【摘要】 目的 探讨骨桥蛋白（osteopontin, opn）在卵巢恶性肿瘤组织中的表达及其与临床病理特征的关系。 方法 采用免疫组化方法检测opn在54例卵巢恶性肿瘤组织，20例交界性卵巢肿瘤组织，20例良性卵巢肿瘤组织和10例正常卵巢组织中的表达。 结果 opn在恶性卵巢肿瘤组织中的阳性表达率为77.80％，显著高于交界性卵巢肿瘤的35％和良性卵巢肿瘤的15％，差异有统计学意义（p<0.01）。opn在正常卵巢组织中无表达。opn在ⅲ～ⅳ期卵巢肿瘤组织中的表达明显高于ⅰ～ⅱ期（p＝0.029）；在有卵巢外转移组中的表达明显高于无转移组（p＝0.019）。opn表达阳性组患者的累积生存率明显低于opn阴性组（p＝0.038）。opn表达是患者生存时间的独立影响因素。 结论 opn在卵巢恶性肿瘤的发生、发展、浸润、转移中起重要作用。opn的表达可作为判断卵巢恶性肿瘤患者预后的指标之一。
【关键词】 骨桥蛋白;卵巢恶性肿瘤;预后;免疫组织化学
expression and clinical significance of osteopontin in ovarian tumor
tan tonghuan1, guan ting1 ,kuang yulan1,zhang wei2
1.department of obstetrics and gynecology, guangzhou general hospital of guangzhou military command, guangzhou 510010,china, 2.department of pathology abstract：objective to investigate the expression of osteopontin(opn) and its clinicopathological significance in ovarian tumors. methods the expression of opn was detected by immunohistochemistry method. in 54 cases of ovarian malignant tumor tissues, 20 cases of ovarian borderline tumor tissues, 20 cases of ovarian benign tumor tissues and 10 cases of normal ovarian tissues. results the positive expression rate of opn was 77.80% in ovarian malignant tumors, much higher than ovarian borderline tumors（35％）and ovarian benign tumors（15%）,（p<0.01）. there was no opn expression in normal ovarian tissues. the positive rate of opn expression was dramatically higher in stage ⅲ～ⅳ tumor tissues than that in stageⅰ～ⅱ ones（p＝0.029）.the expression of opn was also significantly higher in the patients with out metastasis than that in the patients with no metastasis (p＝0.019). the overall survival of the patients with opn positive expression was significantly shorter than that of the negative ones（p＝0.038）. opn expression was independent factor to decrease overall survival. conclusionoverexpression of opn may play an important role in the malignant transformation,development,invasion and metastasis of ovarian cancer. it has a potential clinical significance as a prognostic marker in ovarian cancer patients.
key words：osteopontin; ovarian malignant carcinoma; prognosis; immunohistochemistry
骨桥蛋白（osteopontin opn）是近年研究发现的一种具有多种生物学功能的磷酸化酸性分泌型糖蛋白，它能促进细胞的趋化、黏附和迁移。Www.11665.COm已发现其在肝癌、食管癌、肺癌等恶性肿瘤组织中高表达，且与肿瘤的侵袭、转移等恶性行为密切相关[13]。卵巢癌是妇科恶性肿瘤中威胁最大的疾病。关于卵巢恶性肿瘤与opn的关系国内外研究较少。本研究采用免疫组化方法检测卵巢恶性肿瘤组织中opn的表达并探讨其与临床病理特征和患者预后之间的关系。
1 资料与方法
1.1 资料
选择1997年1月～2007年3月在我院妇科手术治疗的卵巢恶性肿瘤患者54例（浆液性囊腺癌23例，黏液性囊腺癌9例，子宫内膜样腺癌7例，移行细胞癌6例，透明细胞癌5例，内胚窦瘤4例），平均年龄(53±7.45)岁。根据figo，2000年卵巢恶性肿瘤的临床病理分期和病理分级标准，54例卵巢恶性肿瘤中，ⅰ期7例，ⅱ期7例，ⅲ期30例，ⅳ期10例；高分化者7例，中分化者15例，低分化者32例。选择同期交界性卵巢肿瘤患者20例（交界性浆液性囊腺瘤11例，交界性黏液性囊腺瘤9例），平均年龄(50±8.21)岁。选择良性卵巢肿瘤患者20例（卵巢浆液性囊腺瘤13例，黏液性囊腺瘤7例），平均年龄(52±5.69)岁。选择因子宫肌瘤或一侧卵巢疾病行双侧卵巢切除的患者10例，取其正常卵巢组织，平均年龄(50±7.29)岁。所有病例均经病理证实，均无严重内科疾病或其他恶性肿瘤，术前未接受放疗或化疗。对恶性肿瘤组中24例进行追踪随访，随访时间2～95月，平均50.54月。
1.2 方法
切除标本经10％甲醛固定，石蜡包埋，2μm连续切片，一张行he染色，一张行免疫组化检测。免疫组化采用envision法，envision试剂盒由基因公司提供。具体方法：切片脱蜡水化，双氧水阻断内源性酶，edta8.0缓冲液微波修复，室温冷却20min，加鼠抗人opn单克隆抗体（北京中杉公司），置湿盒37℃孵育40min，加envision试剂盒的二抗，置湿盒37℃孵育30min，dab显色液显色1～2min，加入苏木素复染液中复染4min，盐酸分化，酒精干燥，to透明，中性树胶封片。试剂要求的乳腺癌组织的免疫组化片作为阳性对照，pbs代替一抗所做的免疫组化片作为阴性对照。
1.3 结果判断
opn定位于细胞浆中，呈棕黄色，细胞核不着色。阳性染色指显微镜下观察细胞内具有清晰可见的定位准确的棕黄色颗粒而背景清晰。参照mattern等[4]提出的半定量方法，从两方面进行评分：（1）染色深浅度。未见染色为0，轻度染色为1，中度染色为2，深度染色为3。（2）染色细胞的百分比。未见染色细胞为0，染色细胞<25％为1，染色细胞25％～50％为2，染色细胞>50％为3。将这两方面评分相加计总分。0～1分为（－）， 2～4分为（+），>4分为（++）。每例的评分均为高倍（×400）镜下观察10个视野求得的平均分。
1.4 统计学方法
等级资料用秩和检验，kaplanmeier法计算累积生存率及中位生存时间，并绘制生存曲线，logrank检验比较各组生存曲线有无差异，cox模型进行生存分析，所有数据分析均在spss 14.0统计软件上进行。
2 结果
2.1 opn在恶性、交界性及良性卵巢肿瘤组织中的表达
opn定位于胞浆中，在恶性卵巢肿瘤组织中的阳性表达率高于交界性、良性卵巢肿瘤组织和正常卵巢组织，opn在交界性和良性卵巢肿瘤组织中的表达差异无统计学意义，但均高于在正常卵巢组织中的表达，见表1、图1。表1 opn在恶性、交界性及良性卵巢肿瘤组织中的表达
2.2 opn在卵巢恶性肿瘤组织中的表达及其与临床病理特征的关系
2.2.1 opn在不同类型卵巢恶性肿瘤组织中的表达 opn在不同类型卵巢恶性肿瘤组织中的表达差异无统计学意义，见表2。表2 opn在不同类型卵巢恶性肿瘤组织中的表达
2.2.2 opn表达与卵巢恶性肿瘤临床病理特征的关系 opn在ⅲ～ⅳ期卵巢恶性肿瘤组织中的表达高于ⅰ～ⅱ期（p=0.029），见表3。在有卵巢外表3 opn在卵巢恶性肿瘤组织中 的表达与临床病理特征的关系*：because of long time,a small pieces of message are lost转移组中的表达高于无转移组，差异有统计学意义（p=0.019）。opn表达与年龄、细胞分化、卵巢与周围组织有无粘连、有无腹水、肿瘤包膜完整与否无关（p>0.05）。
2.3 opn表达与患者生存情况的关系
opn阳性组的累积生存率明显低于阴性组，opn阳性表达组的中位生存时间为44个月，而阴性组为58个月（logrank检验，χ2＝4.288，p＝0.038），见图4。
图4 opn阳性组和阴性组的生存曲线
fig 4 survival curves of opn positive and negative
expression groups
2.4 opn的表达对判断预后的意义
cox模型多因素分析结果显示，年龄、有无卵巢外转移、肿瘤包膜是否完整及opn阳性表达对患者生存时间的影响差异有统计学意义，见表4。表4 影响患者生存时间因素的cox模型分析
3 讨论
opn是首先在骨基质中发现的,它存在于正常人的所有体液和矿化组织的蛋白基质中，但含量很少，仅发挥其生理作用。人opn共有314个氨基酸，分子量为41～75kda，依分子中磷酸化及糖基化而定，opn有一个n端信号序列及甘精甘天冬丝氨酸细胞黏附序列，并且含多个功能结合区，如钙结合域、凝血酶裂解位点及整合素结合序列等，在细胞的黏附、迁移、炎性反应、信号转导、组织修复及细胞凋亡中起重要作用[5]。
近年研究发现，在人类多种恶性肿瘤组织中出现opn蛋白过量表达的现象。但关于卵巢肿瘤组织中opn表达的研究报道较少,国内仅见少数报道[6]。本研究结果显示opn在卵巢恶性肿瘤组织中高表达,阳性表达率为77.80％，明显高于交界性卵巢肿瘤的35％和良性卵巢肿瘤的15％，差异有统计学意义。opn在正常卵巢组织中无表达。提示opn的高表达与细胞的恶性转化密切相关。opn在正常卵巢组织、良性、交界性和恶性卵巢肿瘤组织中的表达逐渐增高，说明opn与卵巢恶性肿瘤的发生、发展密切相关。opn在ⅲ～ⅳ期卵巢肿瘤组织中的表达明显高于ⅰ～ⅱ期，在有卵巢外转移组中的表达明显高于无转移组，提示opn在肿瘤发展及浸润、转移中起重要作用。对24例病人的追踪随访结果显示，opn阳性组的累积生存率明显低于opn阴性组，其中位生存期分别为44个月和58个月。多因素分析显示opn阳性表达是影响患者生存时间的独立因素，提示opn的表达可作为判断预后的指标之一。opn在不同类型卵巢恶性肿瘤组织中的表达差异无统计学意义，说明opn的表达与肿瘤组织来源无关，是肿瘤所共有的。这与opn在其他器官的恶性肿瘤组织中也高表达相符合。
关于opn在肿瘤发生、发展中的具体作用机制目前仍不很清楚。有研究发现opn通过信号转导途径促使肿瘤细胞快速通过生长周期，加快增殖。opn能介导肿瘤细胞黏附，并且结合整合素激活相关信号通路引起肿瘤细胞分泌基质金属蛋白酶等降解细胞外基质，引发细胞骨架蛋白和信号蛋白等磷酸化，促进细胞迁移，进一步促进肿瘤细胞的浸润、转移。opn还通过改变宿主免疫反应，削弱免疫细胞肿瘤杀伤作用。还可以通过增强细胞抗凋亡作用，促进肿瘤新生血管形成等促进肿瘤的发生、发展[710]。
目前骨桥蛋白正引起肿瘤学者的关注。相信随着研究的不断深入，opn可能会成为辅助肿瘤诊断和判断预后的一个标志物，并且可能为肿瘤的治疗提供一个新靶点。
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