【摘要】  目的 优选痛清颗粒中芍药苷与葛根素的提取工艺。方法 采用4因素3水平的正交试验设计法,以芍药苷、葛根素转移率综合评分为考核指标,筛选影响提取工艺的因素。结果 实验设计三因素没有显著性影响。结合生产实际需要,痛清颗粒中芍药苷与葛根素的最佳提取条件是：加入22倍量水提取3次(12,5,5),提取2 h (1.0,0.5,0.5)。结论 此条件为痛清颗粒中芍药苷和葛根素的最佳提取工艺。

【关键词】  痛清颗粒；芍药苷；葛根素；正交试验；提取工艺

    abstract：objective to optimize the technology of extracting paeoniflorin and puerarin from tongqing granules. methods the experiment used the orthogonal experimental design (4 factors and 3 levels) with the shift-rate of paeoniflorin and puerarin as experimental criterion in screening the factors affecting the technology of extracting tongqing granules. results all the 3 factors designed in the orthogonal experiment non-signifantly affected the extracting technology. in consideration of the industrial practice, the best condition of extracting the constituents from tongqing granules was decided：water extraction for 3 times, extracting with 12 fold water for 1 hours for the first time, with 5 fold water for 0.5 hours for the second time, and with 5 fold water for 0.5 hour for the third time. conclusion the condition is the optimized technology of extracting paeoniflorin and puerarin from tongqing granules.
   
　　key words：paeoniflorin；puerarin；orthogonal experiment；extracting technology
 
    痛清颗粒是由白芍、葛根等中药精制而成的中药复方制剂,临床用于治疗头痛。WWW.11665.CoM白芍是毛茛科植物芍药(paeonia lactiflora pall.)的干燥根,性微寒,味苦、酸,具有养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗之功效[1]。葛根是豆科植物野葛pueraria lobata (willd.)ohwi的干燥根,性凉,味甘、辛,具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻的功效[1]。本试验对其提取工艺进行了研究,以芍药苷、葛根素转移率为考核指标,采用综合评分的方法获得了最佳提取工艺。现报道如下。

　　1  仪器与试药

    waters高效液相色谱仪(美国)；16g-型高速离心机；sb5200 型超声清洗机(上海branson公司)；ael-40sm型电子天平(日本岛津)。甲醇、乙腈为色谱纯,乙醇为分析纯,水为重蒸水。白芍、葛根等药材经鉴定,符合2005版《中华人民共和国药典》标准。芍药苷、葛根素对照品购自中国药品生物制品检定所,批号110736-200525、110752-200209。

　　2  方法与结果

　　2.1  正交设计

    在查阅大量文献以及预实验的基础上,发现用水作为提取溶剂时均能较好提取芍药苷、葛根素等。我们选用l9(34)正交表,对加水量(a)、提取时间(b)、提取次数(c)三因素进行了考察,以芍药苷、葛根素转移率为考察指标,综合评分,优选最佳提取工艺。因素水平见表1。 表1  正交试验因素水平表（略）

　　2.2  含量测定

　　2.2.1  芍药苷 

　　色谱条件：lichrospher c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),waters 515高效液相色谱仪；2487双波长紫外检测器；检测波长λ=230 nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)；流速为1.0 ml/min；0.5 aufs；柱温30 ℃；进样量为5 μl。分别配制不同浓度的芍药苷对照品溶液,在上述色谱条件下进行测定,以芍药苷进样量(x)对峰面积(y)进行线性拟合,回归方程为：y=6 486 000x+32 616.756,r=0.999 7,结果在0.093～2.97 μg范围内线性关系良好。

　　2.2.2  葛根素 

　　色谱条件：lichrospher c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),waters 515高效液相色谱仪；2487双波长紫外检测器；检测波长λ=250 nm；流动相为甲醇-水(25∶75)；流速为1.0 ml/min；0.5 aufs；柱温30 ℃；进样量为5 μl。分别配制不同浓度的葛根素对照品溶液,在上述色谱条件下进行测定,以葛根素进样量(x)对峰面积(y)进行线性拟合,回归方程为：y=22 670 000x+15 521.725,r=0.999 9,结果在0.10～41.1 μg范围内线性关系良好。

　　2.3  水提样品处理与测定

    取水提正交设计所得样品,分别用测定芍药苷和葛根素的流动相稀释不同的倍数,充分振摇,高速离心处理,上清液用0.2 μm的微孔滤膜过滤,所得样品分别在上述测定芍药苷和葛根素的色谱条件下进行测定。

　　2.4  数据分析及实验结果

    对正交试验测定的数据进行极差和方差分析,结果见表2、表3。表2  痛清颗粒的正交试验数据极差分析表（略）注：综合评分(%)=芍药苷转移率×50%+葛根素转移率×50%。表3  痛清颗粒的正交试验数据方差分析表（略）注：f(2,2)0.05=19.0。
   
　　从表2极差分析结果可知,因素影响c>b>a,但3因素3个水平之间均无显著性差异(由表3可知)。由极差分析得出的最佳工艺组合是a3b1c3,即加水量为药材用量26倍,提取3次,第1次1.0 h,第2、3次每次各0.5 h,3次的加水量分别为14、6和6。而表2中最佳的实验组合是a2b2c3,芍药苷和葛根素的转移率均在90%以上,即加水量为22倍量,提取3次,分别提取1.5、1.0、0.5 h。对a3b1c3和a2b2c3进行重复实验,结果表明,两种有效成分的转移率均在85%以上,考虑到生产实际,选择最佳的提取工艺条件是a2b1c3。

　　3  小结
   
　　提取时间是影响中成药生产中中药药效成分浸出的一个重要因素,一般认为长时间加热会破坏有效成分。本实验发现,多次短时间连续提取对芍药苷、葛根素的浸出有利,时间延长导致转移率下降。证明芍药苷与葛根素受热不稳定,易发生水解等化学反应,不宜长时间加热。
　　

【参考文献】
  　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[s].北京：化学工业出版社, 2005.68,273.

　　[2] 张晓燕,王金辉,李 铣.白芍的化学成分研究[j].沈阳药科大学学报, 2001,18(1)：30.