作者：王淑美,冯素香,郭亚健,梁生旺,李建生,刘敬霞
【摘要】 目的 建立脑脉通颗粒中人参皂苷的含量测定方法。方法 采用hypersil ods c18色谱柱(200 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速：1.0 ml/min,检测波长：203 nm。结果 人参皂苷rg1平均回收率为 100.71%,rsd=2.27%；re为100.14%,rsd=1.88%；rb1为100.94%,rsd=1.95%。结论 所建立的方法简便、准确,可作为脑脉通颗粒的质量控制方法。
【关键词】 脑脉通颗粒；人参皂苷rg1；人参皂苷re；人参皂苷rb1；高效液相色谱法
abstract：objective to establish rp-hplc method for determination of ginsenosides in effective parts of naomaitong granules. methods using bds c18 column (200 mm×4.6 mm, 5 μm) of dalian elite, the mobile phase was a mixture of acetonitrile-water gradient elution. the flow rate was 1.0 ml/min, the wavelength was 203 nm. results the average recovery rate of ginsenoside rg1, re and rb1 was 100.71%, 100.14% and 100.94%, respectively, and rsd was 2.27%, 1.88% and 1.95%, respectively. conclusion the method is simple, accurate and can be used to control the quality of naomaitong granules.
key words：naomaitong granules；ginsenoside rg1；ginsenoside re；ginsenoside rb1；hplc
脑脉通颗粒由大黄、人参等中药组成,具有解毒降浊、益气活血的作用,对脑缺血再灌注损伤有明显保护作用[1]。wWw.11665.CoM我们用反相高效液相色谱法(rp-hplc)对脑脉通颗粒中人参皂苷进行了分离富集,且确定以主要有效成分人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1的含量来控制脑脉通颗粒的内在质量。本实验建立了脑脉通颗粒中人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1含量的测定方法。
1 仪器与试药
lc-2010a高效液相色谱仪(日本岛津),spd-m10avp二极管阵列检测器(日本岛津)；bszz4s型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
人参皂苷rg1(批号703-200221)、人参皂苷re(批号754-200115)、人参皂苷rb1 (批号704- 200318)对照品均购自中国药品生物制品检定所；人参等药材购自河南省医药公司,经河南中医学院生药系陈随清教授鉴定为五加科植物人参panax ginseng c.a.mey.的干燥根。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[2]
色谱柱：hypersil ods c18(200 mm×4.6 mm,5 μm,大连依利特)；流动相：乙腈-水梯度洗脱；流速：1.0 ml/min；检测波长：203 nm；柱温：30 ℃。
2.2 溶液的制备
精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的人参皂苷rg1对照品、人参皂苷re对照品、人参皂苷rb1对照品适量,加甲醇制成每1 ml各含0.5 mg的混合溶液,混匀,即得对照品溶液。
取样品细粉0.6 g,精密称定, 置烧杯中,加蒸馏水20 ml使溶解,转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇提取5次(20、20、15、15、15 ml),合并正丁醇液,用1%naoh溶液洗涤2次,每次20 ml,弃去碱液,正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤3次,每次20 ml,正丁醇液水浴上蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至5 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.45 μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。
按比例分别称取除人参外其他药材,按制备工艺制得缺人参的阴性样品,照供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。
2.3 空白试验
分别吸取供试品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10 μl,按上述色谱条件测定。结果表明,脑脉通颗粒中人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1色谱峰分离良好,且阴性样品无干扰。见图1。
2.4 线性关系的考察
分别精密吸取对照品溶液4、8、10、16、20 μl,按上述色谱条件测定。以色谱峰峰面积为纵坐标,对照品进样量为横坐标,绘制标准曲线并进行线性回归,得回归方程为：人参皂苷rg1：y=288 957.987x+9 094.243 8,r=0.999 9；人参皂苷re：
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μl,重复进样5次,峰面积积分平均值：人参皂苷rg1为1 592 968.4,rsd=1.01%；人参皂苷re为1 101 379.6,rsd=1.04%；人参皂苷rb1为1 262 951.6,rsd= 1.38%。
2.6 稳定性试验
精密吸取供试品溶液10 μl,分别在制备后0、0.5、1、2、4、6、8 h进样,测定,结果峰面积积分平均值为：人参皂苷rg1为1 794 377.429,rsd=1.13%；人参皂苷re为753 876,rsd= 1.20%；人参皂苷rb1为1 751 400.714,rsd=1.89%。表明样品溶液在8 h内稳定。
2.7 重复性试验
分别取同一供试品6份,按“2.3”项下方法制备样品溶液,按上述色谱条件测定,计算含量平均值。人参皂苷rg1为0.580%, rsd=1.21%；人参皂苷re为0.271%,rsd=1.03%；人参皂苷rg1+re为0.851%,rsd=0.98%；人参皂苷rb1为0.651%, rsd= 0.91%。
2.8 回收率试验
精密称取人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1对照品适量,加甲醇分别制成1 ml含2.04 mg人参皂苷rg1、1.18 mg人参皂苷re、1.82 mg人参皂苷rb1溶液备用。取已知含量的样品约0.3 g,共6份,精密称定,分别精密加入人参皂苷rg1对照品溶液1 ml(2.04 mg)、人参皂苷re对照品溶液1 ml(1.18 mg)、人参皂苷rb1对照品溶液1 ml(1.82 mg)置烧杯中,按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液,甲醇定容至5 ml量瓶中。按上述色谱条件进行测定,计算回收率,结果见表1。表1 加样回收率试验测定结果（略）
2.9 样品含量测定结果
分别精密称取3批样品, 按供试品溶液的制备项下方法制备,按上述色谱条件进行测定,结果见表2。表2 3批样品人参皂苷含量测定(略)
3 讨论
目前,用hplc法检测人参皂苷类成分的检测器有紫外检测器和蒸发光散射检测器,使用紫外检测器只能用末端吸收(203 nm)进行检测,虽然有干扰,但只要选择好色谱条件,仍能得到满意的结果。
本实验以《中华人民共和国药典》(2005年版)中人参项下的hplc法为基础,对脑脉通颗粒中3个人参皂苷进行了含量测定,并分别对精密度、稳定性、重现性和回收率进行了考察。结果表明,在本文介绍的供试品制备方法和色谱条件下,人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1峰分离完好,所建立的方法可以作为脑脉通颗粒的质量控制方法。这为该方的质量标准的建立和控制奠定了基础。
【参考文献】
[1] 任小巧,李建生.脑脉通颗粒对老龄大鼠脑缺血/再灌注损伤脑保护作用的研究[j].中国中药杂志,2004,29(1)：661.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.7.
