作者：樊凯芳，唐迎雪，曹淑霞
【摘要】 目的观察三化汤对脑缺血-再灌注老龄大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(tnf-α)含量的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型组、三化汤组、西药对照组（尼莫地平）、中成药对照组（血栓心脉宁）。采用双侧颈总动脉结扎方法制备脑缺血模型，脑缺血1 h后，再灌注30 min。取每组大鼠右侧大脑半球的前2/3，再称取脑组织50～100 mg，制成脑匀浆，检测tnf-α含量。结果模型组比正常对照组tnf-α含量显著升高（p＜0.01）；用药各组比模型组tnf-α含量明显降低（p＜0.05）；其中三化汤组比尼莫地平tnf-α含量降低明显（p＜0.05），和血栓心脉宁组无明显差异（p＞0.05）。结论三化汤能明显降低脑缺血-再灌注老龄大鼠脑组织tnf-α的含量，对脑缺血-再灌注老龄大鼠脑组织损伤有较好的保护作用。
【关键词】 三化汤；脑缺血-再灌注；大鼠； 肿瘤坏死因子-α
20世纪50年代以来，中风病成为三大死因之一，防治中风病已成为广大医疗工作者面临的重要课题。脑缺血-再灌注后，脑内大量表达的肿瘤坏死因子-α(tnf-α)参与了脑缺血-再灌注脑损伤的过程，引起和加重了脑损伤。www.11665.cOm因此，降低脑组织内tnf-α的含量对防治中风具有重要意义。笔者秉前贤认识，认为气机升降逆乱是急性中风病病机的关键，气机升降逆乱，致使气血和津液运行失常，产生痰、瘀、风、火，阻于脉络，壅塞清窍或血溢脑脉之外，发为中风。本文以老龄大鼠为研究对象，选用具有调气作用的三化汤，观察了其对脑缺血-再灌注老龄大鼠脑组织tnf-α含量的影响，以期为中医药防治中风的应用及作用机制提供依据。
1 材料与仪器
1.1 动物25～28周龄清洁级wistar大鼠55只，体质量400～500 g，雌雄各半。由上海斯来克实验动物有限责任公司提供，符合普通实验动物质量标准［合格证号：scxk(沪)2003-0003］。
1.2 药物
1.2.1 中药材大黄、枳实、厚朴、羌活均购于山东中医药大学门诊部。经山东中医药大学中药鉴定教研室鉴定，分别为蓼科多年生草本植物掌叶大黄rheum palmatum l.的根茎，芸香科植物酸橙citrus aurantium l.的干燥幼果，木兰科植物厚朴magnolia officinalis rehd. et wils.的干燥根皮，伞形科植物羌活notopterygium incisum ting ex h. t. chang 的干燥根茎。
1.2.2 三化汤流浸膏制备枳实、厚朴、羌活各120 g，加2.5倍体积的水，浸泡1 h，提取挥发油10 h后，加入等份的大黄120 g煎煮20 min滤出。同法煎煮3遍，混合滤出液，浓缩至每毫升制剂相当于1 g生药，加入挥发油，灭菌，4℃冰箱保存备用。
1.2.3 中西对照药尼莫地平：山东新华制药股份有限公司生产，国药准字h10910080；血栓心脉宁：吉林省辉南长龙生化药业股份有限公司生产，国药准字z22024485。中成药和西药购于济南宏济堂药店。
1.3 仪器tn型托盘式扭力天平(上海第二天平仪器厂)；漩涡混匀器(江苏省宝应县水泗实验设备厂)；冰箱(arctic)；低速自动平衡离心机(北京医用离心机厂)；721分光光度计(山东高密分析仪器厂)；智能放免γ测量仪(上海原子核研究所日环仪器一厂，sn-695b型)。
1.4 试剂0.3%戊巴比妥钠(上海化学试剂厂，分析纯，批号：051028)；0.9%生理盐水(济南永宁制药股份有限公司，批号：0021100)；tnf-α放免试剂盒，购于解放军总医院科技开发中心放免所。
2 方法
2.1 分组将实验动物随机分为：正常对照组（ⅰ组）；模型组（ⅱ组）；三化汤方组（ⅲ组）；尼莫地平组（ⅳ组）；血栓心脉宁组（ⅴ组）。
2.2 给药方法常规饲养1周后开始给药，药物剂量根据人鼠体表面积折算等效比率计量表［1］，按成人(体重70 kg)临床用量的10倍换算，正常对照组、模型组以生理盐水4 ml/kg灌胃；三化汤组以中药4 ml/kg灌胃；西药对照组以尼莫地平片剂6 mg/kg灌胃；中成药对照组以血栓心脉宁0.72 g/kg灌胃。以上各组均为1次/d，灌胃10 d。
2.3 模型建立与取材
2.3.1 建立模型参照改良的pulsinelli法［2］，采用双侧颈总动脉结扎法，分离双侧颈总动脉，用无损伤性动脉夹夹闭1 h，造成前脑(颈总动脉的供血区)缺血模型；再灌30 min造成脑缺血-再灌注脑损伤模型。
2.3.2 取材取右侧大脑半球的前2/3，再称取其中50～200 mg，与0.9%生理盐水按1∶9比例制成10%脑匀浆，离心(3000～4000 r/min，10～15 min)，取上清液，测tnf-α含量。测定严格按试剂盒要求操作。
2.4 统计方法实验数据采用统计软件spss13.0进行统计分析处理，以±s表示，采用方差分析。
3 结果
结果见表1。表1 对脑缺血-再灌注老龄大鼠tnf-α含量的影响（略）
由表1可见,与正常对照组比，模型组tnf-α含量显著升高（p＜0.01）；与模型组比，用药各组tnf-α含量均明显降低（p＜0.05）；其中三化汤组比尼莫地平组tnf-α含量降低明显（p＜0.05），和血栓心脉宁组无显著性差异（p＞0.05）。
4 讨论
脑缺血-再灌注后，tnf-α的大量表达可增加白细胞-内皮细胞粘附分子的表达，激活脑内巨噬细胞、内皮细胞及小胶质细胞产生炎性代谢产物，促进白细胞介素及粒细胞-单核细胞集落因子的释放，从而参与了急性脑缺血的炎症发生过程；tnf-α对毛细血管有直接毒性作用，导致微小动脉痉挛，增加毛细血管通透性，开放血脑屏障，加重外周白细胞浸润及脑水肿；可诱导血管内皮细胞表达粘附分子，使白细胞、血小板粘附于微血管内，导致微血管阻塞，同时诱导血小板活化因子、组织因子、ⅷ因子的释放，从而促使一些凝血因子活化，增加了血栓形成的可能性；可拮抗某些抗凝机制，增加纤维蛋白溶酶原激活物抑制剂，使纤维蛋白溶解降低，最终促成血管内皮细胞表面由抗凝到促凝的转化，进一步加重了脑缺血-再灌注损伤。本实验结果表明，模型组比正常对照组脑组织tnf-α含量显著升高；用药各组比模型组脑组织tnf-α含量均明显降低，其中三化汤组比尼莫地平组tnf-α含量降低明显，和血栓心脉宁组无显著性差异，说明三化汤能明显降低脑缺血-再灌注老龄大鼠脑组织tnf-α含量，对脑组织有较好的保护作用。
【参考文献】
［1］陈奇，王建华．中药药理研究方法学，第1版［m］.北京：人民卫生出版社，1993：33.
［2］刘亚敏,张赐安，徐秋英，等.芳香开窍法对全脑缺血-再灌注大鼠脑水肿及超氧化物歧化酶、丙二醛水平的影响［j］.中国中医药信息杂志，2002,7(7):22.
