【摘要】 目的 建立鸡骨草胶囊中栀子苷的hplc测定方法。方法 采用lichrospher c18色谱柱(5 μm,4.6 mm×250 mm)；以乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)为流动相；流速：1.0 ml/min,检测波长：238 nm,柱温：35 ℃。结果 栀子苷在0.14～1.68 μg范围内呈良好的线性关系,回归方程为：y=1 552.15x-6.42,r=0.999 9；回收率为97.53% (rsd=1.24%,n=6)。结论 方法稳定、可靠,可用于该制剂的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法；鸡骨草胶囊；栀子苷
determination of geniposide in jigucao capsule by hplc wang yan-hong, chen xian
guangxi yulin pharmaceutical co.ltd.,yulin 537001, china
abstract：objective to estabilish a hplc method for the determination of geniposide in jigucao capsule. methods the column was lichrospher-c18 (5 μm, 4.6 mm×250 mm). the determination was carried out with acetonitrile-0.1% phosphoric acid (10∶90) as the mobile phase, a flow rate of 1.0 ml/min and detected at 238 nm, and temperature of the column was 35 ℃. results the calibration curve showed good linearity in the range of 0.14～1.68 μg, y=1 552.15x-6.42, r=0.999 9. the mean recovery was 97.53% (rsd=1.24%, n=6). conclusion the method is accurate, reliable, and can be used for quality control of the preparation.
key words：hplc；jigucao capsule；geniposide
鸡骨草胶囊具有疏肝利胆、清热解毒之功,用于急、慢性肝炎和胆囊炎属肝胆湿热证者,由鸡骨草、栀子、茵陈等药味组方。WwW.11665.coM鸡骨草为方中君药,但由于该味药的植物化学研究工作较薄弱,尚未有符合含量测定要求的对照品,无法对其进行含量控制。茵陈为方中臣药,绿原酸为其消炎利胆的主要有效成分[1],但据资料显示,方中另一味臣药栀子也含有绿原酸[2],由于该成分不具有唯一性,故未作为含量测定指标。我们采用hplc法测定了栀子中栀子苷的含量,结果显示,方法准确可靠,可用于本品的质量控制。
1 仪器、试剂与样品
上海必能信bug-40型超声清洗仪；agilent 1100系列高效液相色谱仪(g1379a degasser、g1311a quatpump、g1313a als、g1316a colcom、g1314a vwd)。
栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号0749-9404,供含量测定用)。乙腈为色谱纯,水为高纯水,其它试剂均为分析纯。鸡骨草胶囊及缺栀子的阴性对照样品由玉林制药有限责任公司提供。
2 方法学考察及含量测定
2.1 色谱条件
lichrospher c18色谱柱(5 μm,4.6 mm×250 mm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)；流速：1.0 ml/min；检测波长：238 nm；柱温：35 ℃；进样量为10 μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取栀子苷对照品适量,加70%甲醇溶解制成每1 ml含栀子苷50 μg的溶液,即得。
2.2.2 供试品溶液的制备
取装量差异项下的本品研细,取0.5 g,精密称定,加70%甲醇50 ml,称重,超声处理(功率500 w,频率50 khz)30 min,放冷,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。
2.3 线性与范围
精密称取栀子苷对照品14.0 mg,置50 ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。分别精密吸取以上对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml,分别置10 ml量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,进样测定。以对照品进样量为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程为：y=1 552.15x-6.42,r=0.999 9。结果表明,栀子苷进样量在0.14～1.68 μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验
对同一栀子苷对照品溶液(浓度为56 μg/ml),按正文拟订的色谱条件,连续测定6次,结果峰面积平均值为864.1, rsd=0.69%。结果表明,本法的精密度较好。
2.5 重复性试验
对同一批样品(批号625020),按正文拟订的方法平行测定6份,结果栀子苷的平均值为2.590 mg/粒(rsd=1.07%, n=6)。结果表明,本法的重复性较好。
2.6 稳定性考察
对同一供试品溶液(批号625020),在23 h内,每隔一定时间测定1次,共测定6次,试验表明,被测物稳定。6次测定结果的平均值为2.597 mg/粒,rsd=0.69%。表明本柱稳定性较好。
2.7 加样回收率测定
精密称取已知含量(栀子苷的含量为2.590 mg/粒)的鸡骨草胶囊(批号625020,平均粒重0.501 0 g)约0.25 g,分别精密加入一定量的栀子苷对照品溶液,挥干溶剂后,按正文拟订的方法提取、测定,计算回收率。结果栀子苷平均回收率为97.53%, rsd=1.24%(n=6),符合定量分析的要求,见表1。表1 栀子苷加样回收率测定结果（略）
2.8 专属性试验
按本品处方、制法制成不含栀子的阴性样品。取缺栀子的阴性样品,按供试品溶液制备项下的方法提取,测定。结果在栀子苷峰相应的保留时间几乎无吸收峰,表明处方中其它成分对测定无干扰(见图1)。
2.9 样品测定
按拟订的含量测定方法,测定了本品5批样品中的栀子苷含量,结果见表2。表2 5批样品含量测定结果（略）
3 讨论
3.1 流动相的选择
本试验参照相关文献[2-7],结合本品的实际情况,以乙腈-水(15∶85)、乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)、甲醇-0.1%磷酸溶液(20∶80)为流动相试验,结果乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)能使所测成分栀子苷峰形较好,且与杂质达到基线分离,分离度>1.5,达到分析要求,故选择乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)为流动相。
3.2 测定波长的选择
参照2005年版《中国药典》(一部)栀子项下【含量测定】项所使用波长238 nm选择作为测定波长[2]。
3.3 提取条件的选择
本试验参照有关文献[2-6],对提取溶剂、提取时间进行优化选择,结果采用70%或50%、30%的甲醇溶液超声处理30 min均可将栀子苷提取完全,50%、30%甲醇提取液较难滤过,故本试验选择70%甲醇超声处理30 min作为提取条件。
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