【摘要】  目的 建立大风丸中蛇床子素含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,diamonsil ods1 c18柱,流动相为甲醇-0.1 mol/l硫酸铵溶液(70∶30),用硫酸溶液(1→5)调ph为2.5,流速为1.0 ml/min,检测波长322 nm。结果 蛇床子素在0.101～0.808 μg范围内呈良好线性,回归方程为y＝9.964 406×10-3x－1.355 684×10-1,r＝0.999 5,平均加样回收率为98.4%,rsd＝1.40%(n＝6)。结论 本方法简便、准确,专属性强,测定结果重复性好,是大风丸中蛇床子素定量分析的有效方法。

【关键词】  大风丸；蛇床子素；高效液相色谱法；含量测定

    abstract：objective to establish the method for determining the content of fructus cnidii in dafeng wan by hplc. methods diamonsil ods1 c18 column was used with ch3oh-0.1 mol/l (nh4)2so4 (70︰30) [adjust ph to 2.5 by sulphuric acid solution (1→5)] as the mobile phase. the detection wavelength was set at 322 nm and flow rate was 1.0 ml/min. results the calibration curve was linear at the range of 0.101～0.808 μg for the fructus cnidii and linear equation was y＝9.964 406×10-3x－1.355 684×10-1, r＝0.999 5. the average recovery was 98.4% and rsd was 1.40% (n＝6). conclusion this method was simple and accurate, with good specificity and repeatability, which provides scientific quantitative analysis method of fructus cnidii in dafeng wan.

    key words：dafeng wan；fructus cnidii；hplc；content determination
 
    大风丸收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第六册,原标准中只有鉴别项检查,没有含量控制项。WwW.11665.CoM本处方中的君药独活为伞形科植物重齿当归angelica pubescens maxim. f.biserrata shan et yuan的干燥根,蛇床子素为独活的主要成分之一。为更好控制产品质量,我们参照有关文献[1],对大风丸中蛇床子素的含量测定进行了试验研究。

　　1  仪器与试药

    高效液相色谱仪(spd-10a,日本岛津)；紫外分光光度仪(上海康化生化仪器制造厂)；超声波清洗器(sk3200h,上海科导超声仪器有限公司)。蛇床子素对照品(批号11082-200305,供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供；大风丸(批号20070401、20070402、20070403)由河南百年康鑫药业有限公司提供。其他试剂均为分析纯

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件与系统适用性试验

    以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为甲醇-0.1 mol/l硫酸铵溶液(70∶30),用硫酸溶液(1→5)调ph为2.5；检测波长为322 nm；流速为1 ml/min；柱温为室温。理论塔板数按蛇床子素峰计算应不低于1 500。

　　2.2  溶液的制备

    对照品溶液的制备：精密称取蛇床子素对照品适量,加甲醇制成每1 ml中含蛇床子素40 μg,摇匀,即得。

    供试品溶液的制备：取本品研细,取约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入10 ml甲醇,称定重量,超声(功率135 w,频率59 khz)20 min,放冷后再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

　　2.3  线性关系考察

    精密称取蛇床子素对照品适量,用甲醇溶解,制成每1 ml含1.01 mg蛇床子素的溶液。分别精密吸取适量,稀释成10.1、20.2、40.4、60.6、80.8 μg/ml 5个不同浓度样品,分别吸取上述溶液各10 μl进样,测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,蛇床子素的浓度为横坐标绘制标准曲线,得回归方程：y＝9.964 406×10-3x－1.355 684×10-1,r＝0.999 5(n＝5),表明蛇床子素在0.101～0.808 μg之间呈良好的线性关系。

　　2.4  精密度试验

　　精密吸取对照品溶液(40.4 μg/ml)10 μl,连续进样5次,记录峰面积,结果rsd＝0.63%,表明本法精密度良好。

　　2.5  重复性试验

    取本品(批号20070401)20丸,研细,混合均匀,取5份,每份0.5 g,精密称定,照供试品溶液制备方法制成供试品溶液,照上述色谱条件进行测定,结果rsd＝0.64%,表明本法重复性良好。

　　2.6  稳定性试验

    取同一供试品溶液(批号20070401),分别在0、2、4、6、8 h进样10 μl,测定蛇床子素峰面积,rsd＝3.29%(n＝5),表明供试品溶液在8 h内稳定。

　　2.7  加样回收率试验

　　精密称取已知含量的同一批号供试品(批号20070401,蛇床子素含量0.988 3 mg/g)6份,取样量为0.25 g,精密称定,分别加入蛇床子素对照品,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液,进样量10 μl,测定蛇床子素峰面积,计算蛇床子素含量(见表1),平均回收率为98.4%,rsd＝1.40%(n＝6)。  表1  加样回收率试验结果（略）

　　2.8  样品含量测定

　　按照供试品溶液制备方法制备3批供试品溶液并进行含量测定,结果见表2。表2  含量测定结果（略）

　　2.9  阴性试验

　　取缺独活的样品,按供试品溶液制备法制备阴性样品,进样测定,在蛇床子素相应位置无峰出现,说明阴性样品的其他成分无干扰。色谱图见图1。

　　3  讨论

    本品中每克含独活以蛇床子素(c15h16o3)计,均不少于0.9 mg,由于各地独活药材差别较大,因此,暂定本品每克含独活以蛇床子素(c15h16o3)计,不得少于0.8 mg。

    供试品溶液制备中对超声时间进行了试验,分别超声处理(功率135 w,频率59 khz)10、20、30 min,结果超声20 min即可提取完全。采用高效液相色谱法测定蛇床子素含量,方法简便快速,稳定可靠,专属性强。

【参考文献】
  　[1] 李 立,丁 刚,吴菊蕙,等.hplc法测定风湿液中蛇床子素的含量[j].华西药学杂志,2000,15(3)：203－204.