抗pt和抗fha抗体［2］。
本文表1中“＜0.1iu/ml”表示最低限度的保护，需进行基础免疫或加强免疫；“0.1～1.0iu/ml”表示有安全保护作用，建议加强免疫；“＞1.0iu/ml”表示有长期保护作用，5年以后加强免疫。对368份血清抗白喉毒素人抗体的定量测定，以白喉抗毒素≥0.1iu/ml为达安全保护水平，则人群对白喉总的保护率为76.4%，其中深圳罗湖区儿童的保护率最高，为87.5%。不同年龄组白喉抗体保护率差异有显著性，总趋势随年龄的升高而降低。表2中“＜0.1iu/ml”表示没有免疫或没有安全免疫保护，需进行基础免疫或加强免疫；“0.1～0.5iu/ml”表示有效的免疫保护，建议加强免疫；“0.5～1.0iu/ml”表示有效的免疫保护，不需加强免疫，因为如果抗体滴度＞0.5iu/ml，进行免疫可引起副作用；“＞1.0iu/ml”表示有长期保护作用（维持5～10年）。对368份血清中人抗破伤风毒素抗体的定量测定，以破伤风抗毒素≥0.1iu/ml达有效保护水平，则人群对破伤风抗体总的保护率为77.2%，深圳罗湖区儿童的保护率最高，为95.1%。不同年龄组破伤风抗体保护率差异有显著性，总趋势随年龄的升高而降低。这跟用常规间接血凝方法测定的结果一致［3］。结果提示随年龄的增高人群对白喉、破伤风易感性增强，应加强7岁时白破二联疫苗免疫。
不同地区百白破抗体水平的测定结果表明，除百日咳抗体水平汕尾市较高外，深圳罗湖区白喉、破伤风抗体水平明显比潮州、汕尾两地高。潮州及汕尾调查地点均为农村，而深圳罗湖为城市地区，分析可能是城市接种周期短，冷链运储条件好，经济条件较好，工作人员素质高，群众易接受等有关。
参加本次调查工作的有潮州、汕尾及深圳等县、市疾病预防控制中心相关科室的同志，管大伟对数据的统计提供帮助，谨此致谢！
【参考文献】
［1］李小帆,陈丽,陈慧林.新老两种百白破疫苗免疫接种反应的对照观察［j］.广东医学院院报，2006,24(3):287～288.
［2］朱建琼,王莹. 两种百白破联合疫苗基础免疫后百日咳凝集抗体和白喉抗体监测分析［j］. 中国计划免疫, 2004,10(2):84～86
［3］许崇山.深圳市南山区2002年百日咳、白喉、破伤风人群免疫水平调查分析［j］. 中国计划免疫,2003，6（9）：367.
