【摘要】 ［目的］ 观察血脂正常的不同er-α基因型别绝经妇女补充钙和大豆异黄酮片剂（不含蛋白）一年后机体血脂成分的变化。［方法］ 从武汉郊区绝经妇女中筛选60例血脂正常但骨量减少或骨质疏松的绝经妇女为受试对象随机分为两组，每组各30人，并确定其er-α基因pvuⅲ和 xbaⅰ酶切型别。一组给予液体钙440mg/d，vd 100iu/d；另一组给予液体钙440mg/d，vd 100iu/d和大豆异黄酮片剂100mg/d（不含蛋白），跟踪1年。测定每位受试对象各血脂成分，包括甘油三脂（tg）、总胆固醇（cho）、低密度脂蛋白胆固醇（ldl）和高密度脂蛋白胆固醇（hdl）。［结果］ 补钙和补钙＋大豆异黄酮均能显著性降低血总胆固醇（p<0.05）。px 单倍体型的tg在补钙＋大豆异黄酮后下降，而补钙组non-px单倍体的tg升高，两者间差异有显著性（p<0.05）；px 单倍体型的hdl在补钙＋大豆异黄酮后升高，而补钙组non-px单倍体的hdl下降，两者间有显著性差异（p<0.05）。［结论］ 足量的钙和适量的大豆异黄酮摄入不仅有益于绝经妇女的骨骼代谢，还可影响血脂代谢，且因er-α基因酶切型别而异。
【关键词】 er-α基因；绝经妇女；血脂；钙；大豆异黄铜
changes of serum lipid components after supplement of calcium or soy isoflavone in postmenopausal women with different er-α genotypes
huang zhen-wu1, dong jie1, gong jie2, et al.
（1.institute of nutrition and food safety, chinese center for disease control and prevention, beijing 100050, china; 2.wuhan centers for disease prevention and control, wuhan 430023, china)
abstract: ［purpose］ to investigate the changes of serum lipid components after one-year supplement of calcium or calcium and soy isoflavone (without soy protein) in normal serum lipid of postmenopausal women with different er-α genotypes. ［methods］ sixty postmenopausal women with normal serum lipid levels but bone loss or even osteoporosis in wuhan were enrolled. their er-α genotypes were identified. they were randomly divided into two groups (each with 30 cases ). group 1, calcium 440mg/d+vitamin d 100iu/d for one year; group 2, calcium 440mg/d+vitamin d 100iu/d+soy isoflavone 100mg/d for one year. the serum lipid components, including triglyceride (tg), cholesterol (cho), low density lipoprotein cholesterol(ldl) and high density lipoprotein cholesterol (hdl) were detected. ［results］ both of calcium supplementation and calcium plus soy isoflavone supplementation could significantly reduce total cholesterol (p<0.05). the serum triacylglycerol ascended in women with non-px haplotype in group 1 after 1 year intervention（0.17±0.34）, but declined in women with px haplotype in group 2（-0.47±0.82）(p<0.05). the hdl descended in women with non-px haplotype after 1 year intervention in group 1（-0.18±0.42）, but raised in women with px haplotype in group 2（0.17±0.48）(p<0.05). ［conclusion］ rational calcium and soy isoflavone supplement may affect serum lipid components, but it is different in various er-α genotypes.
key words: er-αgenotype; postmenopausal women; serum lipid component
妇女绝经后，伴随着体内内源性雌激素的减少，不仅机体骨骼骨量加速减少，骨密度（bone mineral density，bmd）明显减低，而且脂蛋白的代谢也发生改变，总胆固醇和低密度胆固醇增加，高密度胆固醇降低，加大了患心血管疾病的危险性。WWw.11665.Comxing-gang zhou等[1]对8个独立的随机对照研究的结果进行meta分析后认为，异黄酮能不依赖于大豆蛋白起到降低低密度胆固醇的作用。但有学者认为提取的大豆异黄酮片剂并不能显著降低血清总胆固醇，含有异黄酮的大豆蛋白对血脂的保护作用也与其摄入的水平、持续的时间以及受试者的起始血脂浓度有关[2]。另有学者报道，补钙可以使高密度脂蛋白胆固醇升高，总胆固醇降低[3,4]。大豆异黄酮是通过雌激素受体（estrogen receptor，er ）发挥作用。er-α基因呈多态性分布，包括限制性内切酶pvu ⅲ和 xbaⅰ酶切型别等多种型别。本研究在开展补钙和大豆异黄酮预防绝经妇女骨骼骨质疏松的干预研究时，发现血脂正常的绝经妇女血脂成分也在补钙和大豆异黄酮干预前后发生了一些变化，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象
在武汉市郊区招募绝经期超过1年的绝经妇女约800人。采取全血、血清和白细胞。近期未接触钙、雌激素和大豆异黄酮等药品或保健品。
1.1.1 基线血脂测定
测定指标：血清甘油三脂（tg）、总胆固醇（cho）、低密度脂蛋白胆固醇（ldl）和高密度脂蛋白胆固醇（hdl）。
试剂盒和测定方法：试剂盒均购自中生北控生物科技股份有限公司。采用自动生化分析仪分析，hdl-c和ldl-c均采用清除法；tg和cho均从采用酶比色法。
标准：cho 小于5.20mmol/l；tg小于1.71mmol/l。
1.1.2 测定骨骼骨密度(bmd)
用美国norland-xr-36型双能x线吸收仪测量腰椎（12～14）的bmd。
标准：均值±1标准差与均值±2标准差之间（x±1s～2s）为骨量减少；低于均值±2标准差（<x±2s）为骨质疏松症。< p>
1.1.3 确定er-α基因pvuⅲ和 xbaⅰ酶切型别
引物：根据参考文献提供的引物序列由上海生物工程有限公司合成。引物序列如下：5′-ctgccaccctatctgtatcttttcctattctcc-3′； 5′-tctttctctgccaccctggcgtcgattatctga-3′。
pcr反应条件：94℃变性5min；94℃ 30s，61℃ 40s，72℃ 90s，共30个循环；72℃延伸10min。扩增产物长度1300bp。
er-α的pvuⅲ酶切反应体系和型别鉴别：0×buffer 2μl，pvuⅱ2 unit，dna 5μl，加灭菌水12μl至总体积20μl。37℃水浴3h。pp型为1.3kb大小的一条电泳带；pp型为1 300bp、850bp和450bp大小的三条电泳带；pp型为850bp和450bp大小的两条电泳带。
er-α的xbaⅰ酶切反应体系和型别鉴别：10×buffer 2μl，0.1％bsa 2μl，xbaⅰ3 unit，dna 5μl，加灭菌水10μl至总体积20μl。37℃水浴3h。xx型为1.3kb大小的一条电泳带；xx为1300bp、900bp和400bp大小的三条电泳带；xx型为900bp和400bp大小的两条电泳带。
1.2 干预分组和干预1年后血脂的测定
分组和干预措施：60名血脂正常且骨骼骨量减少或骨质疏松症的绝经妇女随机分为两组：一组口服液体钙440mg/d，vd 100iu/d；另一组口服液体钙440mg/d，vd 100iu/d和大豆异黄酮片剂100mg/d（不含蛋白），跟踪观察1年。1年后测定研究对象的血脂成分。因各种原因，18名研究对象丢失数据：患甲状腺疾病和妇科疾病等终止干预3名；未能坚持口服六个月的5名；最后采血时未到或采血溶血各5名。
测定指标：tg、cho、ldl和hdl。
试剂盒和测定方法：同前。
1.3 统计方法
各观测指标的变化＝干预1年时数据-基线数据。数据表示为x±s。组间各指标比较用t检验、方差分析或非参检验，α= 0.05。组内干预前后比较采用配对t检验，α= 0.05。
2 结 果
2.1 基线时基本情况
基线时钙组和钙＋大豆异黄酮组在年龄、绝经年限、体重、bmi及膳食摄入方面无显著性差异（p>0.05）。见表 1。
2.2 补钙和补钙＋大豆异黄酮对血脂的影响
补钙和补钙＋大豆异黄酮能显著性降低血总胆固醇（p<0.05）；与干预前相比，无论补钙组还是补钙和大豆异黄铜组，干预1年后，绝经妇女血cho的变化具有统计学差异。但两种干预措施间无显著性差异(见表2)。除此之外，包括tg、ldl和hdl的变化趋势，补钙组和补钙＋大豆异黄酮组均不同，但也均无统计学差异。
2.3 er-αpx单倍体型对血脂改变的影响
px 单倍体型或非px单倍体型绝经妇女自身干预前后比较，血总胆固醇下降均很明显，除了补钙＋大豆异黄酮组的非px单倍体型绝经妇女外，差异均有显著性（p<0.05）；其他血脂成分变化则无统计学意义。
补钙＋大豆异黄组px单倍体型绝经妇女血中甘油三酯和高密度脂蛋白的变化，与补钙组非px单倍体绝经妇女比较，两者间差异有显著性（p<0.05），见表3。
3 讨 论
本研究目的是观察血脂正常的不同er-α基因型别的绝经妇女在出现骨骼骨密度见低或骨质疏松时，补钙或补钙和大豆异黄酮的干预效果。结果发现，补钙或补钙和大豆异黄酮均能引起血脂成分的变化，最敏感的是血总胆固醇。
补钙组血脂正常的绝经妇女的血脂成分有明显的变化，这与以往的研究报道有所相似[3]，且本研究使用的钙剂量远低于已有的报道。补钙引起血胆固醇降低，生物学依据可能是钙可以和胆汁结合形成不溶性的皂垢，后者可以清除经肝内循环进入肠道的胆固醇[4]。
补钙＋大豆异黄酮组血脂正常的绝经妇女的血脂成分也有明显的变化，但与补钙组相比，无显著性差异。antonella等[5]用150mg/d大豆异黄酮对有高胆固醇血症的绝经后妇女进行干预6个月，也同样没有见到效果。异黄酮的降血脂作用要依赖于基线的血脂浓度[6]，对患有高脂血症的对象有明显的降血脂作用。补钙组除了血总胆固醇降低外，其他血脂成分，包括tg、ldl和hdl的变化趋势均与补钙和大豆异黄酮组完全不同。
在本研究还发现，补钙＋大豆异黄组er-α基因px单倍体型绝经妇女与补钙组非px单倍体绝经妇女相比，两者血中甘油三酯和高密度脂蛋白的变化差异有显著性。
但本研究的样本量较少，尚待增大样本量或血脂异常的绝经妇女，延长补钙或补钙和大豆异黄酮的干预时间，继续跟踪观察进一步探讨长期补充钙和/或补钙＋大豆异黄酮片剂（不含蛋白）是否对血脂成分确有影响。
【参考文献】
[1] zhou xg,melissa km, shaw w. soy isoflavone intake lowers serum ldl cholesterol: a meta-analysis of 8 randomized controlled trial in humans[j]. j nutr, 2004, 134（6）:2395-2400.
[2] siyan zh, suzanne ch. meta-analysis of the effect of soy protein containing isoflavones on the lipid profile[j]. am j clin nutr, 2005, 81（2）:397-408.
[3] reid ir, mason b, horne a, et al. effects of calcium supplementation on serum lipid concentrations in normal older women: a randomized controlled trial[j]. am j med, 2003, 114(7):620-621.
[4] roberd mb, lisa f, greg ag, et al. effect of calcium supplementation on serum cholesterol and blood pressure[j]. arch fam med, 2000, 9（1）:31-39.
[5] antonella d, clarie bh, bonnie b. the effects of soy-derived phytoestrogens on serum lipid and lipoproteins in moderately hypercholesterolemic postmenopausal women[j]. j clin endocrinol metab, 2002, 87(1):118-121.
