泽泻汤对代谢综合征大鼠神经肽及其y1受体的影响
【关键词】 泽泻汤;代谢综合征;神经肽y;神经肽y y1型受体(npyy1r)
【摘要】 目的 观察泽泻汤对代谢综合征(ms)大鼠血浆神经肽(npy)，下丘脑npy及其y1r 表达的影响，探讨其可能机制。方法 用高糖高脂饲料喂饲建立ms大鼠。将23只ms大鼠分为3组，分别给盐水、泽泻汤、盐酸西布曲明。4 w后，测体重、血糖、三酰甘油(tg)，放免法检测血浆npy;免疫组化法检测下丘脑npy及其y1r表达。结果 与盐水组相比，泽泻汤组大鼠体重、血糖、tg、血浆npy水平、下丘脑npy及其y1r表达的平均光密度均显著降低(p<0.05)。结论 泽泻汤对ms大鼠有良好的治疗作用，其机制可能与抑制下丘脑npy及其y1r表达有关。
【关键词】 泽泻汤;代谢综合征;神经肽y;神经肽y y1型受体(npyy1r)
【abstract】 objective to observe the effect of zexie tang on plasma neuropeptide y (npy) and hypothalamus npy & y1 receptor in metabolic syndrome (ms) rats and the possible mechanism. methods ms rats were made by feeding high sugar & fat diet.23 ms rats were randomly divided into salt water, zexie tang and sibutramine groups. body weight, glucose (glu), triacylglyceride (tg), and plasma npy of the rats were measured after four weeks. meanwhile, npy & y1r in hypothalamus were tested by immunohistochemistry. the density mean was analyzed by imagepro plus 6.0. results zexie tang could inhibit the growth of body weight and reduce the levels of glu, tg and plasma npy (p<0.05). npy & y1r in hypothalamus were significantly lower in zexie tang group than those in the saltwater group (p<0.05).conclusions there is obvious therapeutic effect of zexie tang on ms rats, which is possibly related to its inhibition of the synthesis of npy and the expression of y1r in hypothalamus.
【key words】 zexie tang; metabolic syndrome; npy; y1 receptor subtype (npyy1r)
代谢综合征(ms)是一种涉及多种代谢异常的疾病状态，其中以肥胖(超重)、血压、血糖和血脂异常四项为突出，患者因心脑血管事件死亡的危险性显著增加，成为威胁现代人类健康的突出问题。WWW.11665.com神经肽y(npy)广泛分布于中枢和外周神经系统，是迄今为止摄食最强有力的刺激因子，此外还具有影响代谢、促进胰岛素的分泌、促进血管平滑肌细胞增殖等作用〔1〕，因此与ms的发生发展有着密不可分的关系。npy有6种受体亚型(y1～y6)，促食欲作用部分通过y1受体(y1r)介导〔2〕。本研究观察泽泻汤对ms治疗作用及其机制。
1 资料与方法
1.1 实验动物
选用离乳健康雄性sd大鼠50只，体重55～65 g，普通清洁级，购自我校实验动物中心，动物生产许可证号：scxk(鲁)20050015。基础饲料由实验动物中心提供，高糖高脂饲料参照文献〔3〕改进，配方为：普通饲料56%，猪油10%，白糖10%，奶粉10%，蛋黄12%，豆粉2%。
1.2 药物和试剂
盐酸西布曲明胶囊(太极集团重庆涪陵制药厂有限公司)，生理盐水(山东齐都药业有限公司)，中药泽泻、白术均购自山东中医药大学中鲁医院。奥林巴斯诊断产品有限公司提供的血糖、三酰甘油(tg)试剂盒， npy放免检测试剂盒(北京普尔伟业生物科技有限公司)。npy检测用免疫组化试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司，npyy1r检测用一抗和二抗均购自上海优宁维科技有限公司，批号分别为bp653/pb1105和cghl35p。
1.3 主要仪器
电子动物称(北京六一仪器厂)，冷冻离心机ddl5型(上海安亭科学仪器厂)，802离心机(上海分析仪器厂)，sn682型放射免疫γ计数器(上海核福光电仪器有限公司)，olympus au2700全自动生化分析仪(日本东芝公司)，石蜡切片机和研究显微镜(美国光学仪器公司)。
1.4 ms动物模型建立
离乳sd雄性大鼠50只，随机分为对照组10只给基础饲料，造模组40只给高糖高脂饲料。实验期间均自由摄食和饮水，自然光照，温度20～25℃，湿度50～70%，通风良好，喂养8 w后，称量体重。以造模组体重超过对照组平均体重加1.96倍标准差为ms大鼠，共得到23只。对照组和模型组大鼠禁食禁水12 h，尾静脉取血分离血清，检测血糖、tg。
1.5 分组给药
将23只ms大鼠分为3组：盐水组8只、西药(盐酸西布曲明)组7只、中药(泽泻汤)组8只。盐酸西布曲明胶囊用蒸馏水配置成20 mg/100 ml。中药白术200 g，泽泻100 g按常规方法煎煮浓缩至250 ml，即每毫升含生药1.2 g。三组动物每日定时分别给相应药物和生理盐水灌胃，剂量为0.5 ml/100 g体重，1次/d，连续4 w。
1.6 取材和指标检测
给药4 w后，禁食水12 h，腹腔静脉取血分别分离血清和血浆，以全自动生化分析仪检测血糖、tg，放射免疫分析法检测血浆npy。取血后，迅速分离下丘脑，中性甲醛固定，石蜡包埋，免疫组化检测npy及其y1r表达。按免疫组化试剂盒操作步骤进行，光镜下观察胞浆细胞出现棕褐色颗粒为阳性细胞。高倍镜下(×400倍)下每张切片随机选取5个不重叠的区域拍摄图像，运用imagepro plus 6.0软件分析每张图像的平均光密度表述上述指标的表达强度。
1.7 统计学方法
数据用x±s表示，组间比较行t检验和单因素方差分析，用spss14.0软件。
2 结 果
2.1 对照组和ms大鼠体重、血糖、tg的比较
经高糖高脂饲料喂饲8 w后，筛选出的ms大鼠体重、血糖、tg均显著高于对照组(p<0.01)，ms大鼠具备肥胖、高血糖、高血脂三个条件，符合中华医学会糖尿病分会ms诊断条件〔4〕，见表1。
2.2 泽泻汤对ms大鼠体重、血糖、tg、血浆npy 的影响
给药4 w后，与盐水组比较，各用药组体重、血糖、tg水平均显著降低(p<0.05);中药组血浆npy水平显著降低(p<0.05);药物组之间比较无显著差别(p>0.05)。见表2。表1 对照组和ms大鼠体重、血糖及tg比较表2 各用药组实验动物体重、血糖、tg、npy比较
2.3 泽泻汤对ms大鼠下丘脑npy及其y1r表达的影响
中药组下丘脑的npy、npyy1r平均光密度(0.43±0.01，0.40±0.01)均显著低于盐水组(0.45±0.02，0.44±0.01)(p<0.05);西药组npy及npyy1r平均光密度(0.44±0.02，0.42±0.02)略低于盐水组，但差异无显著性(p>0.05);中药组npyy1r平均光密度显著低于西药组(p<0.01)。
3 讨 论
现在医家多认为ms的基本病因在痰浊〔5〕，关键在脾。本项研究选用了有健脾利水，燥湿除饮之功的泽泻汤。该方出自《金匮要略·痰饮咳嗽病脉证并治第十二篇》25条，由泽泻5两、白术2两相伍，泽泻利水除饮，重在祛湿，使已停之饮从小便而去;白术补脾去湿，重在健脾，使水湿既化而不复聚。本结果说明泽泻汤能抑制体重增长，降低血糖，改善血脂紊乱，对ms有较好的治疗作用。
npy作为一种很强的食欲刺激剂，主要分布于下丘脑弓状核神经元，少部分分布于室旁核、背中核等区域，并形成相互投射的神经环路〔6〕，对机体能量摄入、贮存、消耗起重要作用。在正常情况下，脑npy水平增加一方面促进食欲，增加进食;另一方面，npy可降低交感神经对棕色脂肪的作用，使机体产热减少，同时npy可以增加白色脂肪的脂蛋白脂肪酶的mrna水平，提高脂肪组织中乙酰辅酶a羧化酶活性，刺激脂肪的生成和堆积，而产生肥胖。npy共有6种受体(y1y6)同其结合，但同饮食关系最密切的是y1和y5。y1受体少量分布在下丘脑，运用其激动剂能有效刺激进食，拮抗剂则抑制进食，提示npy的促食欲作用至少部分通过y1受体介导。王重建等〔2〕研究发现饮食诱导肥胖大鼠下丘脑npy及其受体y1、y2、y5mrna的表达水平显著高于对照组，提示npy及其受体的高水平表达可能是导致肥胖大鼠摄入热量过多的原因之一。本研究结果提示泽泻汤可能通过减少下丘脑npy及其y1r表达抑制摄食，减少热量的摄入，促进机体产热而发挥治疗ms的作用。总之，泽泻汤可以减轻体重、降低血糖、tg，发挥较好的治疗ms的作用，其作用可能与降低摄食促进因子npy水平，减少下丘脑npy及其y1r表达等方面有关，但是关于其治疗机制有待于进一步探讨。
【参考文献】
1 cho yr,kim cw.neuropeptide y promotes betacell replication via extracellular signalregulated kinase activation〔j〕.biochem biophys res commun，2004;314(3)：77380.
2 王重建,杨年红,许明佳,等.肥胖和肥胖抵抗大鼠神经肽y及其受体基因表达的研究〔j〕.营养学报，2006;28(2) ：1169.
3 李 媛，王保芝，岂春晓，等.一种新的肥胖大树模型的制备方法〔j〕.河北医科大学学报，2005;26(4)：3057
4 中华医学会糖尿病学分会代谢综合征研究协作组.中华医学会糖尿病学分会关于代谢综合征的建议〔j〕.中华糖尿病杂志，2004;12(3)：15661.
5 杨 芳，陈一飞.从痰瘀论治代谢综合征的思考〔j〕.中国医疗前沿，2009;4(16)：78.
6 kalra ps，kalra sp. use of antisense oligodeoxynucleotides to study the physiological functions of neuropeptide y〔j〕.methods，2000;22(3)：24954.
