【摘要】 目的：探讨冠心病患者血清c反应蛋白与血管内皮损伤的关系。方法：以45 例冠心病患者为研究对象, 以15例其他心脏病患者和20例健康者作为对照组,测定他们外周血循环内皮细胞（cec）数量及血清c反应蛋白水平，并进行分析比较。结果：冠心病患者组cec数量和c反应蛋白水平明显高于其他心脏病组和对照组（p＜0.05）冠心病患者cec数量和c反应蛋白呈正相关（r=0.78，p＜0.05）。结论：冠心病患者的血管内皮损伤可能与cec数量及c反应蛋白水平有关，二者的协同作用可能在动脉粥样硬化的发病机制中发挥重要作用。
【关键词】 冠状动脉疾病； c反应蛋白；内皮细胞
abstract：objective:to investigate the changes of c- reactive protein(crp) levels and its relation to the endothelial injury in patients with coronary artery disease(cad).methods:the number of circulating endothelial cell(cec) was measured in cad patients and also in the control group of patients with other heart disease and normal subjects, meanwhile the level of serum c reactive protein were detected with scatter nephelometry in three groups.results:the number of cec and level of crp were significantly higher in cad patients than those in patients with other heart disease and normal control group(p＜0.05).the number of cec was positively correlated with crp in cad patients(r=0.78,p＜0.05)conclusion:cec and crp may be involved in endothelial dysfunction of coronary artery disease;the close correlation between cec and crp may be contributing to the pathogenesis of atherosclerosis.
author′s address：department of biochemistry and molecular biology,basic medical scholl of wuhan university,wuhan,hubei,430071,china
key words：coronary artery disease; c- reactive protein;endothelial cell
随着人们生活水平的提高，冠心病的发病率呈逐年增加的趋势，因此对冠心病的发病机制的研究也日益重视。wWW.11665.com近来c反应蛋白(crp)成为研究的热点，它是一种重要的炎症标志物, 是冠心病发生的独立危险因素之一，已被许多学者证实它可作为预测健康人群未来发生冠状动脉事件的指标[1～3]。而血管内皮细胞（vascular endothelial cell）的损伤是冠心病发病的机制之一，所以外周血内皮细胞(circulating endothelial cell，cec)数量的变化可以间接地反映血管内皮的损伤程度[4]。本研究通过检测冠心病患者的cec数量和血清crp水平的变化以及二者的相关性，探讨c反应蛋白在冠心病发病中的作用和意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 （1） 研究组:45 例冠心病患者符合世界卫生组织的冠心病诊断标准[5]， 男 30 例, 女15 例, 年龄(60.8 ±5.8) 岁; 其中不稳定型心绞痛（uap）23例, 稳定型心绞痛（sap） 10例, 陈旧性心肌梗塞12例；（2）其他心脏病组15例, 男8例, 女7例, 年龄（ 61.5 ±8.2）岁，其中风心病患者7例, 肥厚性心肌病2例, 阵发性室上性心动过速3例, 缩窄性心包炎3例；（3）对照组: 健康体检者20例为正常对照组，无心血管疾病史， 男10例, 女10 例, 年龄(61.6 ±5.7) 岁。三组在性别, 年龄、血糖、血脂及肝肾功能无显著差异。上述所有入选对象均排除严重的肝、肾功能不全及各种急慢性感染性疾病
1.2 方法 （1） cecs的检测：采用percoll 密度离心法[6]，首先配制密度为1.050 的percoll液(体积浓度约35%) : 用percoll 工作液［即100%的percoll液, 由原液与10 倍浓度的磷酸盐缓冲液（pbs）按9∶1混合，摇匀而配成］与pbs 液或者生理盐水以体积比 35∶65 混合摇匀, 所得混合液体即为35%percoll 液，备用。将每份采集来的静脉血混匀后用等量生理盐水在试管内稀释备用。根据标本数量准备相应数量的试管, 每支试管内加35%percoll 液2ml， 将稀释后的静脉血沿管壁缓慢铺于35% percoll 液上, 可见明显的液体分层。将试管置于水平离心机内400g/min 离心20～25min 取出后可见明显分三层, 上层为血浆, 中层为percoll 液, 下层为红细胞。吸取上层和中层液1ml于小试管内, 将小试管以2 100 g/min 离心20～25 min, 弃上清, 并于每个小试管加生理盐水0.5 ml, 震荡混匀。取所得细胞悬液滴于血细胞计数池中, 在olympus光学显微镜下计数9 个大方格cec 数, 同一标本计数4次, 取均值；（2）cecs鉴定：取cec 悬液，离心后以沉淀涂片风干，后用冷乙醇固定40min, 用免疫组织化学法检测内皮细胞的特异标记cd34+鉴定；（3）crp检测方法：所有患者采取空腹静脉血3ml，离心后取血清置于试管中，打开 bn100 全自动分析仪（由德灵诊断产品有限公司生产），按电脑设定程序操作进行分析。试剂由上海德灵公司提供,以免疫比浊法测定 crp含量。
1.3 统计学处理使用spss 13.0 统计软件作分析。各项指标以均数±标准差(±s)表示, 两组均值间比较用t检验, 相关分析采用直线相关分析, p＜0.05为差异有显著性。
2 结 果
2.1 外周血中cec的基本形态光镜下循环血管内皮细胞形态多样, 胞体较大, 胞核居细胞中央, 稍偏位, 符合内皮细胞所共有形态特征。 cd34 免疫组织化学法测定结果显示内皮细胞的特异标记位于胞膜和胞浆, 呈棕黄色,确认检测到的细胞是内皮细胞。
2.2 三组cec含量冠心病组cec含量为（8.6±2.8）个/0.9μl,其它心脏病组为（3.0±1.5）个/0.9μl, 正常组为（3.2±1.3）个/0.9μl，见表1。
2.3 三组crp水平 冠心病组crp浓度为（4.44±1.24） mg/l，其它心脏病组为（3.16±1.65） mg/l，正常组为（2.89±1.76） mg/l，见表1。
2.4 冠心病患者cec 数量与crp浓度相关性分析 见表2。冠心病患者cec数量与crp浓度呈正相关（r=0.78， p<0.05）。表1 三组患者外周围血内细胞（cec）数、c反应蛋白（crp）浓度比较
3 讨 论
crp是一种重要的炎症反应标志物, 其介导的补体激活在人类早期动脉硬化中具有重要作用，是致动脉粥样硬化的重要危险因素[7，8]。因此，它不仅是评价冠心病患者未来冠脉事件发生的重要预测指标，而且对表面健康的人群首发冠脉事件也有独立的预报作用。本研究发现冠心病组患者的crp浓度显著高于其它心脏病组和对照组（p<0.05），这与国外学者ridker等[2]报道的结果一致，他们还认为crp浓度随冠心病的严重程度增高而增高。这些研究都表明冠心病患者体内存在着一定的炎症反应，但其发生的原因还不明了，例如，与慢性炎症、急性炎症、结缔组织病，微生物感染等的关系。目前认为，crp致动脉粥样硬化的机制主要是它不仅可以与内皮细胞, 平滑肌细胞相互作用, 并且与脂蛋白结合, 激活补体系统产生大量终末攻击复合物, 而且可以活化炎症细胞, 并经其受体活化途径造成血管内皮损伤, 引起血管痉挛, 脂代谢异常从而导致动脉粥样硬化。 目前研究认为动脉粥样硬化发生的始动环节是血管内皮细胞的损伤，而cec是目前在活体内唯一可以特异而直接地反映血管损伤的标志物, 可以作为血管壁受损的信号。生理情况下, 外周血中存在一定数量cec，它是血管新陈代谢的结果，而cec数量的明显升高, 是体内血管损伤的一种病理反应过程[4]。因此，我们可以通过检测cec的数量来反应血管损伤程度，本研究发现冠心病组cec的数量显著高于其它两组，进一步证实冠心病患者体内存在血管损伤[9]。关于血管内皮细胞损伤的原因可能有很多，但目前主要认为导致冠心病发生的危险因素是其主要原因。 本研究还发现冠心病患者cec数量和crp水平呈正相关，这一点说明他们之间可能存在着一种因果关系，有研究提出crp水平与内皮功能缺陷有关[10]。 最近的研究表明, crp能够使血管内皮细胞血浆纤溶酶原激活抑制物mrna的表达和其蛋白的合成增加,抑制一氧化氮合酶的表达和一氧化氮的释放, 增强凝血活性, 损害血管内皮功能[11]。crp的升高, 还可以促进血管内皮释放缩血管物质,增加平滑肌细胞的增生和内皮细胞通透性, 进一步损害血管内皮细胞。因此，临床中密切观察两者的动态变化不仅可以预测冠脉事件的发生，而且可以评价治疗的效果。使用内皮保护剂，抗炎症反应的药物可能成为临床预防和治疗冠心病新的方向。
【参考文献】
[1]zivin ja， choi dw. stroke therapy[j]. scient amer, 1991，265（1）:31-32.
［2］ridker pm，hennekens ch，buring je，et al. creactive protein and other markers of inflammation in the prediction of cardiovascular disease in women[j]. n engl j med,2000,342:836-843.
［3］李大鹏，公兰兰，苏大宇，等.急性冠脉综合征超敏c反应蛋白含量的改变［j］.心血管康复医学杂志，2008，17(3)：233-234.
［4］koc m，bihorac a，segal ms. circulating endothelial cells as potentia markers of the state of the endothelium in hemodialysis patients[j].am kidney dis,2003,42 (4) :704-712.
［5］杨跃进，华 伟.阜外心血管内科手册［m］.北京：人民卫生出版社，2006：8.
［6］周继红,朱佩芳,刘怀林,等. 大鼠烧冲复合伤后 pam 和 pmn呼吸爆发功能及循环内皮细胞变化[j]. 第三军医大学学报, 1994，16 （1）:61-62.
［7］徐也鲁. 动脉粥样硬化——一种慢性炎症过程［j］. 中国动脉粥样硬化杂志,2001,9 (2) :93-95.
［8］吴多智，苏哲坦，李新明.炎症c反应蛋白与冠心病关系的研究进展及评估［j］.心血管康复医学杂志，2005，14(2)：186-190.
［9］lee kw，lip gy，taybje m，et al. circulating endothelial cells vonwillebr factor interleukin and prognosis in patients with acute coronary syndromes[j].blood,2005,105:526-532.
［10］fichtlscherer s, rosenberger g, walter dh, et al. elevated c- reactive protein levels and impaired endothelial vasoreactivity in patients with coronary artery disease[j].circulation,2000,102: 1000-1006.
［11］devaraj s，xu dy，jialal i.creactive protein increases plasminiogen activator inhibitor expression and activity in human aortic endothelial cells implications for the metabolic syndrome and atherothrombsis[j]. circulation,2003,107:398-404.
