作者：李莹，孙卓然，袁玮，刘圆，刘超

【摘要】  　　目的采用共有峰率和变异峰率双指标序列法分析不同种石斛的相似性。方法采用石油醚、氯仿、95 %乙醇、水等4种溶剂分别提取不同种石斛药材不同极性化学成分。结果叠鞘石斛和金钗石斛的相似度为33.3 %；叠鞘石斛和马鞭石斛的相似度为36.2 %；鼓锤石斛和金钗石斛的相似度为35.8 %；鼓锤石斛和马鞭石斛两者的相似度为42.3 %。结论该方法操作简单、准确，采用4种提取物综合分析，所得结果专属性强，准确性高。

【关键词】  共有峰率； 变异峰率； 双指标序列法； 石斛属； 相似性

　　abstract：objectiveto analyze the relative similarity in species of herba dendrobii by the method of common and variant peak ratio in uv and dual-index sequence analysis. methodsligroin, chloroform, 95 % ethanol and water were used to extract different chemical constituents respectively. resultsthe relative similarity of d. denneanum kerr and d. nobile lindl was 33.3 %; of d. denneanum kerr and d. fimbriatum hook was 36.2 %; of d. chrysotoxum lindl and d. nobile lindl was 35.8 %; that of d. chrysotoxum lindl and d. fimbriatum hook was 42.3 %. conclusionthe method and the results of the comprehensive analysis of these four extracts are simple, exclusive and accurate.

　　key words：common peak ratio;   variant peak ratio;   dual index;   herba dendrobii;   relative similarity
   
　　石斛属dendrobium为兰科(orchidaceae)最大的属之一［1］，为多年生草本植物，以新鲜或干燥茎入药。wwW.11665.cOm我国76种石斛属植物中有三十多种作为药用。石斛首先记载于《神农本草经》，在我国传统医学中经历了2000年以上的应用历史，具有滋阴清热、益胃生津, 润肺止咳等功效, 常用于热病伤津、口干烦渴、病后虚热等多种病症［2］。现代药理研究证明石斛具有抗衰老、抗肿瘤、降低血糖、增强机体免疫力、抗血小板聚集等作用, 在治疗胃肠道疾病、白内障、关节炎、血栓闭塞性脉管炎及慢性咽炎等疾病有很好的疗效［3，4］。《中国药典》2005年版收载的品种有金钗石斛dendrobium nobile lindl、铁皮石斛dendrobium candidum wall.ex. lindl和马鞭石斛dendrobium fimbriatum hook。石斛为常用名贵药材,野生资源濒临灭绝，家种石斛规模较小，满足不了临床和新药开发的需要；而且民间药用石斛品种较复杂和繁多，它们能否替代药典品种入药，是迫切需要解决的问题。因此，本实验拟采用紫外-可见分光光度法（二阶导数法）测定不同品种石斛的4种提取部位指纹性特征图谱，并判断不同品种石斛药材的亲缘性及其近似程度，以期能寻找到石斛新的药用资源，为科学、合理和正确使用该类药材提供实验数据。

　　1  仪器与试药
   
　　uv760crt紫外分光光度仪（上海分析仪器厂），kq-250b型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），水(重蒸水)，其它试剂均为分析纯。石斛药材收集于云南、四川夹江等地，药材均经刘圆教授、彭朝忠副教授鉴定。药材来源见表1。表1  石斛药材来源（略）

　　2  方法与结果

　　2.1  样品溶液的制备将石斛药材样品在45 ℃烘干2 h，粉碎过60目筛，分别精密称取药材粉末0.250 g，置于50 ml具塞锥形瓶中，精密加入20 ml石油醚，超声处理1 h ，过滤，用石油醚洗涤滤渣，合并滤液，定容至50 ml，作为样品溶液；挥去样品残留的石油醚，精密加入20 ml氯仿，超声处理1h ，过滤，用氯仿洗涤滤渣，合并滤液，定容至50 ml，作为样品溶液；95 %乙醇、水组样品制法同上。石油醚、氯仿测定原液稀释10倍，95 %乙醇提取液稀释20倍，水提取液稀释10倍（使吸收度a<1或接近1），在这样的吸光度范围内，峰的最大吸收波长基本不随浓度变化而变化，以对应的溶剂为参比溶液进行紫外指纹图谱测定［5］。

　　2.2  最佳提取方法和时间的确定实验结果表明，采用超声提取法，石油醚、氯仿、95 %乙醇和水的提取物在1 h均可达到最大且稳定的提取率。

　　2.3  稳定性实验实验结果表明，4种溶剂提取液保存在0～4℃在24 h内均保持稳定。

　　2.4  重复性实验在相同条件下，平行测定3份石油醚提取物的紫外指纹图谱具有良好的重复性，共有峰率大于89 %。

　　2.5  不同种石斛的指纹图谱及数据叠鞘石斛、鼓锤石斛、金钗石斛和马鞭石斛各个部位指纹特征图谱分别见图1～4；数据见表2～3。表2 不同种石斛药材的石油醚、氯仿、95 %乙醇和水提取液指纹图谱共有峰的识别结果，表3 不同品种石斛药材的4个部位的共有峰率和变异峰率双指标序列分析结果（略）。

　　2.6  不同种石斛药材不同溶剂提取物共有峰率和变异峰率双指标序列分析结果利用共有峰率和变异峰率双指标序列分析法［5～9］对不同品种石斛药材的4种提取物进行相似性研究和分析。从表3可得出，4个品种石斛药材样品中，s1（叠鞘石斛）和s3(金钗石斛)的相似度为33.3%；s1（叠鞘石斛）和s4（马鞭石斛）的相似度为36.2%；s2（鼓锤石斛）和s3(金钗石斛)的相似度为35.8%；s2（鼓锤石斛）和s4(马鞭石斛)两者的相似度为42.3%。

　　3  讨论
   
　　从本实验结果来看，利用共有峰率和变异峰率双指标序列分析法对不同种石斛药材的石油醚、氯仿、95 %乙醇和水等4种提取物进行分析，其4个部位的相似度均比较低。根据生物亲缘关系越近，生物中所含的成分越相似这个理论，在生物大类成分相近似程度的角度来判定两种同科同属植物的亲缘相近似程度，可以为两种药材是否能替代使用提供科学依据。
   
　　本实验采用了4种提取物进行综合分析，以确定非药典收载的叠鞘石斛和鼓锤石斛所含的成分与《中国药典》收载的金钗石斛和马鞭石斛所含的成分的相似程度，进而确定其亲缘关系，所得结果专属性强，准确性高，希望能为寻找石斛新的药用资源和为科学、合理和正确使用该类药材提供实验数据。
   
　　叠鞘石斛和鼓锤石斛能否替代《中国药典》收载的金钗石斛和马鞭石斛入药，还需要进行更多化学成分分析以及药理实验研究。
   
　　本实验采用超声提取法，该法操作简单，对实验条件要求比较低，且目前超声提取方法被广泛应用于药材中成分的提取，故实验的可重复性较强。

【参考文献】
  　　［1］白音，包英华，金家兴，等．我国药用石斛资源调查研究［j］．中草药，2006，37（9）：附4．

　　［2］包雪生，顺庆生，张申洪，等．中国药用石斛图志［m］．上海：上海科学技术文献出版社，2005:32．

　　［3］郭勇，程晓磊．石斛在恶性肿瘤治疗中的作用［j］．浙江中西医结合杂志,2007，17（7）：454.

　　［4］陈晓梅,郭顺星．石斛属植物化学成分和药理作用的研究进展［j］．天然产物研究与开发，2001，13（1）：70.

　　［5］袁久荣,岳邱华,邹华彬．丹皮紫外指纹图谱共有峰率和变异率双指标序列分析［j］．世界科学技术-中医药现代化·中医基础,2004,6(6)：31.

　　［6］邹华彬,袁久荣,杜爱琴,等．甘草水提取物红外指纹图谱及双指标序列分析法［j］．中成药,2004，26（10）：779.

　　［7］刘圆,孟庆艳,彭镰心,等．共有峰率和变异峰率双指标序列法分析藏药材红毛五加特定（指纹）图谱［j］．药学分析杂志，2007,27(8)：1182.

　　［8］孟庆艳，李莹，刘圆，等．共有峰率和变异峰率双指标序列法分析藏药材红毛五加与濒危药材刺五加的亲缘相似性［j］．西南民族大学学报，2008，34（2）：290.

　　［9］邹华彬,袁久荣,杜爱琴.甘草氯仿提取物红外指纹图谱及双指标序列分析法［j］．中国中药杂志,2005,30(1)：16.