【摘要】 目的：研究血管紧张素转换酶(ace)(i/d)、醛固酮合成酶(cyp11b2)-344t/c、α-内收蛋白(α-adducin)460g/t不同基因多态性与高血压患者及正常人脉压(pp)的关系。方法：按pp<40mmhg、40～59mmhg、≥60mmhg，高血压组(1081例)和血压正常组(604例)分别被分为3组，计数资料用卡方检验，计量资料用t检验或方差检验。结果：高血压组和血压正常组在二项逐步logistic回归中，调整了其他混杂因素后，两组ace-dd+ cyp11b2-cc/tc +α-adducin-tt型和年龄均进入最后的方程;两组ace-dd+ cyp11b2-cc/tc +α-adducin-tt型与高脉压(≥60mmhg)分别显著相关(or值分别为3.318和4.556，p分别为0.005和0.044)。结论：在高血压患者和正常人中，同时携带有ace基因dd型、cyp11b2基因tc/cc型和α-adducin基因tt型者脉压增大的风险要高于其他基因型组合，是脉压增大的独立危险因素。
【关键词】 基因;血压;高血压
association among ace, cyp11b2 and α-adducin gene polymorphisms with pulse pressure
lin huizhong,chen hui,luo jiewei,wu xiaoying,chen yan,li deyu,chen xijun
chinese journal of cardiovascular rehabilitation medicine,2009,18(3):204
abstract：objective:to investigate the association among ace, cyp11b2 and α-adducin gene polymorphisms with pulse pressure(pp) in primary hypertensive and normotensive subjects.methods:the primary hypertensive subjects(1081 cases) and normotensive subjects(604 cases) were divided respectively into three groups: pp<40mmhg, 40-59mmhg and ≥60mmhg.binary stepwise logistic regression was used to analyze the relationship between gene polymorphisms and pp, which being considered confounding factors like age, sex， etc.results:binary logistic stepwise regression results demonstrated that ace-dd+ cyp11b2 -cc/tc+ α-adducin-tt genotype and age entered the model after adjusting confounding factors.ace-dd+cyp11b2-cc/tc+ α-adducin-tt genotype was significantly associated with high pulse pressure(≥60mmhg)in both primary hypertensive(or=3.318,p=0.005) and normotensive groups (or=4.556,p=0.044).conclusion:the risk of high pp increased in both primary hypertensive and normotensive subjects whom carried ace-dd, cyp11b2-tc/cc and α-adducin-tt genotypes at the same time, and this combination of genotype is the independent risk factor of high pp.
key words：genes;blood pressure;hypertension
近年来，脉压(pp)这一大动脉弹性的指标正成为心血管病学研究领域的一个重要热点，研究提示pp的大小可预测动脉粥样硬化所导致的心脑血管疾病的发生，已被用作预测心脑血管疾病发生率与病死率的重要指标之一[1～4]。wWw.11665.CoMpp作为心血管危险因素的预测指标很大程度上受年龄、性别影响，但是，却很少有研究解释基因在pp变化中的影响和机制。血管紧张素转换酶(ace)、醛固酮合成酶(cyp11b2)、α-内收蛋白(adducin)三个基因通过不同机制影响血容量、血压水平，进而可能引起血管结构，pp变化。基因的作用多为微效，故本研究选择上述三个基因，研究其联合作用与pp的相关性。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 高血压组：2004年10月～2006年10月在福建省立医院门诊及住院确诊的符合条件的高血压患者，共1081例，其中男女比例为662/418,平均年龄(60.9±12.33)岁。入选标准:符合2004年《中国高血压防治指南》高血压诊断标准：未治疗前，非同日3次测量血压均值：收缩压(sbp)≥140mmhg和(或)舒张压(dbp)≥90mmhg 者;或者既往有高血压史，正在服用降压药者，虽血压<140/90mmhg，也可入选。排除标准：①继发性高血压;②能引起脉压增高的疾病及患严重心、脑、肾疾病，不能耐受检查者。
1.1.2 血压正常组：同期福建省立医院门诊健康查体者，共604例,其中男女比例342/262，平均年龄(59.7±12.70)岁。入选标准：符合2004年《中国高血压防治指南》sbp<140 mmhg，dbp<90mmhg者，常规化验无异常，无各类心血管、脑血管及肾、内分泌等方面疾病。
1.2 方法
1.2.1 所有研究对象均测量血压、身高、体重(体重指数ibm=体重kg/身高m2)，检测空腹甘油三酯(tg)、空腹胆固醇(tc)、空腹血糖(glu)、肌酐cr)、尿酸(ua)、心率，询问吸烟史、饮酒史，高血压病人还记录服用降压药情况、高血压病史。
1.2.2 血压测量:共3次，取其均数。pp=sbp-dbp;平均动脉压(map)=1/3sbp+2/3dbp。
1.2.3 抽取外周血2ml，提取基因组dna。
1.2.4 检测：①ace基因多态性检测：目的片段多聚酶链反应(pcr)扩增参照rigat[5]首先设计的引物序列，上游引物：5′ctggagaccactcc catcctttct 3′，下游引物：5′gatgtggccatcacatt cgtcagat 3′。 pcr产物1.5%琼脂糖凝胶电泳判定基因型;② cyp11b2基因多态性检测：pcr扩增引物自行设计，上游引物: 5′caggagga gaccccatgtgac 3′，下游引物: 5′cctccacc ctgttcagccc 3′。将pcr产物用haeⅲ内切酶进行酶切，酶切位点为:
ggccccgg 。酶切产物3%琼脂糖凝胶电泳判定基因型;③α-adducin 基因多态性检测：pcr扩增引物自行设计，上游引物：5′cagcgatgtggaggtt cctg 3′，下游引物: 5′tgggactgcttccattcggc 3。将pcr产物用bmgt120 内切酶进行酶切，酶切位点为:ggnccccngg。酶切产物3%琼脂糖凝胶电泳判定基因型。
1.3 统计方法
所有数据用spss 13.0进行统计分析。多因素分析用二项logistic回归。用直接计数法计算高血压组不同pp组和正常人的基因型频率，性别、hardy-weinberg遗传平衡和组间基因型频率，用x2检验，p<0.05为差异有显著性。
2 结 果
2.1 高血压组和血压正常组基本资料比较
结果显示：年龄(60.9±12.33)∶(59.70±12.70)、pp[(54.70±14.42)∶(43.40±11.73)mmhg]、平均动脉压[(106.6±11.55)∶(89.40±9.97)mmhg]、肌酐[(182.90±22.29)∶(76.20±16.14)μmol]在两组之间差异有显著性(p<0.05)，其余无显著性差异。
2.2 不同pp水平年龄、性别比较
在高血压组和血压正常组中,不同pp组年龄有差异(p<0.05),平均年龄随着pp组的增大而增大,其他指标分布在不同pp组间无差异。
2.3 经检验三种基因基因型分布频率符合hardy-weinberg遗传平衡(p>0.05)。
2.4 不同pp水平组基因频率分布分析
以pp 40mmhg、60mmhg为界限将研究对象分为3组。cyp11b2基因的cc型例数较少(高血压组75例，血压正常组33例)，故将cc型与tc型合并，代表携带有c等位基因者，以减少因例数太少引起的误差。
2.4.1 高血压组：采用卡方检验比较不同pp水平组间基因型组合分布频率。ace-dd+cyp-tc/cc +add-tt型在各pp组分布频率有显著性差异，在≥60mmhg组分布频率最高(4.9%)，经 分割，与其他两组比较，差别有显著性(p=0.001)。
2.4.2 血压正常组：采用卡方检验比较不同pp水平组间基因型组合分布频率。ace-dd+ cyp-tc/cc +add-tt型在各pp组分布频率有显著性差异，其中在≥60mmhg组分布频率最高(8.2%)，经 分割，与其他两组比较，差别有显著性(p=0.002)。
2.5 二项logistic回归
将高血压组和血压正常组按pp是否>60 mmhg分别分为两组进行二项logistic回归分析。
2.5.1 高血压组：将可能影响pp的因素：性别、年龄、体重指数、吸烟(是与否)、饮酒(是与否)、用降压药(是与否)、高血压史(年)、tg、tc、glu水平、cr、ua、心率、map，三种基因型及其组合引入方程，采用逐步logistic回归方法，结果显示：最后进入方程的因素为年龄、map、ace-dd+ cyp-tc/cc+add-tt型。提示在调整了年龄和map因素后，同时携带三种基因突变型(ace-dd+ cyp-tc/cc+ add-tt)者仍与高脉压(≥60mmh)显著相关，是pp增高的独立危险因素。调整后的比值比(or)值为3.318 (95%ci: 1.432-7.684)，即同时具有ace基因dd型、cyp11b2基因tc/cc型和α-adducin基因tt型者高脉压的风险是其他基因型组合者的3.318倍(见表1)。
2.5.2 血压正常组：影响因素无高血压史、降压药，其余同上，结果显示：最后进入方程的因素为年龄、性别、ace-dd+cyp-tc/cc+add-tt型。提示在血压正常组中调整了年龄和性别因素后，同时携带三种基因突变型(ace-dd+ cyp-tc/cc+ add-tt)者也仍与高脉压显著相关，与高血压组结果一致，or值为4.556(95%ci:1.042-19.929)，即同时具有ace基因dd型、cyp11b2基因tc/cc型和α-adducin基因tt型者高脉压的风险是其他基因型组合者的4.556倍(见表1)。表1 高血压组与血压正常组logistic回归分析(略)
3 讨 论
影响pp的因素很多，但关于基因与pp关系的研究，目前国内、外还比较少。
cwynar m研究了642例西方白人，将α-adducin与γ-adducin协同分析，发现α-adducin t等位基因协同γ-adducin-gg型者周围与中心pp要高于协同γ-adducin-aa型者[6]。wang jg 分析了ace、cyp11b2、α-adducin三个基因协同作用与中国汉族人血压关系后得出，同时具有ace-dd型和cyp11b2-cc型或者同时具有ace-dd型和α-adducin-tt型者的sbp较高[7]。这些与本研究的结果部分相同。单基因和两基因型组合均未进入方程，此结果亦提示基因的联合作用能增大对pp的影响。
pp取决于心搏量、左心室射血速率、大动脉弹性和外周血管压力反射波。通常情况下，动脉顺应性是决定pp大小的主要因素。以往研究多得出dd型人群与循环及组织高ace水平有关[8，9]。dd型人的血管长期暴露在循环及局部组织高水平ace及ang ⅱ环境下，血管内皮容易受损，致其通透性增加，低密度脂蛋白氧化修饰加速，并易于沉积于血管内皮细胞，导致动脉粥样硬化形成。另有研究表明angⅱ可使血管内皮增生,血管壁增厚[10]，并且醛固酮的分泌也可使血管收缩和血管平滑肌细胞增殖，导致动脉管壁增厚，变硬，从而引起动脉顺应性减退。目前的研究多显示cyp11b2的c等位基因多与高醛固酮水平相关[11～13]。醛固酮的过度分泌可使水、钠潴留，血容量增加，外周动脉内压力增加，动脉内皮受机械剪应力增加、内皮功能减退。另外，醛固酮还可以改变血管平滑肌的张力，通过基因和非基因效应促使血管平滑肌肥大、增殖，使管壁增厚，从而降低动脉的顺应性。α-adducin氨基酸替换( gly →trp) 的结果可能影响内收蛋白组装或其稳定性,从而改变了细胞膜骨架结构和钠离子跨膜转运,引起近端肾小管钠离子重吸收增加,水钠潴留,循环血容量增加,表现为血压水平升高。长期发展可导致小动脉痉挛、管壁剪切应力增加、缺氧、内皮功能减退,从而使血浆纤维蛋白、脂质渗入内皮下间隙,产生玻璃样变性;还可使细胞外基质(包括胶原纤维) 增多,排列紊乱。最后导致管壁增厚、变硬,动脉顺应性减低，引起pp增大。上述三个基因在机制上可有互相协同的作用。
本研究结果显示单基因分析与pp高低无显著性相关，在将基因型联合分析后，显示出它与pp高低的相关性，这与基因的协同作用有关。本研究结果说明今后对于基因与pp的研究应多着重于联合基因的分析，以利于pp水平的预测及预防。
【参考文献】
[1]domanski mj,davis br,pfeffer ma，et al.isolated systolic hypertension：prognostic information provided by pulse pressure[j].hypertension,1999, 12：375-380.
[2]fang j, madhavan s, alderman mh,et al.pulse pressure: a predictor of cardiovascular mortality among young normotensive subjects[j].blood press,2000, 9(5):260-266.
[3]张钦凤，朴锺危，高尚伯,等.脉压与心脑血管病的关系:一个大样本的随访研究[j].中华高血压杂志,2006, 14(10):830-832.
[4]陈慧，王丽娜，白玉茹，等.脉压在老年高血压患者中的作用[j].心血管康复医学杂志，2001，10(4)：291-293.
[5] rigat b, hubert c,corvol p,et al.pcr detection of the insertion /deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene (dcp1)[j].nucleic acids res,1992, 20(6): 1433.
[6]cwynar m,staessen ja,ticha m, et al.epistatic interaction between alphaand gammaadducin influences peripheral and central pulse pressures in white europeans[j].j hypertens,2005, 23(5):961-969.
[7]wang jg,liu l,zagato l,et al.blood pressure in relation to three candidate genes in a chinese population[j].j hypertens,2004, 22 (5):937-944.
[8] zhu x，bouzekri n，southam l，et al.link age and association analysis of angiotensin iconverting enzyme(ace)gene polymorphisms with ace concentration and blood pressure[j].american journal of human genetics,2001, 68(5)：1139-1148.
[9]吴寿岭,李云,王志彬,等.ace基因多态性与原发性高血压患者血清ace及angⅱ浓度的关系[j].高血压杂志,2004, 12(3),214-217.
[10] grobecker h，heusch g,strauer be.angiotensin and the heart[j].basic res cardiol,1993, 51 (1) :197.
[11]pojoga l,gautier s,blanc h,et al.genetic determination of plasma aldosterone levels in essential hypertension[j].am j hypertens,1998, 11(7):856-860.
[12]王志彬,宋绍敏,李云,等.cyp11b2基因多态性与原发性高血压患者血浆ald浓度的关系及氢氯噻嗪的影响[j].高血压杂志,2004, 12(6): 505-508.
[13] 华琦，许骥，李东宝,等.醛固酮合酶基因cypllb2(-344t/c)多态性对北京汉族高血压患者raas系统的影响[j].现代中西医结合杂志,2006, 27(3):361-364.
